一、耳蜗外毛细胞Prestin的研究进展（论文文献综述）
李胜利,武坤毅,姬媛媛,任晓勇[1]（2020）在《水杨酸长期注射对老年性耳聋的防护作用》文中认为目的本研究通过应用多种剂量的水杨酸长期慢性注射方法,来防治年龄相关老年性聋DBA/2J小鼠的听力损失,拟选择有效的水杨酸剂量,达到防治老年性聋的目的。方法选用快速老化的年龄相关老年性聋DBA/2J小鼠,各组随机选取10只小鼠,从4周龄开始用100、150、200和250mg/Kg的水杨酸腹腔连续注射30天,对照组用同剂量的生理盐水注射,在试验前和治疗后测定动物的ABR反应阈值。在治疗30天后,动物麻醉处死,3只动物耳蜗分离取出,耳蜗行全基底膜免疫组化prestin表达标记;3只动物行扫描电镜观察和硝酸银染色全耳蜗铺片毛细胞计数观察;另3只动物行耳蜗蛋白提取Western Blotting蛋白印痕测定和全耳蜗RNA提取RT-PCR测定。结果水杨酸长期慢性注射治疗30天后,200mg治疗组的效果最好,ABR反应阈值较治疗前没有差异,而其它各组的ABR反应阈值较治疗前均有上升,其ABR反应阈值治疗前与治疗后的差值依次分别为:200mg治疗组-0.37dBSPL,100mg治疗组11.15dBSPL,250mg治疗组12.68dBSPL,150mg治疗组16.72dBSPL。全耳蜗毛细胞计数结果为:200mg治疗组的毛细胞存活百分率最好,表现为耳蜗顶回基本存活,中回大部分毛细胞存活,基底部仍有少量毛细胞存活。其次为100mg治疗组,而150mg和250mg治疗组较差,毛细胞损失最严重的是盐水对照组。各组的ABR反应阈值与毛细胞计数结果基本一致。耳蜗基底膜行免疫组化prestin表达标记可见,200mg治疗组的prestin表达荧光最强,其次是100mg治疗组,150mg治疗组较弱,而250mg治疗组和盐水组更弱。Western Blotting蛋白印痕测定和全耳蜗RNA提取RT-PCR测定亦证明同样的结果。结论本研究证明200mg的水杨酸长期慢性注射可以有效的防治老年性聋的发展进程,合适剂量的水杨酸可以上调耳蜗毛细胞prestin的表达,达到补偿因老年退化导致的prestin表达下降,使耳蜗毛细胞的损失减少,听功能减退明显减缓,但要彻底阻止老年性聋的发展,尚需联合其它方法进行更广泛和深入的研究。
方巧军[2]（2020）在《羟丙基-β-环糊精对毛细胞鞘脂代谢的调控及死亡命运的影响》文中认为WHO最新报告指出,全球大约有4.66亿人患有听力损失,预计到2050年患病人数将增加到9亿。感音神经性聋作为耳聋中重要的分类,主要是由于耳蜗毛细胞、听神经或者听觉中枢传导障碍引起的。目前研究表明,感音神经性聋主要与噪声、药物毒性等因素有关。随着现代社会的迅猛发展,针对各类疾病的药物开发也在快速的发展,然而随着药品种类的增加和药物在体内的积累所带来的的副作用也逐渐显现出来,其中以耳毒性尤为明显。因此对临床使用药物的耳毒性及其作用机制的研究具有重要的理论和临床实践意义。环糊精（Cyclodextrin,CD）是一种由淀粉中提取出来的一系列环状低聚糖类的总称。其具有疏水性内腔结构和亲水性外表面,因此能有效增加客体分子在水中的溶解度。羟丙基-β-环糊精（Hydroxypropyl-β-cyclodextrin,HPβCD）作为环糊精醚类衍生物,广泛应用于食品、农业、日用化工及医药等诸多领域。相对于环糊精及其他衍生物,HPβCD具有良好的助溶性和低毒性。Niemann–Pick disease type C（NP-C）是一种由NPC基因突变导致细胞内胆固醇及鞘脂积累的代谢类疾病,HPβCD能有效降低胆固醇和鞘脂的积累,从而维持细胞正常生理活动。目前研究表明HPβCD通过内吞作用进入细胞内,进而导致线粒体功能紊乱和氧化应激水平的升高。有研究表明胆固醇在耳蜗外毛细胞膜上积累与外毛细胞电运动相关,外毛细胞电运动相关蛋白Prestin可能作为损伤靶点介导胆固醇和HPβCD的结合,从而损伤外毛细胞。但目前HPβCD在细胞内的损伤机制及对prestin敲除小鼠听力的保护作用仍不清楚。我们通过建立HPβCD急性和慢性损伤模型进一步研究HPβCD对外毛细胞的损伤作用,并在此基础上深入研究其分子机制。在急性损伤模型中,我们通过对5周的CBA/J小鼠腹腔注射HPβCD进一步研究其对外毛细胞和ribbon突触的损伤作用。结果显示:HPβCD处理组的小鼠耳蜗外毛细胞从底转到顶转的损伤程度具有剂量依赖性,且在注射高浓度HPβCD（6000mg/kg）后,耳蜗沟底回的内毛细胞出现了部分丢失;而较低浓度HPβCD（4000mg/kg）损伤后,部分小鼠的耳蜗毛细胞和听觉功能没有受到损伤;此外,在更低浓度（1000mg/kg）HPβCD损伤后,虽然小鼠听觉功能和毛细胞未受到影响,但中转和底转的耳蜗ribbon突触明显受到损伤,并且ribbon突触的损伤程度也表现出剂量依赖性。同时,我们还发现HPβCD对外毛细胞的损伤十分迅速,在5000mg/kg HPβCD损伤13小时后,外毛细胞明显受到损伤,并且外毛细胞中LC3-II的表达明显升高,暗示细胞自噬水平的升高。由于急性损伤模型造成的毛细胞损伤过于严重,我们又通过建立HPβCD慢性损伤模型用来研究HPβCD具体损伤机制。最后我们利用代谢组学分析HEI-OC1细胞中HPβCD损伤对鞘脂代谢的影响,结果显示:HPβCD处理后,细胞内鞘氨醇含量明显下降,而神经酰胺和鞘磷脂明显升高,暗示HPβCD对鞘脂代谢具有重要的调节作用。本课题为以后进一步研究HPβCD的耳毒性机制提供新思路和研究基础。
林寿凯[3]（2020）在《耳蜗外毛细胞Prestin过表达病毒载体的构建与应用研究》文中指出噪声性听力损失（noise-induced hearing loss,NIHL）是由于长期暴露在噪声环境中所引起的感音性耳聋,是最常见的职业病之一,NIHL目前尚无有效的治疗方法,根本原因在于耳蜗外毛细胞（Outer hair cells,OHCs）受到噪声的损害发生不可逆性死亡,Prestin蛋白是耳蜗OHCs特有的重要感音功能蛋白,是OHCs电运动以及耳蜗放大效应的分子基础,并在OHCs损伤时呈代偿性升高弥补听力损失。目的通过构建耳蜗毛细胞重组Prestin腺相关病毒-2（AAV-2）载体,为耳蜗Prestin蛋白调控研究提供工具,同时构建一种新型无创的内耳基因转染系统。方法以豚鼠Prestin基因为模板,PCR扩增与提取,利用基因工程技术构建AAV-2-Prestin载体,转染培养的耳蜗毛细胞（HEI-OC1细胞株）后1d、3d、5d采用Western blot检测Prestin的表达水平。将构建好的重组Prestin腺相关病毒2型载体,与原位凝胶混合后经鼓膜穿刺鼓室给药的圆窗途径转染豚鼠内耳,免疫荧光法观察耳蜗组织病毒转染分布,耳蜗基底膜铺片免疫荧光检测绿色荧光蛋白和Prestin的表达及分布,WB检测基底膜Prestin表达水平。结果构建pAAV-EGFP-Prestin原病毒质粒转染HEK-293T细胞后,第1d可见微弱绿色荧光蛋白表达,第3d可见绿色荧光蛋白表达达到高峰;AAV-2-Prestin病毒转染HEI-OC1细胞后,不同转染时间的各组Prestin蛋白表达水平显着增高（F=414.755,P<0.001）,3d和5d组Prestin蛋白表达显着高于1d（P<0.001）,3d组Prestin蛋白表达显着高于5d组（P<0.001）。豚鼠耳蜗给药后第7天开始出现绿色荧光蛋白表达,绿色荧光蛋白分布于耳蜗血管纹、前庭膜、基底膜和Corti器;基底膜铺片显示外毛细胞出现绿色荧光蛋白表达,未见于内毛细胞,14天绿色荧光蛋白表达水平明显增加;豚鼠耳蜗给药后第7天外毛细胞Prestin蛋白表达水平开始增加,14天后增加更显着（P<0.05）,内毛细胞未发现Prestin蛋白的表达。WB检测各组基底膜Prestin蛋白表达水平结果,方差分析结果显示具有统计学差异（F=3644.6729,P<0.05）,组间比较发现对照组与4天组无显着性差异（P>0.05）,7天组Prestin蛋白表达水平明显高于对照组和4天组（P<0.05）,14天组Prestin蛋白表达水平明显高于其它各组（P<0.05）。结论重组腺相关病毒-2-Prestin载体成功构建,具有较好的OHCs转染靶向性和持续性,原位凝胶混合重组相关病毒载体经鼓膜穿刺圆窗途径转染内耳毛细胞是一种新型无创内耳基因转染系统。
齐洁玉[4]（2020）在《血影蛋白Spectrin在听力发育中的作用》文中研究说明听觉系统是听力感觉的知觉系统,其中内耳毛细胞是主要的声音感受器。毛细胞通过起细胞表面的静纤毛感受声音信号产生的机械振动。静纤毛通过由平行排列的肌动蛋白丝构成的小根稳定在毛细胞表面的表皮板中。小根在纤毛摆动的过程提供恒定的机械应力。表皮板含有丰富的肌动蛋白及肌动蛋白相关蛋白如血影蛋白。据文献报道,富有弹性的血影蛋白（Spectrin）可能帮助小根抵抗声音振动产生的机械应力。Spectrin存在于几乎所有细胞中。在大多数细胞膜下,α-spectrin和β-spectrin形成的四聚体作为支架蛋白的组分,与肌动蛋白丝及其它相关蛋白一起维持骨架蛋白的结构从而达到维持细胞形态的作用。已有文献报道,毛细胞表皮板中的αII-spectrin和βII-spectrin在毛细胞正常生理活动中发挥重要作用。然而,针对毛细胞表皮板的研究非常少,富含大量骨架蛋白的表皮板,如何为静纤毛小根提供其必要的稳固性、灵活性支持,目前尚不清楚。因此,借助超高分辨显微成像技术,我们研究了αII-spectrin和βII-spectrin在毛细胞中的超微结构。我们发现αII-spectrin和βII-spectrin在毛细胞,包括内毛细胞和外毛细胞的小根处均形成两排规则的环状结构,该规律结构在小鼠出生后第14天完全形成。毛细胞表皮板包含大量F肌动蛋白（F-actin）丝。F-actin在表皮板形成复杂多样的网络状结构。双色超高成像结果显示,每个Spectrin环均被F-actin环包裹,形成同心环状结构。这种同心环状结构紧紧和F-actin所形成的放射状网络连接,共同形成一个多蛋白组分的网格结构,进而在静纤毛的稳定中发挥非常重要的作用。功能上,利用Cre-Loxp系统在毛细胞中特异性敲除βII-spectrin蛋白(Atoh1-Sptbn1-/-)后,毛细胞表皮板中αII-spectrin的表达降低,静纤毛极性丧失并发生退化或融合现象,毛细胞表皮板形态发生变化,小鼠的听力完全丧失,表明Spectrin和F-actin形成的的网络结构与纤毛的刚性和柔韧性相关,其在维持纤毛和表皮板的结构,以及正常听力功能上有至关重要的作用。最后我们在不同类型听力损伤的小鼠模型中发现,内外毛细胞中的αII-spectrin和βII-spectrin受到了不同程度的损伤,侧面反应该网络结构参与小鼠正常听力的维持。综上,我们在毛细胞中首次发现了Spectrin蛋白的环状结构,该结构在小鼠听力发育过程和维持中发挥非常重要的作用。
黄青[5]（2019）在《水杨酸钠诱导豚鼠螺旋神经节细胞凋亡的PD-1/PD-L1机制的实验研究》文中进行了进一步梳理目的通过建立豚鼠耳毒性模型,明确水杨酸钠（sodium salicylate,SS）能诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion neuron,SGN）凋亡,并探究程序性死亡受体1（programmed cell death protein 1,PD-1）、程序性死亡配体1（programmed death ligand 1,PD-L1）在其中的表达及意义,以期阐明水杨酸钠耳毒性的可能机制并为治疗耳鸣找到新的药物靶点。方法筛选听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）正常（ABR阈值<40dBSPL）、畸变产物耳声发射（distortion product otoacoustic emissions,DPOAEs）能引出的健康豚鼠,共三十只（六十只耳）,采用随机数字表法,分成五组,每组六只。A组:正常对照组（给予生理盐水）;B组:给SS2小时组;C组:给SS3天组;D组:给SS 7天组;E组:给SS 14天组。其中,给药量为每天每千克400毫克,生理盐水和SS的给药方式均为腹腔注射。每组豚鼠均于给药后再次行ABR、DPOAE检测,随后立即过量麻醉处死,取出两侧耳蜗。每组左侧耳蜗做石蜡切片行以下检测:①苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色,观察SGN细胞的数量、形态大小等;②利用免疫组织化学技术,检测PD-1、PD-L1在耳蜗中的表达;③采用原位末端标记技术（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）,研究 SGN细胞凋亡情况。每组右侧耳蜗行硝酸银染色基底膜铺片,观察毛细胞的排列及数量。最后,采用统计学软件（statistical product and service solutions,SPSS）20.0,对实验数据进行分析处理。结果1.听力学检测结果:分析各波的ABR阈值,A组给药前后比较,左右耳差异均无统计学意义（p>0.05）;B、C、D、E组给药后分别与给药前比较,ABR阈值均升高,差异均有统计学意义（p<0.05）;然而,B、C、D、E组给药后,各组间进行比较,左右耳差异均无统计学意义（p>0.05）。DPOAE结果,波形除在A组左右耳均能正常引出外,B、C、D、E组均出现幅值减低或波形不通过。2.HE染色情况:显微镜下观察,A组可见SGN细胞数量多、排列有序、细胞结构清晰可辨,蓝染的细胞核大且圆,红染的细胞质饱满,染色均一;B组可见SGN细胞仍较大,细胞核与细胞质形态不及A组清晰;C组可见SGN细胞数量仍较多,但细胞核染色不均一,出现核碎裂和核溶解的情况;D组观察到SGN细胞较之前几组（A、B、C组）数量、形态均出现明显的改变,细胞小而少,可见核固缩、溶解;E组可见SGN细胞小,形态不规则,数量减少,周围组织稀疏,同时有明显的核固缩、核溶解甚至消失的现象。3.TUNEL实验结果:显微镜下观察,A组未见明显SGN凋亡细胞,B组可见少量阳性着色SGN细胞,C组出现较多SGN凋亡细胞,D、E组SGN凋亡细胞明显增多,各组间进行比较,随SS给药时间的延长,凋亡指数升高,差异有统计学意义（p<0.05）。4.免疫组织化学结果:显微镜下观察,A组中SGN细胞PD-1、PD-L1阳性表达明显;B、C、D、E组与A组相比,SGN细胞PD-1、PD-L1阳性表达均减少,差异有统计学意义（p<0.05）。5.硝酸银染色耳蜗基底膜铺片结果:A组毛细胞排列整齐,无数量缺失;B组外毛细胞排列紊乱,内毛细胞无明显改变;C组外毛细胞出现个别缺失;D组缺失的外毛细胞数量增多;E组外毛细胞出现大片缺失,细胞轮廓不清,内毛细胞无明显改变。结论1.SS给药会引起豚鼠ABR阈值升高。2.SS诱导豚鼠耳蜗SGN细胞凋亡,PD-1/PD-L1可能参与了这一凋亡过程。3.SS给药会引起耳蜗毛细胞的缺失及结构的破坏,且与给药时间有关。
汪雪玲[6]（2018）在《A666多肽介导主动靶向隐形纳米粒对顺铂耳毒性预防作用研究》文中提出目的:耳蜗外毛细胞损伤是导致顺铂引起的听力下降甚至丧失的关键原因。迄今为止,未有被FDA或SFDA批准上市的预防或治疗顺铂耳毒性的药物。本研究着重探讨新型多肽A666修饰,主动靶向外毛细胞药物递送系统作为“靶向定位”、“持续缓释”递送药物的可能性;以地塞米松（dexamathsone,DEX）为模型药物,并进一步以HEI-OC1和顺铂耳毒性豚鼠为体外细胞和体内动物模型,深入研究该主动靶向药物递送系统对顺铂耳毒性的预防作用及潜在作用机制。方法:以马来酰亚胺和单甲氧基末端聚乙二醇-聚乳酸混合物（Mal-PEG-PLA,m PEG-PLA）为载体材料,以DEX为模型药物,采用乳化-溶剂挥发技术优化制备装载有DEX的PEG-PLA隐形纳米粒（DEX-NP）。利用巯基（-SH）与马来酰亚胺基团（-Mal）之间的反应,将末端用赖氨酸修饰的A666多肽与DEX-NP表面PEG末端的马来酰亚胺基团以共价键的方式连接得A666-DEX-NP。该技术新形成的共价键保证抗A666多肽在纳米粒表面修饰的稳定性（不易水解、脱落）。并且可最大限度降低对其构象和活性的影响,以尽可能保护A666与内耳外毛细胞表面高表达的Prestin的识别、结合的能力。采用X射线光电子能谱（XPS）对纳米粒表面进行硫元素分析（S）定性鉴别A666-NP表面A666多肽的成功连接。采用动态光散射测定A666-DEX-NP粒径、Zeta电位,并用透射电镜（TEM）观察其形态和粒径分布,同时采用已有方法测定A666-DEX-NP的包封率、载药量及其体外药物释放特性。用香豆素-6标记多肽A666修饰PEG-PLA纳米粒（A666-coumarin 6-NP）,研究经圆窗膜给药后A666-NP在耳蜗内的分布;测定A666-DEX-NP圆窗膜给药后不同时间点外淋巴液中的地塞米松浓度,明确A666-DEX-NP经圆窗膜给药后的耳蜗分布及释放特征;通过已构建顺铂耳毒性动物豚鼠模型,明确A666-DEX-NP经圆窗膜给药后拮抗顺铂耳毒性的效果;利用分子生物学实验手段对A666-DEX-NP抗顺铂耳毒性作用机制进行了初步研究。结果:通过经典的巯基-氨基化学反应将A666多肽连接到纳米粒表面,XPS分析A666-NP纳米粒表面有0.4%左右的S元素,而NP未检测到S元素,证实A666成功连接。最终获得A666-DEX-NP表面圆整光滑,平均粒径为157.80±14.33 nm,表面电位为-32.53±0.64 m V,包封率为1.20±0.33%,载药量为0.44±0.12%,体外人工淋巴液中缓释长达14 d。香豆素-6示踪A666-NP（A666-coumarin 6-NP）,呈现时间依赖性HEI-OC1细胞内摄取特性;与prestin免疫荧光染色叠合证实A666-prestin相互作用摄取进入细胞。A666-coumarin6-NP经圆窗膜给药1 h后,A666-NP“定位”聚集于外毛细胞;而无多肽修饰NP未观察到外毛细胞定位现象。细胞学实验表明,A666-DEX-NP在20,40,80 mg/ml浓度下显着拮抗顺铂（30μM,24 h）细胞毒性;80 mg/ml浓度下有效抑制顺铂引起细胞凋亡。然而,相同浓度下DEX和DEX-NP并未表现出顺铂细胞毒性抑制和细胞凋亡拮抗作用。A666-DEX-NP经圆窗膜给药后,在内耳淋巴液中持续释放约48 h;而相同剂量的DEX,给药6 h后即被完全清除。由此,A666-DEX-NP体现出优良的“持续”累积释放药物,长时间维持有效药物浓度特性,这为DEX拮抗顺铂引起的听力下降提供了有力保障。基于此,顺铂腹腔注射前1 h,圆窗膜给于A666-DEX-NP,3 d后观察到在4 k Hz,8 k Hz和16 k Hz频率下对豚鼠听力有显着的保护作用,进一步研究证实A666-DEX-NP对顺铂耳毒性保护作用可能是通过抑制caspase-3的活化,增加Bcl-2的表达实现。结论:本研究首次合成制备多肽A666修饰,外毛细胞主动靶向,载DEX的隐形纳米粒（A666-DEX-NP）,并对其体内外“靶向定位”、“持续缓释”特性进行了一系列深入研究。本研究证实是A666-DEX-NP具有良好的外毛细胞靶向特性,是内耳持续递送药物的理想载体,同时,A666-DEX-NP经圆窗膜给药能有效地拮抗顺铂在4 k Hz,8 k Hz和16 k Hz频率下引起的听力下降。该研究为探索顺铂耳毒性预防或治疗策略提供新的思路和策略。
李胜利,武坤毅,张阳[7]（2018）在《复聪汤对年龄相关听力损失DBA/2J小鼠耳蜗外毛细胞prestin表达的影响》文中研究说明目的:探讨年龄相关听力损失（AHL）小鼠在服用中药复聪汤后对耳蜗马达蛋白prestin表达的影响,明确调控马达蛋白prestin表达在AHL方面的预防和治疗作用及机制。方法:采用快速老化DBA/2J小鼠,刚出生和4周龄的小鼠各40只,随机分成中药治疗组和对照组各20只。中药治疗组每天口服中药复聪汤,而对照组给予正常饮水,在治疗前及治疗1、2、3、4个月后测定ABR反应阈值。治疗4个月后,实验动物耳蜗取材,快速固定,耳蜗铺片行毛细胞记数和免疫组化荧光prestin标记染色。在光镜下对全耳蜗毛细胞进行记数,激光共聚焦显微镜进行prestin蛋白表达观察和荧光表达强度测定。结果:刚出生DAB/2J小鼠中药治疗4个月后的ABR反应阈值较对照组低,耳蜗毛细胞顶到中回的存活率高于对照组;4周龄DAB/2J小鼠中药治疗后2～3个月的ABR反应阈值较治疗前的差异不大,但均与对照组有显着差异（P<0.01）,耳蜗毛细胞顶到中回的存活率较对照组明显高,但较刚出生DAB/2J小鼠的毛细胞存活率为低。2批DAB/2J小鼠在中药治疗4个月后的耳蜗毛细胞prestin表达强度上较各自的对照组高。结论:中药复聪汤可以上调耳蜗毛细胞prestin蛋白的表达,促进耳蜗毛细胞存活,阻止毛细胞死亡的进程,从而有效预防和延缓老年性聋的发展进程,早期预防和治疗效果更好。
李胜利,武坤毅,任晓勇[8]（2018）在《年龄相关听力损失DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞马达蛋白-prestin表达下调与耳聋的关系》文中研究指明目的老年性聋亦称年龄相关性听力损失,主要是听觉器官退行性改变所致。许多研究已证明prestin与内耳的声强感觉和频率分辨密切相关,我们推测老年性聋与耳蜗毛细胞prestin的表达具有一定的关系,本研究探讨prestin在耳蜗毛细胞表达的改变在老年性聋发病机制的作用,期望为老年性聋的防治提供依据。方法采用快速老化DBA/2J小鼠,对4,8,16和32周龄（W）的48只小鼠进行听觉脑干诱发电位（ABR）测定。耳蜗快速取材固定,全耳蜗铺片行毛细胞记数,免疫组化荧光标记prestin在耳蜗毛细胞的表达,激光共聚焦显微镜进行观察。Western biotting进行prestin蛋白定量分析。结果耳蜗毛细胞记数结果可见4周龄DBA/2J小鼠的耳蜗基底回有56.35%外毛细胞（outer hair cells,OHCs）消失,中回仅有个别消失,顶回有11.07%的OHCs消失;到8W时,DBA/2J小鼠的耳蜗基底回有97.85%OHCs消失,中回12.7%OHCs消失,顶回近20%的OHCs消失;16周龄时基底回OHCs完全消失,中回有80%的消失,顶回有30%的消失;DBA/2J老化小鼠到32W时,基底回OHCs已全部消失,中回也基本消失殆尽达99.5%,顶回的OHCs有80%左右消失。同时,在4W时OHCs prestin的表达从基底回到顶回均有较强的表达;到8W时耳蜗OHCs prestin的表达整体下降,与4W时相比表达下降十分显着（P≤0.01）;到16W时,耳蜗OHCsprestin的表达下降更明显。与其相对应的是ABR反应阈值随年龄增长显着升高。Prestin表达与细胞核显示同时存在,OHCs消失同时prestin表达亦消失。结论本实验结果证明,年龄相关听力损失DBA/2J小鼠的耳蜗OHCsprestin表达随听力损失而正向表达下降,毛细胞消失部位有prestin表达的消失。说明prestin表达下降是导致老年性聋的重要因素之一,其结果可能是导致老年性聋发生的分子机制之一。
罗璇[9]（2018）在《氧化应激状态HEI-OC1细胞Prestin基因表达的转录调控机制研究》文中研究说明目的噪声性听力损失（noise-induced hearing loss,NIHL）是最常见的职业病之一,氧化应激产生的高水平活性氧（氧自由基,reactive oxygen species,ROS）不仅是NIHL耳蜗毛细胞损伤的重要机制,也是多种感音性耳聋的基本病理基础。Prestin蛋白是耳蜗外毛细胞所特有的重要感音功能蛋白,是动物毛细胞电运动及耳蜗放大效应的分子基础。本研究通过探索氧化应激状态下ROS对毛细胞株HEI-OC1（House Ear Institute-Organ of Corti 1）Prestin表达的影响及氧化应激状态下Prestin基因的转录调控分子机制,为NIHL的防治提供理论依据。方法用含四种不同浓度（0μM、50μM、100μM、200μM）叔丁基过氧化氢（t-BHP）的培养基培养HEI-OC1细胞24 h或48 h,构建氧化应激损伤细胞模型;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western Blot）测量氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin在mRNA与蛋白质水平的表达量,观察氧化损伤对其表达的影响;reverse ChIP（反向染色质免疫共沉淀）与液相色谱-质谱联用（LC-MS）实验技术识别Prestin基因启动子区域结合蛋白,并从中筛选出具有转录调控作用的转录因子,根据各转录因子在氧化应激状态下mRNA的表达水平变化量,确定最重要的参与Prestin基因转录调控的转录因子并进行后续验证;染色质免疫沉淀联合定量PCR实验（ChIP-qPCR）被用来验证转录因子与Prestin基因是否可相互结合;针对转录因子设计3条siRNA（small interfering RNA）片段转染至HEI-OC1细胞内,筛选出干扰效果最好的siRNA片段,再对比转录因子沉默组与对照组Prestin的表达变化判断转录因子对Prestin基因的调控作用。结果氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin蛋白表达量随t-BHP染毒浓度的增加而降低（24 h:F=201.541,P<0.05;48 h:F=151.169,P<0.05）,而Prestin mRNA表达量出现上升（24 h:F=38.709,P<0.05;48 h:F=59.125,P<0.05）,且相同浓度t-BHP染毒条件下培养时间较长时Prestin蛋白表达量较高。对未经任何处理的HEI-OC1细胞行reverse ChIP实验识别出与Prestin基因启动子区域相结合的蛋白共183种,其中具有转录调控作用的转录因子共8个。氧化应激损伤细胞模型检测这8种转录因子的mRNA表达情况,结果显示AP-2δmRNA表达量变化与Prestin mRNA表达变化间的相关性最强;ChIP-qPCR证明转录因子AP-2δ可与Prestin基因的转录起始位点-1441直接相结合,siRNA实验显示当HEI-OC1细胞AP-2δ被抑制时Prestin mRNA和Prestin蛋白表达量均明显升高（mRNA:t=-279.292,P<0.05;蛋白:t=-44.548,P<0.05）,即转录因子AP-2δ对Prestin基因表现为负调控作用。氧化应激状态下AP-2δ在mRNA和蛋白质水平表达量均随t-BHP染毒浓度的增加而明显下降（P<0.05）。结论本研究发现氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin蛋白由于被ROS破坏而表达量降低,Prestin mRNA表达量呈现反馈性的增加,转录因子AP-2δ是调控Prestin基因表达的重要转录因子,可与Prestin基因的启动子区域结合,且对Prestin基因表现为负调控作用,同时氧化应激状态下HEI-OC1细胞AP-2δ表达量降低。结果提示氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin mRNA反馈性地表达增强以弥补蛋白水平的降低,即在氧化应激状态下Prestin呈代偿性机制表达,转录因子AP-2δ表达下调以减弱对其靶基因Prestin的抑制作用,进一步促进Prestin mRNA的表达以补偿性机制增加Prestin蛋白的表达水平维持细胞的正常功能。研究结果不仅丰富了Prestin的分子调控机制,而且也为NIHL的机制提供了新的观点,AP-2δ也可能成为修复NIHL耳蜗外毛细胞损伤的作用靶点。
陈婷[10]（2018）在《褪黑素对小鼠放射性内耳损伤的保护作用及机制研究》文中认为背景与目的鼻咽癌是我国尤其广东地区最常见恶性肿瘤之一,其大部分为低分化鳞癌,目前多采用放疗为主。放疗是一种利用电离辐射与生物体相互作用,产生自由基,攻击各种细胞成分,引发脂质过氧化反应,破坏细胞膜,促进组织损伤的一种治疗方式,它无明显靶向治疗目标,照射之处均无幸免。鼻咽癌放疗的照射野内包含的中耳、内耳、听神经和部分脑干等正常组织,均可出现不同程度的损伤。在动物实验中发现内耳组织,尤其是耳蜗外毛细胞在照射后受到明显损害。褪黑激素是一种松果体合成的内源性化合物,1993年就被鉴定为自由基清除剂,具有强效的抗氧化作用,对放疗产生的自由基所引起的多种组织器官损伤具有重要的保护作用,为此,本研究通过制备放射后感音神经性聋及放射前腹腔注射褪黑素的预处理小鼠模型,并设定两个时间段,对小鼠耳蜗功能、形态及外毛细胞prestin蛋白及其mRNA表达变化三方面进行观察,研究褪黑素是否预防放射性感音神经性聋,希望为预防和治疗鼻咽癌放疗后所产生的听觉系统并发症提供依据。方法4周龄雄性Bal b/c小鼠,随机分为6组:对照组、5mg/kg褪黑素组、50mg/kg褪黑素组、5mg/kg褪黑素+16Gy剂量照射组、50mg/kg褪黑素+16Gy剂量照射组,生理盐水+16Gy剂量照射组,各组在随机分成两小组,分别在照射后第3、7天进行ABR检测、DPOAE检测、HE染色、免疫组化染色、QPCR检测及prestin蛋白western blot检测。数据采用SPSS 19.0统计软件进行分析,符合正态分布的计量资料以x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两时间段采用独立样本T检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果1、ABR示放疗后小鼠ABR阈值明显升高且Ⅰ波潜伏期延长,而不同剂量褪黑素+放疗组虽也存在上诉改变,但幅度明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;2、DPOAE示放疗致听力损失主要在8kHz以上,且随时间的延长,损伤加重,而褪黑激素预处理的小鼠听力损失明显减低,与放疗组相比差异有统计学意义（P<0.05）;且两组不同剂量预处理组也存在统计学差异（P<0.05）;3、耳蜗HE染色示第3天各组耳蜗柯氏器细胞基本正常;第7天放疗组耳蜗基底膜可见扭曲、断裂,外毛细胞胞质淡染,胞核固缩、缺失,血管纹结构偶有破坏,内毛细胞无明显改变,两组褪黑素预处理组小鼠耳蜗细胞以上病变均较放疗组轻;4、QPCR示放疗致prestin蛋白mRNA表达上调（P<0.05）,褪黑激素预处理的小鼠prestin蛋白mRNA表达上调明显减低,差异有统计学意义（P<0.05）,且两组不同剂量预处理组也存在统计学差异（P<0.05）;5、免疫组化染色及WB结果显示,prestin蛋白主要分布在外毛细胞细胞核以上的侧膜,放疗后内耳prestin蛋白表达上调,与其他组比较差异有统计学意义（P<0.05）,褪黑激素预处理能降低放疗后prestin异常表达（P<0.05）,且大剂量褪黑素效果更显着（P<0.05）。结论褪黑素对放射性内耳损伤具有保护作用,可控制放疗所致的耳蜗外毛细胞prestin蛋白异常表达,且作用与剂量相关。
二、耳蜗外毛细胞Prestin的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、耳蜗外毛细胞Prestin的研究进展（论文提纲范文）
（1）水杨酸长期注射对老年性耳聋的防护作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 听功能测定方法 |
| 1.3 水杨酸治疗方法 |
| 1.4 耳蜗铺片及毛细胞计数方法 |
| 1.5 扫描电镜观察 |
| 1.6 全耳蜗铺片prestin抗体染色 |
| 1.7 耳蜗基底膜全蛋白提取和蛋白印迹实验(Western blotting) |
| 1.8 荧光定量PCR |
| 1.9 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 ABR反应阈值的改变 |
| 2.2 全耳蜗毛细胞观察计数结果 |
| 2.3 扫描电镜观察 |
| 2.4 耳蜗全基底膜行免疫组化prestin表达标记 |
| 2.5 Western Blotting蛋白印痕测定和全耳蜗RNA提取RT-PCR测定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 水杨酸的剂量选择性 |
| 3.2 水杨酸钠剂量选择性对耳蜗毛细胞Prestin蛋白表达的影响 |
| 3.3 水杨酸钠剂量选择性对老年性聋的治疗效果及机制 |
（2）羟丙基-β-环糊精对毛细胞鞘脂代谢的调控及死亡命运的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 内耳结构和听觉传导 |
| 1.1.1 听觉传导 |
| 1.1.2 内耳结构 |
| 1.1.3 带状体突触结构 |
| 第二节 听力测量 |
| 1.2.1 听性脑干反应 |
| 1.2.2 畸变产物耳声发射 |
| 第三节 细胞死亡信号通路 |
| 1.3.1 细胞凋亡概论 |
| 1.3.2 细胞自噬概论 |
| 1.3.3 细胞坏死概论 |
| 第四节 鞘脂代谢概论 |
| 1.4.1 神经酰胺代谢与细胞命运决定 |
| 1.4.2 鞘磷脂代谢与细胞命运决定 |
| 1.4.3 鞘氨醇代谢与细胞命运决定 |
| 1.4.4 鞘脂代谢关键酶与细胞命运决定 |
| 1.4.5 代谢组学概论 |
| 第五节 HPβCD概论 |
| 1.5.1 环糊精的发现与发展 |
| 1.5.2 HPβCD的应用 |
| 1.5.3 HPβCD研究进展 |
| 1.5.4 HPβCD的耳毒性研究现状 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 第一节 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 第二节 实验方法 |
| 2.2.1 实验小鼠和细胞的准备 |
| 2.2.2 ABR |
| 2.2.3 畸变产物耳声发射 |
| 2.2.4 小鼠耳蜗免疫荧光染色 |
| 2.2.5 突触免疫荧光染色 |
| 2.2.6 新生鼠基底膜培养 |
| 2.2.7 HEI-OC1 细胞培养 |
| 2.2.8 流式细胞分析技术 |
| 2.2.9 鞘脂代谢分析 |
| 2.2.10 成年鼠基底膜DAB染色 |
| 2.2.11 毛细胞和突触计数的方法 |
| 2.2.12 统计学分析方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 第一节 HPβCD对耳蜗毛细胞损伤情况的研究 |
| 第二节 HPβCD对小鼠听觉功能的影响 |
| 第三节 HPβCD对小鼠内毛细胞ribbon突触的影响 |
| 第四节 HPβCD对外毛细胞自噬的影响 |
| 第五节 HPβCD急性损伤模型的建立 |
| 第六节 Z-VAD-FMK在 HPβCD急性损伤模型中的作用 |
| 第七节 HPβCD慢性损伤模型的建立 |
| 第八节 HPβCD离体损伤模型的建立 |
| 3.8.1 HPβCD耳蜗损伤培养模型的建立 |
| 3.8.2 HPβCD细胞损伤模型的建立 |
| 第九节 HPβCD对 OC1 细胞鞘脂代谢的影响 |
| 第四章 讨论与展望 |
| 第一节 鞘脂代谢对细胞命运决定的影响 |
| 第二节 HPβCD的应用与耳毒性 |
| 第三节 小结与展望 |
| 4.3.1 小结 |
| 4.3.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
（3）耳蜗外毛细胞Prestin过表达病毒载体的构建与应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂与材料 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.1.4 细胞株 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 豚鼠Prestin基因的扩增与提取 |
| 2.2.2 Prestin原腺相关病毒(pAAV)质粒构建 |
| 2.2.3 AAV-2-Prestin载体的制备 |
| 2.2.4 AAV-2-Prestin载体转染培养HEI-OC1细胞 |
| 2.2.5 重组Prestin腺相关病毒载体构建 |
| 2.2.6 原位凝胶制备 |
| 2.2.7 实验动物 |
| 2.2.8 鼓膜穿刺鼓室给药 |
| 2.2.9 免疫荧光法观察耳蜗组织病毒转染分布 |
| 2.2.10 耳蜗基底膜铺片免疫荧光检测绿色荧光蛋白 |
| 2.2.11 耳蜗基底膜铺片免疫荧光检测Prestin |
| 2.2.12 Western-Blot检测耳蜗基底膜Prestin表达水平 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 pAAV-Prestin原病毒质粒验证 |
| 3.2 AAV-2-Prestin转染HEI-OC1细胞Prestin表达结果 |
| 3.3 重组腺相关病毒耳蜗转染分布 |
| 3.4 重组腺相关病毒毛细胞转染分布 |
| 3.5 基底膜毛细胞Prestin基因转染 |
| 3.6 基底膜毛细胞Prestin表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 不足之处及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表和完成的论文 |
| 攻读硕士学位期间申报的专利 |
（4）血影蛋白Spectrin在听力发育中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩写词 |
| 主要英文注释表 |
| 绪论 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 耳蜗及毛细胞的结构和功能 |
| 1.1 耳蜗的结构 |
| 1.2 毛细胞的结构和功能 |
| 第二节 表皮板骨架蛋白的研究进展 |
| 2.1 表皮板骨架蛋白的组织方式 |
| 2.2 血影蛋白Spectrin的结构和功能 |
| 2.3 肌动蛋白的结构和功能 |
| 第三节 超高分辨显微镜的研究进展 |
| 3.1 光学显微镜的分辨极限 |
| 3.2 结构光照显微成像技术的原理和应用 |
| 3.3 受激发射损耗显微成像技术的原理和应用 |
| 3.4 超高分辨荧光显微技术在膜下骨架蛋白研究中的进展 |
| 第四节 总结和未来研究展望 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 第一节 实验材料和试剂 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要耗材 |
| 1.4 试剂配制 |
| 第二节 实验方法 |
| 2.1 新生小鼠耳蜗铺片免疫荧光 |
| 2.2 成年小鼠耳蜗铺片免疫荧光 |
| 2.3 成年大鼠耳蜗铺片免疫荧光 |
| 2.4 小鼠前庭椭圆囊免疫荧光 |
| 2.5 成年小鼠扫描电子显微成像 |
| 2.6 成年小鼠透射电子显微成像 |
| 2.7 耳蜗组织RNA提取 |
| 2.8 逆转录聚合酶链式反应RT-PCR |
| 2.9 耳蜗组织蛋白提取 |
| 2.10 蛋白质免疫印迹实验 |
| 2.11 听力脑干反应检测 |
| 2.12 实验小鼠准备 |
| 2.13 小鼠基因型鉴定 |
| 2.14 实验数据分析方法 |
| 第三节 实验路线设计 |
| 第三章 实验结果和讨论 |
| 第一节 Spectrin和 F-actin在耳蜗的表达分析 |
| 第二节 表皮板Spectrin超分辨显微结构的原位解析 |
| 2.1 小鼠毛细胞表皮板Spectrin的超微结构 |
| 2.2 不同类型毛细胞表皮板Spectrin的超微结构 |
| 2.3 不同种属听觉毛细胞表皮板Spectrin的超微结构 |
| 2.4 小鼠毛细胞发育过程中Spectrin超微结构的变化 |
| 2.5 小结 |
| 第三节 表皮板F-actin超分辨结构及其与Spectrin的位置关系 |
| 3.1 小鼠毛细胞表皮板F-actin的超微结构 |
| 3.2 F-actin的三维超微结构 |
| 3.3 小鼠出生后毛细胞发育过程中F-actin超微结构的变化 |
| 3.4 Spectrin与 F-actin在表皮板中的相对位置关系 |
| 3.5 表皮板中其它骨架相关蛋白的的超分辨结构 |
| 3.6 小结 |
| 第四节 Spectrin在小鼠听力系统中的重要作用 |
| 4.1 Atoh1-Cre小鼠解析 |
| 4.2 Sptbn1 毛细胞特异敲除小鼠的构建 |
| 4.3 βII-spectrin敲除效率的验证 |
| 4.4 βII-spectrin敲除后小鼠听力的变化情况 |
| 4.5 βII-spectrin敲除后耳蜗的表型变化 |
| 4.6 小结 |
| 第五节 听力损伤小鼠模型中Spectrin超微结构的变化 |
| 5.1 Atoh1~(Cre/+)-Brg1~(flox/flox)小鼠毛细胞中Spectrin超微结构变化情况 |
| 5.2 噪音引起的听力损伤小鼠毛细胞中Spectrin超微结构变化情况 |
| 5.3 不同年纪小鼠毛细胞中Spectrin超微结构的变化情况 |
| 5.4 小结 |
| 第四章 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
（5）水杨酸钠诱导豚鼠螺旋神经节细胞凋亡的PD-1/PD-L1机制的实验研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 文中主要英文缩略词中英文对照表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究生就读期间发表的学术论文 |
（6）A666多肽介导主动靶向隐形纳米粒对顺铂耳毒性预防作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 载地塞米松A666 多肽修饰隐形纳米粒的制备和表征 |
| 1.仪器和材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 材料和试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 A666 多肽修饰的载地塞米松的聚乙二醇聚乳酸纳米粒(DEX-NP)的构建 |
| 2.2 A666-DEX-NP的表征 |
| 2.3 A666-DEX-NP的体外释放特性 |
| 2.4 A666-DEX-NP的体内释放特性 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 A666-DEX-NP的表征及其理化性质的测定 |
| 3.2 A666-DEX-NP体外释放特性 |
| 3.3 A666-DEX-NP体内释放特性 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 A666-DEX-NP靶向性及抗顺铂耳毒性活性研究 |
| 1 仪器与材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 材料和试剂 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 A666-DEX-NP靶向性 |
| 2.2 A666 靶向纳米粒抗顺铂耳毒性活性研究 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 A666-DEX-NP的靶向性研究 |
| 3.2 A666 靶向纳米粒抗顺铂耳毒性活性研究 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 A666-DEX-NP抗顺铂耳毒性及作用机制研究 |
| 1.仪器与材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 材料和试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 顺铂耳毒性动物模型的建立 |
| 2.2 A666 靶向纳米粒抗顺铂耳毒性 |
| 2.3 细胞内ROS水平测试 |
| 2.4 Western blot测定HEI-OC1 细胞中Cleaved-caspase-3和Bcl-2 表达水平 |
| 2.5 统计学处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 听性脑干反应 |
| 3.2 毛细胞计数 |
| 3.3 细胞内ROS水平测试 |
| 3.4 Western blot测定HEI-OC1 细胞中Cleaved-caspase-3和Bcl-2 表达水平 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 顺铂耳毒性作用机制及抗氧化药物预防研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 攻读学位期间获得的专利、成果 |
（7）复聪汤对年龄相关听力损失DBA/2J小鼠耳蜗外毛细胞prestin表达的影响（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
（8）年龄相关听力损失DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞马达蛋白-prestin表达下调与耳聋的关系（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 听功能测定方法 |
| 1.3 耳蜗铺片及观察方法 |
| 1.4 耳蜗毛细胞计数 |
| 1.5 全耳蜗铺片prestin抗体染色 |
| 1.6 耳蜗基底膜全蛋白提取和蛋白印迹实验 (Western blotting) |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 ABR反应阈值的改变 |
| 2.2 耳蜗毛细胞的消失 |
| 2.3 prestin在耳蜗表达的改变 |
| 3 讨论 |
（9）氧化应激状态HEI-OC1细胞Prestin基因表达的转录调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂与材料 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.1.4 细胞株 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 氧化应激损伤细胞模型的构建 |
| 2.2.3 qRT-PCR(实时荧光定量逆转录聚合酶链反应) |
| 2.2.4 WesternBlot(蛋白免疫印迹法) |
| 2.2.5 reverseChIP(反向染色质免疫共沉淀) |
| 2.2.6 ChIP-qPCR(染色质免疫沉淀联合定量PCR实验) |
| 2.3 统计学分析方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin的表达水平 |
| 3.1.1 氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin蛋白的表达水平 |
| 3.1.2 氧化应激状态下HEI-OC1细胞PrestinmRNA的表达水平 |
| 3.2 氧化应激状态下调控Prestin基因转录因子的筛选 |
| 3.2.1 Prestin基因启动子区域结合蛋白的识别 |
| 3.2.2 氧化应激状态下HEI-OC1细胞转录因子mRNA的相对表达量 |
| 3.3 转录因子AP-2δ与Prestin基因间的相互作用 |
| 3.3.1 转录因子AP-2δ与Prestin基因的结合 |
| 3.3.2 转录因子AP-2δ有效siRNA片段的筛选 |
| 3.3.3 转录因子AP-2δ对Prestin基因的调控作用 |
| 3.4 氧化应激状态下转录因子AP-2δ的表达水平 |
| 3.4.1 氧化应激状态下HEI-OC1细胞AP-2δmRNA的表达水平 |
| 3.4.2 氧化应激状态下HEI-OC1细胞AP-2δ蛋白的表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin呈代偿性机制表达 |
| 4.2 转录因子AP-2δ是Prestin基因的负调控因子 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 不足之处及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（10）褪黑素对小鼠放射性内耳损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 褪黑素对小鼠放射性内耳损伤的保护作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 褪黑素对小鼠放疗后内耳prestin蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附文 |
| References |
| 英文缩写注解 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
四、耳蜗外毛细胞Prestin的研究进展（论文参考文献）
- [1]水杨酸长期注射对老年性耳聋的防护作用[J]. 李胜利,武坤毅,姬媛媛,任晓勇. 中华耳科学杂志, 2020(04)
- [2]羟丙基-β-环糊精对毛细胞鞘脂代谢的调控及死亡命运的影响[D]. 方巧军. 东南大学, 2020(01)
- [3]耳蜗外毛细胞Prestin过表达病毒载体的构建与应用研究[D]. 林寿凯. 广东药科大学, 2020(01)
- [4]血影蛋白Spectrin在听力发育中的作用[D]. 齐洁玉. 东南大学, 2020(01)
- [5]水杨酸钠诱导豚鼠螺旋神经节细胞凋亡的PD-1/PD-L1机制的实验研究[D]. 黄青. 广西医科大学, 2019(08)
- [6]A666多肽介导主动靶向隐形纳米粒对顺铂耳毒性预防作用研究[D]. 汪雪玲. 上海交通大学, 2018
- [7]复聪汤对年龄相关听力损失DBA/2J小鼠耳蜗外毛细胞prestin表达的影响[J]. 李胜利,武坤毅,张阳. 中华中医药杂志, 2018(11)
- [8]年龄相关听力损失DBA/2J小鼠耳蜗毛细胞马达蛋白-prestin表达下调与耳聋的关系[J]. 李胜利,武坤毅,任晓勇. 中华耳科学杂志, 2018(04)
- [9]氧化应激状态HEI-OC1细胞Prestin基因表达的转录调控机制研究[D]. 罗璇. 广东药科大学, 2018(01)
- [10]褪黑素对小鼠放射性内耳损伤的保护作用及机制研究[D]. 陈婷. 南方医科大学, 2018(01)