树鼩原代小胶质细胞的分离培养、纯化与鉴定

论文摘要

本文旨在建立树鼩(Tupaia belangeri)小胶质细胞原代培养及纯化的方法,为利用新型实验动物树鼩进行相关研究工作提供实验材料。将新生树鼩大脑皮质机械分离,皮质组织块用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;培养9～10 d后,分别采用直立手拍法、温和胰酶消化法以及恒温振荡法分离纯化树鼩小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化。荧光显微镜下,利用小胶质细胞的特异性标记物CD11b抗体进行鉴定。结果显示,小胶质细胞分离培养第3天时呈静息状态,表现为梭形、杆状、分支状等不规则形态。细胞免疫荧光CD11b呈阳性。不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示,直立手拍法所获得的细胞产量明显高于恒温振荡法(P <0.05),细胞阳性率(> 96%)明显高于温和胰酶消化法(> 90%,P <0.05)。直立手拍法可获得产量及纯度高的树鼩原代小胶质细胞。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验动物
•   1.2 细胞悬液制备
•   1.3 混合胶质细胞的培养
•   1.4 小胶质细胞的分离纯化
•   1.5 小胶质细胞的鉴定
•   1.6 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 混合胶质细胞培养的镜下观察结果
•   2.2 小胶质细胞纯化
•   2.3 小胶质细胞鉴定
•   2.4 不同方法分离纯化小胶质细胞纯度及细胞产量计数结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黎晓慧,李明学,黄鑫,张志成,袁圆,代解杰

关键词: 树鼩,原代小胶质细胞,直立手拍法,温和胰酶消化法,恒温振荡法

来源: 动物学杂志 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,昆明医科大学,中国医学科学院医学生物学研究所

基金: 云南省科技人才和平台计划项目(No.2017HC019),云南省重大科技专项(No.2017ZF007),国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B00),云南省联合支持国家计划项目(No.2015GA009)

分类号: Q813.11

DOI: 10.13859/j.cjz.201903015

页码: 445-450

总页数: 6

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