从江香猪源Ⅰ、Ⅱ型干扰素生菜中融合表达及其生物活性

论文摘要

干扰素（interfern,IFN）是在特定的诱生剂作用下,由细胞产生的一种具有高度生物活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒活性。从江香猪源Ι型干扰素α2和Ⅱ型干扰素γ于生菜中融合表达及生物活性研究未见报道。本研究应用生菜植物表达系统,将从江香猪源干扰素植物表达载体PBI121-IFNα2、PBI121-IFNα2γ、PBI121-IFNγ、PBI121-Vec转入根癌农杆菌LBA4404中,用真空渗透法将携带干扰素质粒的根癌农杆菌感染生菜叶片;用β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase,GUS）染色和酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,Q-PCR）技术分析从江香猪源干扰素蛋白活性。结果显示:GUS染色和ELISA检测证明从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中实现了表达;Q-PCR检测显示:在Marc-145细胞上从江香猪源干扰素蛋白对PRRSV的复制有明显抑制作用,在PK15细胞上从江香猪源干扰素蛋白对干扰素γ诱导蛋白30（interferon-gamma-inducible protein 30,IFI30）、2′-5′寡聚腺苷酸合成酶（2′-5′oligoadenylate synthetase,OAS）、抗黏液病毒蛋白（myxovirus resistance,MX）基因的mRNA水平的上调有一定的促进作用。本研究成功实现从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中进行表达且表达蛋白具有生物学活性,为从江香猪源Ι型和Ⅱ型干扰素新复合型药物植物蛋白的开发利用提供参考依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂
•   1.2 主要材料
•   1.3 引物的设计与合成
•   1.4 浸染液的制备
•   1.5 根癌农杆菌介导真空渗透表达
•   1.6 GUS染色检测
•   1.7 ELISA定量检测表达蛋白
•   1.8 q-PCR反应条件优化
•   1.9 生菜中表达的从江香猪干扰素蛋白对PRRSV抑制作用检测
•   1.10 表达蛋白的活性检测
• 2 结果
•   2.1 GUS染色检测结果
•   2.2 ELISA定量检测表达蛋白结果
•   2.3 q-PCR反应条件优化
•   2.4 表达的蛋白对PRRSV抑制作用
•   2.5 表达的蛋白活性检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红,陈广,张喜懿

关键词: 从江香猪源干扰素,生菜,瞬时表达,生物活性

来源: 中国兽医学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 贵州大学动物科学学院预防兽医实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(31460668),贵州省科学技术基金资助项目(黔科合J字[2015]2046号),贵州省高层次创新型人才培养资助项目(黔财教[2017]号),贵州大学博士基金资助项目(贵大人基合字(2013)12号),贵州省科技平台及人才团队计划资助项目(黔科合平台人才[2018]5253),贵州省研究生工作站计划资助项目(GZZ2017002)

分类号: S852.651

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.07.04

页码: 1261-1268

总页数: 8

文件大小: 1353K

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