DNA-SIP鉴定甘蔗//大豆间作土壤15N-DNA富集位置的氮循环功能基因qPCR方法

论文摘要

为筛选有效鉴定甘蔗//大豆间作系统的稳定性同位素核酸探针技术（DNA-SIP）中超高速离心后15N-DNA富集位置的指示功能基因,利用实时荧光定量PCR技术（qPCR）,检测6个氮素循环功能基因在不同浮力密度离心液DNA中的相对丰度分布,通过对氮素循环功能基因相对丰度作图分析,nifH和amoA基因在甘蔗//大豆间作和大豆单作种植模式中15N标记组与对照组基因丰度峰发生偏移,chiA基因丰度峰仅在大豆单作种植模式下存在偏移,而nirS、nirK、nosZ等3个基因的丰度峰值在两种种植模式下均不发生偏移。结果表明nifH和amoA基因可作为指示基因,能够有效鉴定甘蔗//大豆间作系统中DNA-SIP技术15N-DNA位置。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 试验设计
•   1.3 作物15N同位素标记
•   1.4 样品15N同位素丰度测定
•   1.5 根际土微生物总DNA提取
•   1.6 超高速密度梯度离心
•     1.6.1 DNA-CsCl溶液制备
•     1.6.2 等密度梯度超高速离心
•   1.7 不同浮力密度DNA分层与纯化
•   1.8 功能基因qPCR引物选择
•   1.9 qPCR标准曲线制备
•     1.9.1 功能基因片段的扩增
•     1.9.2 载体连接转化
•     1.9.3 质粒提取及其拷贝数计算
•   1.1 0 qPCR分析功能基因丰度分布
•   1.1 1 数据分析
• 2 结果与分析
•   2.1 植株和土壤样品中15N同位素丰度
•   2.2 功能基因qPCR鉴定15N-DNA富集位置
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 苟永刚,余玲玲,许霞,王建武

关键词: 甘蔗,大豆间作,稳定性同位素核酸探针,荧光定量,功能基因

来源: 农业环境科学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 环境科学与资源利用

单位: 华南农业大学热带亚热带生态研究所,农业农村部华南热带农业环境重点实验室,华南农业大学资源环境学院生态学系

基金: 国家自然科学基金项目(31600348)~~

分类号: X53

页码: 140-147

总页数: 8

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