剑麻酵母双杂交cDNA表达文库的构建及与AhKNOX2相互作用蛋白的筛选

论文摘要

植物KNOX可以通过蛋白质相互作用参与调控落果、纤维细胞发育、次生细胞壁发育、开花等事件。为筛选剑麻叶中与AhKNOX2相互作用的蛋白,采用SMART同源重组技术构建了剑麻叶片酵母双杂交表达文库,利用AhKNOX2为诱饵载体筛选了与之相互作用的蛋白。结果表明,文库总容量为3.9×106cfu,转化效率为9.15×105 cfu/μg pGADT7-Rec,插入片段大小主要分布于0.5 kb至3.0 kb间,重组率为92%;保存的文库细胞密度为1.35×108/mL,文库滴度为2.22×107cfu/mL。构建的pGBKT7-AhKNOX2诱饵载体存在自激活性,5mM的AT能抑制诱饵载体的自激活性,通过筛选获得了16个与AhKNOX2相互作用的蛋白。本文成功构建剑麻叶片交母表达文库,并获得与AhKNOX2相互作用的蛋白,为进一步研究AhKNOX2在剑麻中的功能奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 总RNA的提取
•     1.2.2 RNA的反转录
•     1.2.3 双链cDNA的合成
•     1.2.4 双链cDNA的纯化
•     1.2.5 文库构建
•     1.2.6 文库质量检测
•     1.2.7 诱饵载体构建
•     1.2.8 诱饵载体自激活检测及3AT抑制浓度筛选
•     1.2.9 互作蛋白筛选
•     1.2.1 0 候选蛋白的注释
• 2 结果与分析
•   2.1 总RNA的提取
•   2.2 cDNA的合成及纯化
•   2.3 文库构建及质量检测
•   2.4 诱饵载体构建
•   2.5 自激活检测
•   2.6 3-AT抑制浓度筛选
•   2.7 互作蛋白筛选
• 3 讨论

文章来源

类型: 国内会议

作者: 杨子平,孙艺桓,杨倩,鹿志伟,张燕梅,李俊峰,周文钊

关键词: 剑麻,酵母双杂交,文库,蛋白质相互作用

来源: 2019年全国热带作物学术年会 2019-09-24

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,生物学,农作物

单位: 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所湛江市热带作物遗传改良重点实验室,中国农业科学院蔬菜花卉研究所

分类号: S563.8;Q943.2

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.042804

页码: 141-147

总页数: 7

文件大小: 1330k

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