牛结核分枝杆菌MPB70+83MAb的制备及胶体金免疫层析试纸条的初步研制

论文摘要

为制备牛结核分枝杆菌（MB）感染早期分泌性蛋白MPB70+83的胶体金标记免疫层析试剂条,本研究将构建的重组大肠杆菌p ET30a（+）-MPB70+83/BL21诱导表达,经纯化后免疫小鼠,制备MPB70+83融合蛋白的单克隆抗体（MAb）,对MAb标记胶体金后制备检测试纸,并确定其特异性、灵敏度等技术指标。结果显示,获得分子量为39 ku的MPB70+83融合蛋白,经纯化后重组蛋白的纯度>95%,经4次免疫BALB/c小鼠后,最终获得3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4H6、5A2、4D11,小鼠腹水MAb效价分别达到1∶12 800,1∶12 800,1∶25 600。制备的腹水MAb均经纯化后浓度分别为2.1 mg/m L、1.8 mg/mL、2.5 mg/mL。对杂交瘤细胞经15代培养,MAb均具有良好的稳定性。利用4D11 MAb标记金颗粒,4H6 MAb包被检测线,并对不同培养物人工污染健康牛血清样品进行检测,结果显示,胶体金试纸对人工污染MB培养物的健康牛血清出现阳性反应,对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、副结核杆菌培养物人工污染的健康牛血清的检测均为阴性,最低可以检测到1∶2 500倍稀释的MB培养上清。本研究为牛结核分枝杆菌感染的快速检测提供可行技术手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、载体及实验动物
•   1.2 主要试剂
•   1.3 MP B70+83融合基因的扩增及重组质粒的构建
•   1.4 重组基因工程菌的诱导表达、纯化
•   1.5 抗MP B70+83重组蛋白MAb的制备
•     1.5.1 小鼠免疫与融合筛选
•     1.5.2 MAb的制备与纯化
•   1.6 MAb的鉴定
•   1.7 MAb的胶体金标记及测试
• 2 结果
•   2.1 MP B70+83融合基因的扩增及重组质粒的构建与鉴定
•   2.2 重组基因工程菌的诱导表达及蛋白纯化
•   2.3 抗MP B70+83重组蛋白MAb的制备
•   2.4 MAb的鉴定
•   2.5 胶体金试纸的初步测试
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 叶俊,布日额,吴金花,锡林高娃,陈金龙,王金良,刘思国,崔子寅,王思珍

关键词: 结核分枝杆菌,单克隆抗体

来源: 中国预防兽医学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心,内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所,山东省滨州畜牧兽医研究院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

基金: 内蒙古自治区科技创新引导项目(批准号：KCBJ2018026),内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题(MDK2018004,MDK2018001),内蒙古自治区第七批“草原英才”人才工程产业创新团队建设项目(第七批)

分类号: S852.61

页码: 1131-1136

总页数: 6

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