蛋白折迭论文_董红娟,顾宏涛,高广勋,高瑛,董宝侠

导读:本文包含了蛋白折迭论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:折迭,骨髓瘤,抑制剂,蛋白酶,蛋白,细胞,凋亡。

蛋白折迭论文文献综述

董红娟,顾宏涛,高广勋,高瑛,董宝侠^[1]（2009）在《未折迭蛋白反应调节紊乱介导了硼替佐米的促骨髓瘤细胞凋亡活性》一文中研究指出目的:本课题采用蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞株NCI-H929(H929)和RPM18226(8226)凋亡为模型,以XBP-ls、XBP-lu、BiP、CHOPmRNA和蛋白的表达为未折迭蛋白反应(UPR)标志,探讨蛋白酶体抑制剂诱导MM细胞凋亡的机制(本文来源于《第12届全国实验血液学会议论文摘要》期刊2009-11-05）

高瑛^[2]（2009）在《抑制蛋白酶体干扰骨髓瘤细胞未折迭蛋白反应与自噬》一文中研究指出背景和目的:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)作为一种浆细胞恶性肿瘤,其高蛋白合成与分泌活性极易导致未/错折迭蛋白积聚于内质网腔,故骨髓瘤细胞极易诱发内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。ERS的生化基础称为未折迭蛋白反应(unfolded protein response,URP)。UPR作为一种旨在修复、稳定内质网功能的细胞适应性反应,能通过IRE1α与PERK/eIFα信号通路而调控分子伴侣BiP表达及转录因子XBP-1、CHOP的活化,其中BiP与XBP-1促进细胞生存,而CHOP则介导细胞凋亡。两类信号间的紊乱失衡最终导致细胞死亡。真核细胞适应性反应除了UPR,还有自噬反应(autophagy)。自噬是真核细胞适应营养或生长因子缺乏、低氧、内质网应激等有害刺激,由溶酶体介导的长寿命蛋白或细胞器的降解的一种分解性代谢反应。自噬体形成是自噬的关键步骤,而自噬体形成依赖Atg5及Atg8/LC3等自噬相关蛋白与Beclin1-磷脂酰肌醇叁磷酸激酶(PI3K)复合物的综合调控。研究表明,在酵母细胞中UPR既能触发凋亡又能诱发自噬,而在骨髓瘤细胞中,UPR与自噬关系尚不清楚。蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)能选择性抑制26S蛋白酶体,对多发性骨髓瘤临床疗效显着,其抗瘤效应可能通过干扰NF-κB信号来实现,然而最近发现NF-κB抑制剂诱发骨髓瘤细胞凋亡的程度却远不及蛋白酶体抑制剂显着。提示NF-κB途径不能完全解释硼替佐米的抗瘤效应。近年报道内质网应激诱导的细胞凋亡为硼替佐米的重要效应机制,但其具体调控过程尚不清楚。考虑到内质网应激与UPR及自噬调控之间的相互关系,以及UPR与自噬在骨髓瘤细胞死亡调控中的作用,我们设想,硼替佐米极可能通过影响UPR与自噬的调控过程而发挥其抗骨髓瘤效应。方法和结果:为了探讨骨髓瘤细胞UPR与自噬之间的关系,我们绘制了经内质网应激剂和/或自噬诱导剂处理骨髓瘤细胞H929和RPMI8226的剂量-效应曲线,确定了所用药物的实验浓度,并采用Western blot检测靶细胞UPR和自噬相关蛋白的表达。结果表明:(1)采用自噬诱导剂雷帕霉素分别处理H929和RPMI8226细胞不同时间后,靶细胞中UPR相关蛋白XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP和自噬相关蛋白LC-3、Beclin-1、Atg-5、PI3KC3的表达均呈时间依赖性的增加;(2)经标准内质网应激剂BFA或Tg处理不同时间后,H929和RPMI8226细胞凋亡率及上述UPR相关蛋白和自噬相关蛋白的表达均呈时间依赖性的增加;(3)雷帕霉素能干扰BFA或Tg诱导的UPR相关蛋白的表达;(4) BFA或Tg可以干扰雷帕霉素诱发的自噬相关蛋白的表达。以上结果强烈提示,在骨髓瘤细胞中,UPR与自噬反应的调控过程相互依赖。为了进一步探讨硼替佐米是否造成UPR信号紊乱失衡,我们以不同方式处理细胞后,我们采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;采用Western blot检测靶细胞UPR相关蛋白的表达。结果表明:(1)经硼替佐米、BFA和Tg处理不同时间后,靶细胞凋亡率及UPR相关蛋白的表达均呈时间依赖性增加;(2)硼替佐米能干扰BFA或Tg诱导的XBP-1s、XBP-1u及BiP蛋白的表达,但却促进BFA或Tg诱导的CHOP蛋白的表达,提示硼替佐米可以引起UPR反应中保护信号的表达与信号输出的紊乱失衡。为了探讨硼替佐米是否影响自噬过程,我们以不同方式处理细胞后,采用电镜技术检测自噬体/自噬溶酶体;采用Western blot检测靶细胞自噬相关蛋白的表达,采用免疫共沉淀检测Beclin-1-PI3KC3复合物的形成。结果表明:(1)硼替佐米处理H929细胞24小时后电镜检测未发现有经典自噬体/自噬溶酶体形成; (2)硼替佐米分别处理H929和RPMI8226细胞不同时间后,靶细胞自噬相关蛋白的表达呈时间依赖性减少;(3)硼替佐米可以干扰自噬诱导剂雷帕霉素诱发的自噬相关蛋白的表达;(4)硼替佐米可以抑制Beclin-1-PI3KC3复合物的形成;(5)活化自噬可以降低硼替佐米的促骨髓瘤细胞凋亡活性,抑制自噬对其活性无明显影响。提示,硼替佐米除了干扰UPR、促进骨髓瘤细胞凋亡外,尚抑制骨髓瘤细胞内源性自噬反应,从而进一步消除了自噬对骨髓瘤细胞的保护作用。结论:1.骨髓瘤细胞中自噬与未折迭蛋白反应的调控过程密切关联;2.蛋白酶体抑制剂硼替佐米虽能诱导骨髓瘤细胞内质网应激,但却干扰了未折迭蛋白反应,致使其保护性成分BiP和XBP-1与促凋亡成份CHOP表达紊乱失衡,进而触发靶细胞凋亡;3.硼替佐米干扰骨髓瘤细胞内源性自噬反应,可能与其抑制Beclin-1/PI3KC3复合体的形成有关;4.硼替佐米除了干扰未折迭蛋白反应、促进骨髓瘤细胞凋亡外,尚能干扰骨髓瘤细胞的内源性自噬反应,从而消除了自噬对骨髓瘤细胞的生存保护作用,这一效应极可能是硼替佐米抗骨髓瘤效应显着优于其它常规化疗药物的重要生物学机制。(本文来源于《第四军医大学》期刊2009-04-01）

董红娟^[3]（2008）在《硼替佐米诱导骨髓瘤细胞未折迭蛋白反应及凋亡》一文中研究指出背景和目的:蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitor, PI)作为一类新型抗肿瘤药物,自2003年被美国FDA批准用于治疗复发难治性多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)以来,取得了令人瞩目的临床疗效,但对其作用机制仍不是十分清楚。深入研究PI触发MM细胞凋亡的信号转导通路,既有利于理解PI的药效机理,又有利于为更有效的联合治疗方案的制订及新作用靶点药物的研制提供新的思路。一直认为,PI的抗肿瘤机制通过干扰NF-κB信号来实现,而最近发现NF-κB抑制剂诱发MM细胞凋亡的程度却远不及PI显着,强烈提示PI诱导MM细胞凋亡极可能存在其它的途径。鉴于内质网应激诱发的细胞反应即未折迭蛋白反应(unfolded protein response, UPR)在多种分泌性肿瘤细胞尤其是MM细胞的凋亡中起重要作用,故本课题采用蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导MM细胞NCI-H929 (H929)和RPMI8226 (8226)凋亡为模型,以XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达为UPR指标,探讨PI对MM细胞未折迭蛋白反应及凋亡的影响。方法和结果:以不同方式处理细胞后,采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;采用RT-PCR和Western blot检测靶细胞XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达;用慢病毒转染介导的RNA干涉沉默XBP-1基因,观察靶细胞相应改变。结果表明:(1)采用不同浓度硼替佐米分别处理H929和8226细胞24小时后,靶细胞凋亡率及靶细胞中XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达均呈剂量依赖性的增加; (2) H929和8226细胞分别经硼替佐米处理不同时间后,靶细胞凋亡率及靶细胞中XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达均呈时间依赖性增加; (3) H929和8226细胞分别经标准内质网应激剂Brefeldin A处理不同时间后,靶细胞凋亡率及靶细胞中XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达均呈时间依赖性增加,其变化趋势与硼替佐米处理组基本一致,该结果进一步支持硼替佐米诱发的MM细胞的凋亡涉及UPR;(4)硼替佐米能抑制Brefeldin A诱导的XBP-1s、XBP-1u、BiP mRNA和蛋白的表达,促进Brefeldin A诱导的CHOP mRNA和蛋白的表达,提示硼替佐米可以减弱Brefeldin A所诱导的UPR保护成分的表达,增强其诱导的UPR促凋亡成分的表达;(5)沉默XBP-1基因后,靶细胞对硼替佐米的敏感性增加,提示XBP-1在内质网应激的状态下,对细胞起保护作用。结论:1.硼替佐米能够呈时间、剂量依赖性诱导MM细胞凋亡;2.硼替佐米诱发MM细胞凋亡涉及UPR;3.硼替佐米虽然通过抑制内质网相关性蛋白降解(ER-associated protein degration ERAD)诱发内质网应激,但却干扰UPR中保护成分的表达;4. UPR的关键成分XBP-1在内质网应激的状态下,对MM细胞的生存起保护作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2008-05-01）

蛋白折迭论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

背景和目的:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)作为一种浆细胞恶性肿瘤,其高蛋白合成与分泌活性极易导致未/错折迭蛋白积聚于内质网腔,故骨髓瘤细胞极易诱发内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。ERS的生化基础称为未折迭蛋白反应(unfolded protein response,URP)。UPR作为一种旨在修复、稳定内质网功能的细胞适应性反应,能通过IRE1α与PERK/eIFα信号通路而调控分子伴侣BiP表达及转录因子XBP-1、CHOP的活化,其中BiP与XBP-1促进细胞生存,而CHOP则介导细胞凋亡。两类信号间的紊乱失衡最终导致细胞死亡。真核细胞适应性反应除了UPR,还有自噬反应(autophagy)。自噬是真核细胞适应营养或生长因子缺乏、低氧、内质网应激等有害刺激,由溶酶体介导的长寿命蛋白或细胞器的降解的一种分解性代谢反应。自噬体形成是自噬的关键步骤,而自噬体形成依赖Atg5及Atg8/LC3等自噬相关蛋白与Beclin1-磷脂酰肌醇叁磷酸激酶(PI3K)复合物的综合调控。研究表明,在酵母细胞中UPR既能触发凋亡又能诱发自噬,而在骨髓瘤细胞中,UPR与自噬关系尚不清楚。蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)能选择性抑制26S蛋白酶体,对多发性骨髓瘤临床疗效显着,其抗瘤效应可能通过干扰NF-κB信号来实现,然而最近发现NF-κB抑制剂诱发骨髓瘤细胞凋亡的程度却远不及蛋白酶体抑制剂显着。提示NF-κB途径不能完全解释硼替佐米的抗瘤效应。近年报道内质网应激诱导的细胞凋亡为硼替佐米的重要效应机制,但其具体调控过程尚不清楚。考虑到内质网应激与UPR及自噬调控之间的相互关系,以及UPR与自噬在骨髓瘤细胞死亡调控中的作用,我们设想,硼替佐米极可能通过影响UPR与自噬的调控过程而发挥其抗骨髓瘤效应。方法和结果:为了探讨骨髓瘤细胞UPR与自噬之间的关系,我们绘制了经内质网应激剂和/或自噬诱导剂处理骨髓瘤细胞H929和RPMI8226的剂量-效应曲线,确定了所用药物的实验浓度,并采用Western blot检测靶细胞UPR和自噬相关蛋白的表达。结果表明:(1)采用自噬诱导剂雷帕霉素分别处理H929和RPMI8226细胞不同时间后,靶细胞中UPR相关蛋白XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP和自噬相关蛋白LC-3、Beclin-1、Atg-5、PI3KC3的表达均呈时间依赖性的增加;(2)经标准内质网应激剂BFA或Tg处理不同时间后,H929和RPMI8226细胞凋亡率及上述UPR相关蛋白和自噬相关蛋白的表达均呈时间依赖性的增加;(3)雷帕霉素能干扰BFA或Tg诱导的UPR相关蛋白的表达;(4) BFA或Tg可以干扰雷帕霉素诱发的自噬相关蛋白的表达。以上结果强烈提示,在骨髓瘤细胞中,UPR与自噬反应的调控过程相互依赖。为了进一步探讨硼替佐米是否造成UPR信号紊乱失衡,我们以不同方式处理细胞后,我们采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;采用Western blot检测靶细胞UPR相关蛋白的表达。结果表明:(1)经硼替佐米、BFA和Tg处理不同时间后,靶细胞凋亡率及UPR相关蛋白的表达均呈时间依赖性增加;(2)硼替佐米能干扰BFA或Tg诱导的XBP-1s、XBP-1u及BiP蛋白的表达,但却促进BFA或Tg诱导的CHOP蛋白的表达,提示硼替佐米可以引起UPR反应中保护信号的表达与信号输出的紊乱失衡。为了探讨硼替佐米是否影响自噬过程,我们以不同方式处理细胞后,采用电镜技术检测自噬体/自噬溶酶体;采用Western blot检测靶细胞自噬相关蛋白的表达,采用免疫共沉淀检测Beclin-1-PI3KC3复合物的形成。结果表明:(1)硼替佐米处理H929细胞24小时后电镜检测未发现有经典自噬体/自噬溶酶体形成; (2)硼替佐米分别处理H929和RPMI8226细胞不同时间后,靶细胞自噬相关蛋白的表达呈时间依赖性减少;(3)硼替佐米可以干扰自噬诱导剂雷帕霉素诱发的自噬相关蛋白的表达;(4)硼替佐米可以抑制Beclin-1-PI3KC3复合物的形成;(5)活化自噬可以降低硼替佐米的促骨髓瘤细胞凋亡活性,抑制自噬对其活性无明显影响。提示,硼替佐米除了干扰UPR、促进骨髓瘤细胞凋亡外,尚抑制骨髓瘤细胞内源性自噬反应,从而进一步消除了自噬对骨髓瘤细胞的保护作用。结论:1.骨髓瘤细胞中自噬与未折迭蛋白反应的调控过程密切关联;2.蛋白酶体抑制剂硼替佐米虽能诱导骨髓瘤细胞内质网应激,但却干扰了未折迭蛋白反应,致使其保护性成分BiP和XBP-1与促凋亡成份CHOP表达紊乱失衡,进而触发靶细胞凋亡;3.硼替佐米干扰骨髓瘤细胞内源性自噬反应,可能与其抑制Beclin-1/PI3KC3复合体的形成有关;4.硼替佐米除了干扰未折迭蛋白反应、促进骨髓瘤细胞凋亡外,尚能干扰骨髓瘤细胞的内源性自噬反应,从而消除了自噬对骨髓瘤细胞的生存保护作用,这一效应极可能是硼替佐米抗骨髓瘤效应显着优于其它常规化疗药物的重要生物学机制。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。