猪寡腺苷酸合成酶OAS1a基因荧光定量SYBR Green检测方法的建立与运用

论文摘要

为建立一种可以有效检测猪寡腺苷酸合成酶OAS1a表达方法,为检测机体抗病毒免疫提供参考,设计猪寡腺苷酸合成酶OAS1a基因特异荧光定量引物,扩增后连接pMD18-T载体,构建标准质粒,倍比稀释生成标准曲线。结果表明,引物特异,无二聚体,扩增效果良好,运用该方法测定猪繁殖与呼吸综合征病毒感染巨噬细胞中以及干扰素和Poly（I∶C）刺激细胞过程中该基因表达以及在不同猪脏器组织中分布。结果表明,该基因在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染之后表达量逐步升高,36 h达到最高,干扰素及其诱导剂Poly（I∶C）刺激均可以提高该基因表达,组织分布结果表明,该基因在多种组织中都有分布,肝脏和淋巴结中分布较高。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞
•   1.2 病毒
•   1.3 试剂
•   1.4 主要仪器:
•   1.5 方法
•     1.5.1 引物设计
•     1.5.2 RNA提取与反转录
•     1.5.3 PCR反应体系
•     1.5.4 pMD18-T载体构建
•     1.5.5 测序
•     1.5.6 病毒感染
•     1.5.7 干扰素处理
•     1.5.8 不同脏器组织取样
•     1.5.9 荧光定量反应
•     1.5.10 数据处理
• 2 结果
•   2.1 扩增曲线与敏感性结果
•   2.2 标准曲线结果
•   2.3 熔解曲线与特异性结果
•   2.4 组织分布结果
•   2.5 OAS1a在病毒感染过程中表达变化结果
•   2.6 干扰素处理细胞基因表达变化结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李存法,王瑞宁,李华玮,冯丽丽,张二芹,张雅,何健,赵孟孟

关键词: 猪寡腺苷酸合成酶,荧光定量,分布,猪繁殖与呼吸综合征病毒,干扰素

来源: 中国兽医杂志 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 河南牧业经济学院制药工程学院,河南牧业经济学院生物工程学院,河南省农业科学院农业经济与信息研究所,河南农业大学牧医工程学院,佛山科学技术学院生命科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金(31902279,31902284),河南省科技攻关项目(162102110033,182102110083)

分类号: S858.28

页码: 51-55

总页数: 5

文件大小: 1552K

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