导读:本文包含了肌肉卫星细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,肌肉,脂肪,抑制,骨骼肌,生长,基质。
肌肉卫星细胞论文文献综述
吴森,孙永刚[1]（2019）在《血清浓度对共培养条件下牛原代肌肉卫星细胞及前体脂肪细胞活性影响》一文中研究指出为探索添加血清浓度对共培养条件下细胞活性的影响,本研究采集新生秦川犊牛背最长肌和肾周脂肪,分离提取前体脂肪细胞和肌卫星细胞,建立以DMEM/F12培养基,不同细胞混合比例(肌肉细胞∶脂肪细胞=10∶1、5∶1、2∶1)的多种共培养体系,通过调整各共培养体系培养基中的胎牛血清比例(5%、10%、15%、20%的胎牛血清,FBS),来研究血清浓度对各共培养体系中细胞活性的影响。共培养14d,每两天更换对应培养基,并采用MTT染色法测定共培养细胞的细胞活性。统计分析后发现:共培养细胞活性随着血清浓度的上升而增加;15%FBS和20%FBS浓度下细胞活性均显着高于5%FBS组和10%FBS组(P<0.05);虽20%FBS组细胞活性高于15%组,但差异不显着(P>0.05)。综上,为了获得最好的牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞共培养效果,达到较高的细胞培养活性,建议采用15%(v/v)以上的FBS进行共培养。(本文来源于《青海畜牧兽医杂志》期刊2019年04期）
付玉莹[2]（2019）在《WDR13通过PI3K/AKT信号通路促进牛肌肉卫星细胞的分化》一文中研究指出研究牛骨骼肌的发育对牛肉生产行业具有重要意义。在哺乳动物中,骨骼肌来自胚胎中胚层,并且通过逐渐发育过程受到高度调节。最初,肌源性祖细胞分化成为成肌细胞,成肌细胞通过增殖,分化和融合形成多核肌管,最后形成成熟的肌纤维。这一系列过程受到很多基因的调控。WD重复蛋白13(WD repeat domain 13,WDR13)属于WD重复基序家族,其在脊椎动物中高度保守。WDR13基因在大多数组织中表达,在胰腺,脑,睾丸和卵巢中表达较高。有研究表明,WDR13的缺失导致小鼠胰腺β细胞增殖的增强,而增加JNK活性的糖尿病小鼠模型中缺乏这种蛋白质显示出AP1靶基因水平的降低和保护免受炎症反应。然而,WDR13的很多功能研究目前尚不清楚。在本实验室前期研究工作中,我们通过对分化的牛肌肉卫星细胞(muscle-derived satellite cells,MDSCs)进行高通量测序,结果发现WDR13在牛MDSCs中随着细胞分化,其表达量也呈现增加的趋势,所以我们推测WDR13可能影响牛MDSCs的分化。同时在实验室另一项研究中,我们通过免疫共沉淀结果发现WDR13与磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PI3K inter-acting protein 1,PIK3IP1)相互作用,有研究表明PIK3IP1是PI3K的负调节因子,而PI3K/AKT信号通路对于细胞的增殖,分化有很重要的影响,所以我们推测WDR13可能通过影响PI3K/AKT信号通路从而影响牛MDSCs的分化。具体研究内容如下,探究WDR13在牛MDSCs分化不同时期的表达和定位。Western blot结果显示WDR13的蛋白表达水平随着分化天数的增加而增加,免疫荧光结果显示,随着牛MDSCs的分化,肌管变得更多更长,而且WDR13染色在较长的肌管中表达量更高,激光共聚焦结果显示WDR13主要在细胞质中表达,在细胞核内没有检测到荧光信号;探究激活WDR13基因后对牛MDSCs分化的影响。我们构建并获得了激活WDR13表达效果最好的CRISPR载体pSPgRNA-B1。将其与SP-dCas9-VPR共转到牛MDSCs中。免疫荧光结果显示,激活WDR13后肌管明显变粗变长,肌管融合率升高0.38倍,Western blot结果显示,激活WDR13后MYOG和MYH3的蛋白表达量也明显增加。证明激活WDR13促进牛MDSCs的分化;探究抑制WDR13基因后对牛MDSCs分化的影响。我们构建并获得了抑制WDR13表达效果最好的CRISPR载体pSPgRNA-B4。将其与dCas9共转到牛MDSCs中。免疫荧光结果显示,抑制WDR13表达后肌管明显变细变短,肌管融合率降低0.23倍,Western blot结果显示,抑制WDR13表达后MYOG和MYH3的蛋白表达量也明显降低。证明抑制WDR13抑制牛MDSCs的分化;探究PI3K/AKT信号通路对牛MDSCs分化的影响。在牛MDSCs中体外添加PI3K特异性抑制剂LY294002后,免疫荧光结果显示,其肌管明显变粗变长,肌管融合率升高0.21倍,Western blot结果显示,信号通路相关蛋白P-PI3K和P-AKT的表达量明显降低,而MYOG和MYH3的蛋白表达量明显增加。证明抑制PI3K/AKT信号通路促进牛MDSCs的分化;探究WDR13对PI3K/AKT信号通路和牛MDSCs分化的影响。激活WDR13后,Western blot结果显示,信号通路相关蛋白P-PI3K和P-AKT的蛋白表达量明显降低,而MYOG和MYH3的蛋白表达量明显增加,抑制WDR13后,信号通路相关蛋白P-PI3K和P-AKT的蛋白表达量明显增加,而MYOG和MYH3的蛋白表达量明显降低。证明WDR13通过影响PI3K/AKT信号通路促进牛MDSCs分化。以上结果表明WDR13促进牛MDSCs分化。同时WDR13通过影响PI3K/AKT信号通路促进牛MDSCs分化。这为我们研究WDR13基因促进肌肉分化的作用,以及探索肌肉生长发育的机理从而提高肉牛的肌肉产量提供帮助。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
吴森[3]（2019）在《牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞不同混合比例共培养细胞活性的比较》一文中研究指出为探索不同细胞混合比例对牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞共培养体系细胞活性的影响,本研究采集新生秦川犊牛背最长肌和肾周脂肪,分离提取肌卫星细胞和前体脂肪细胞,采用DMEM/F12培养基,建立不同血清浓度(5%、10%、15%、20%的胎牛血清,FBS)的牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞的共培养体系,然后通过分别调整各共培养体系中肌卫星细胞和前体脂肪细胞的混合比例(肌肉细胞∶脂肪细胞=10∶1、5∶1、2∶1),来研究细胞混合比例对各共培养体系的影响。共培养14d,每两天更换培养基,并采用MTT染色法测定细胞活性。统计分析后发现∶随着共培养体系中前体脂肪细胞比例增加,共培养细胞活性增加;共培养10d以后不同混合比例细胞活性有着显着差异(P<0.05);混合比例为2∶1时共培养细胞活性最高。综上,为了获得最好的牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞共培养效果,达到较高的细胞培养活性,建议牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞按5∶1或2∶1的混合比例进行共培养。(本文来源于《青海畜牧兽医杂志》期刊2019年02期）
陈哲,罗庆,宋关斌[4]（2018）在《跑台抗阻训练促进肌肉卫星细胞激活及骨骼肌增生》一文中研究指出目的抗阻训练有助于骨骼肌功能维持,肌肉卫星细胞是调控骨骼肌稳态维持及损失修复的关键干细胞,阐明抗阻训练对骨骼肌的影响及肌肉卫星细胞在其中的作用将有助于筛选运动效应替代物。方法 采用C57/B6小鼠为实验材料,利用小鼠跑台对小鼠进行持续4周的跑台训练(4次/周,跑台速度15 m/min)。结果 小鼠经过4周的抗阻训练后,发现抗阻训练后的小鼠骨骼肌中的tibialis anterior (TA)组织有明显增生现象,表现为TA质量显着增加,单根肌纤维上的细胞数增加以及肌纤维横截面积显着增加。通过对小鼠骨骼肌进行Bacl_2注射诱导损伤,(本文来源于《第十二届全国生物力学学术会议暨第十四届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编》期刊2018-08-17）
文河保[5]（2018）在《肌卫星细胞修复短跑运动员肌肉损伤动物模型研究》一文中研究指出常见的运动员肌肉损伤主要分为肌肉组织的扭伤、拉伤和挫伤叁种。肌肉损伤在短跑运动中发病率最高,肌肉损伤居短跑运动员损伤之首,严重影响运动员机能水平、运动能力和运动成绩。研究肌肉损伤的修复治疗成为临床医学和运动医学的热门方向。现阶段,修复治疗受损肌肉惯用的方法有药物治疗、手术治疗、中医针灸推拿、物理疗法等。经过临床验证,以上疗法对肌肉损伤有一定的疗效,但治疗周期长、易产生瘢痕、降低肌肉功能。干细胞在人体生长发育和受损组织再生修复中起着至关重要的作用,国家“十二五”时期,干细胞治疗运动损伤的相关研究突飞猛进,硕果累累,国家“十叁五”又将干细胞研究纳入规划中,体育和医学领域对干细胞疗法的未来信心十足。本研究旨在体外分离培养肌卫星细胞,建立肌卫星细胞扩增培养体系,并对肌卫星细胞的增殖、分化等生物学特性进行检测,设计动物肌肉损伤模型,注射肌卫星细胞进行干预,检测移植后的干细胞在体内迁移和修复情况,获得实验结果如下:1.运用机械分离法、Ⅰ型胶原酶和胰酶联合消化法分离胎羊胫骨前肌来源的肌卫星细胞,获得的细胞通过差速分选法纯化并培养至31代,经冻存复苏后,细胞仍拥有较高的活率;通过RT-PCR、流式细胞术和免疫荧光对体外增殖的干细胞进行表面特异性标记物鉴定,结果显示:细胞对MYOG、MYF5、PCNA、C-MET、desmin等基因均表达较高的阳性率,表明分离筛选后的细胞具有肌卫星细胞的特征。2.对培养的细胞进行“干性”(stemness)研究。根据细胞扩增特点检测克隆形成能力以及绘制生长曲线,并使用含有不同因子的培养基诱导肌卫星细胞向成脂细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞分化,对分化的细胞用RT-PCR技术和免疫组织化学技术检测相关基因的表达,检测结果均为阳性。表明所分离的细胞符合干细胞的相关特征,为肌卫星细胞。3.利用心脏毒素(Cytotoxin,CTX)建立小鼠肌肉损伤模型,制作石蜡病理切片染色后观察,发现大部分正常肌肉组织结构受损,血清学检测发现小鼠血液中肌酸激酶(CK)明显高于正常范围。用CM-Dil细胞示踪剂标记培养的肌卫星细胞后,将其直接注射到小鼠肌肉损伤部位,设定7个时间梯度,每个梯度均取组织和血液样品做石蜡病理切片、冰冻切片和血清学检测。研究结果表明移植的干细胞对肌肉损伤有较好的修复作用。综上所述,本研究分析了短跑运动员肌肉损伤和干细胞研究进展,并在体外成功分离培养了肌卫星细胞,并对其“干性”进行了验证,利用肌卫星细胞修复小鼠肌肉损伤,为干细胞促进组织再生修复提供理论基础以及为干细胞治疗运动损伤从而更好的应用于临床研究提供实验依据。(本文来源于《牡丹江师范学院》期刊2018-06-09）
乌日罕[6]（2018）在《乌珠穆沁羊骨骼肌卫星细胞的培养及其分化过程中肌肉与肌内脂肪相关基因的表达变化》一文中研究指出乌珠穆沁羊是中国着名的优良肉畜品种,为了研究其肌肉生长发育机制,建立体外培养模型,并研究如何提高该肉畜的产肉性能与肉质为本研究主要目的。骨骼肌卫星细胞(SMSCs)主要与骨骼肌生长和修复相关,因此本研究主要以SMSCs为模型,进行分离纯化,鉴定与培养特性分析,并诱导其成为脂肪细胞与骨骼肌细胞,同时探讨了SMSCs在分化过程中肌肉与肌内脂肪相关基因的表达变化。研究结果表明:通过改良传统的细胞分离方法—原代外植块培养法,结合改良的差速贴壁法分离得到了高纯度的乌珠穆沁羊骨骼肌卫星细胞,此方法所得细胞培养至18代均未出现衰退现象,细胞仍然能够保持较好的形态特征。将所得卫星细胞通过免疫组织化学实验结合RT-PCR方法进行鉴定,证明所分离得到的细胞确实为骨骼肌卫星细胞。培养特性研究结果表明,所得SMSCs在细胞汇合度符合要求的前提下,培养周期不能超过7天;最佳冷冻保护液配方为40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO。HE染色结果证明,所建立乌珠穆沁羊骨骼肌卫星细胞分离纯化方法适于建立该细胞稳定细胞系,且可继代培养至18代。成肌诱导后细胞的形态学变化表明,成肌诱导后的第12天开始形成大量多核肌管。成肌诱导后的MRFs家族四个基因相对表达量均呈现上升趋势)。Myostatin基因表达量变化相反,在成肌诱导后呈现极显着性下降(p<0.01)。此现象证明在成肌诱导后,Myostatin抑制骨骼肌生长的作用受到了很大程度的抑制,从而促进了骨骼肌的生长发育。随着月龄的增加,MRFs家族四个因子表达量随之下降,Myostatin表达量则呈现上升趋势。成脂诱导后细胞的形态学变化表明,相较于成肌分化,骨骼肌卫星细胞的脂肪分化速度较慢,SMSCs在成脂诱导后第15天,出现较大的脂滴,Oil red-o染色呈阳性。成脂诱导后FAS基因表达量无明显变化,PPARγ表达量提高且差异显著(p<0.05)。随着月龄的增加,肌内脂肪相关基因的表达量随之增加。不同月龄个体骨骼肌卫星细胞的分化结果如下:胚胎期个体骨骼肌卫星细胞中的MRFs家族四个基因的表达量在成肌诱导时呈现不同程度的上调,成脂期间呈现不同程度下调。Myostatin基因在不同月龄个体中的表达量大致相同,在成肌与成脂分化期间均有不同程度下调现象。肌内脂肪相关基因FAS和PPARγ在不同月龄个体中出现了规律性的变化,成肌分化中不同程度下调,成脂分化中不同程度上调。本研究结果在促进乌珠穆沁羊骨骼肌生长与肥大,从而促进瘦肉生产率并提高肉品质以及保护地区优势品种——乌珠穆沁羊,建立其体外培养机制等方面,均可以提供科学的理论数据。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
徐佳慧[7]（2018）在《脂肪酸通过ELOVL3促进牛肌肉卫星细胞分化》一文中研究指出肌肉的生长和发育的过程除了受到遗传因素调节以外还受到一系列环境因素所调节,例如脂肪酸、维生素、激素、氨基酸等。肌肉卫星细胞(MDSCs)是一种肌肉干细胞,在肌肉损伤时,有的能够通过有丝分裂进行自我更新,有的能够通过分化形成肌管进而相互融合形成新的肌纤维,还有的能够在分化过程中与原有的肌纤维融合。MDSCs的这种潜在的增肌特性在畜牧生产过程中有着十分重要的意义。发现参与调控MDSCs增殖和分化的新因素并研究其调控机制,有助于开发新的育种方法从而改善家畜的肌肉产量。最近有研究表明,某些脂肪酸在小鼠、大鼠和鸡的肌源干细胞的增殖和分化的过程中起到了调控作用。然而,关于脂肪酸是否能调控牛MDSCs增殖或分化的研究尚未见报道。本研究的前期实验结果表明,用外源脂肪酸处理牛MDSCs并诱导分化后ELOVL3的mRNA表达量显着增加,并且在牛MDSCs分化过程中ELOVL3的mRNA表达量也显着增加,因此我们推测ELOVL3和脂肪酸在牛MDSCs分化的过程中可能起到了重要的作用。ELOVL3作为一种脂肪酸延长酶,在脂肪酸的代谢过程中扮演了重要的角色。这种酶主要在动物的肝脏和棕色脂肪组织中表达,可参与调控饱和不饱和极长链脂肪酸(VLCFAs)中多达24个碳原子的碳链的伸长过程的起始和速率控制。有大量研究表明,除了肝脏和棕色脂肪组织,ELOVL3在白色脂肪组织和皮肤中也有大量的表达。然而,关于ELOVL3在动物肌肉细胞中表达和功能的报道却很少,而关于该蛋白在牛MDSCs中的表达及功能的研究尚未见报道。因此,本研究的主要目的是:探究脂肪酸对牛MDSCs分化和增殖过程的影响;探究ELOVL3在牛MDSCs分化过程中的表达规律;探究ELOVL3的表达变化对牛MDSCs分化的影响;探究脂肪酸促进牛MDSCs分化的功能与ELOVL3的关系。主要获得下述研究结果:1.通过在牛MDSCs的分化培养液中添加外源脂肪酸PA、OA和DHA,并应用免疫荧光技术和Western Blot技术,研究不同类型的脂肪酸对牛MDSCs分化的影响。结果表明,上述几种脂肪酸能够使细胞的肌管融合率和肌管长度显着增加,肌肉分化标志分子MYOG和MYH3的表达量也显着性升高。此外,添加了脂肪酸的牛MDSCs中ELOVL3的表达量也显着性升高;2.通过在牛MDSCs的生长培养液中添加外源脂肪酸PA、OA和DHA,并应用流式细胞术和EdU掺入实验,研究不同类型的脂肪酸对牛MDSCs细胞周期和增殖的影响。结果表明,上述几种脂肪酸对牛MDSCs的细胞周期和细胞增殖均无显着性影响;3.通过诱导牛MDSCs分化,并应用免疫荧光技术和Western Blot技术,研究ELOVL3在牛MDSCs分化过程中的表达规律。结果表明,ELOVL3的表达量随着MDSCs分化程度的增加而逐渐增加;4.通过CRISPRa激活技术和siRNA干扰技术激活或干扰牛MDSCs中ELOVL3的表达,并应用免疫荧光技术和Western Blot技术,研究ELOVL3的表达变化对牛MDSCs分化的影响。结果表明,激活ELOVL3的表达能够使细胞的肌管融合率和肌管长度显着增加并且肌肉分化标志分子MYOG和MYH3的表达量也显着性升高,干扰ELOVL3的表达能够使细胞的肌管融合率和肌管长度显着降低并且肌肉分化标志分子MYOG和MYH3的表达量也显着性下降;5.通过在牛MDSCs的分化培养液中添加外源脂肪酸PA、OA和DHA,同时,用siRNA干扰ELOVL3的表达,并应用免疫荧光技术和Western Blot技术,研究脂肪酸对MSDCs分化的作用与ELOVL3表达量的关系。结果表明,ELOVL3的表达被干扰时,各脂肪酸处理组的细胞的肌管融合率和肌管长度显着降低并且肌肉分化标志分子MYOG和MYH3的表达量也显着性下降;6.通过应用荧光染色技术和激光共聚焦显微成像技术对牛MDSCs中的ELOVL3和脂滴进行亚细胞定位,研究ELOVL3和脂滴的定位关系。结果表明,ELOVL3与脂滴的亚细胞定位具有一致性。上述研究及结果表明,外源脂肪酸PA、OA和DHA对牛MDSCs的分化具有促进作用但对MDSCs的增殖无影响,ELOVL3对牛MDSCs的分化具有促进作用,并且上述叁种外源脂肪酸对牛MDSCs的分化的促进作用需要通过ELOVL3来实现。根据本研究的结果,开发新的育种策略和营养供应方法,有望改善家畜的肌肉产量。(本文来源于《东北农业大学》期刊2018-06-01）
刘畅[8]（2018）在《ECM2基因对牛肌肉卫星细胞分化的影响》一文中研究指出肌肉的成长发育受到遗传和环境等因素作用。细胞外基质不仅仅为细胞提供着支撑的作用,而且对于细胞的迁移、增殖和分化等生理过程也有着重要的调控作用。近来研究发现,细胞外基质(the extracellular matrix,ECM)中的富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(the secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)家族能够调控肌肉的分化,并且SPARC在组织发育以及细胞增殖分化过程中都有着很强的表达。ECM2(the extracelluar matrix 2)是SPARC家族的一员。我们实验室前期通过高通量测序,发现ECM2在分化第叁天牛肌肉卫星细胞(muscle-derived satellite cells,MDSCs)中的表达量显着高于其在分化第一天MDSCs中的表达量。因此,本实验以从新生胎牛中分离出来的牛MDSCs为实验材料,探究ECM2基因对牛MDSCs分化的影响。本实验研究了ECM2基因在牛MDSCs分化过程中的表达情况,利用CRISPR-dCase9系统激活和抑制ECM2基因后,探究其对牛MDSCs分化的影响;探究ECM2基因对PI3K信号通路的调控作用。实验结果如下:(1)为了探究ECM2在牛MDSCs分化过程中的表达规律,收集分化第0、1、3、5、7、9天的细胞及培养液中的蛋白样本。通过Western blot和免疫荧光技术,检测牛MDSCs分化过程中细胞内ECM2蛋白的表达变化,结果发现随着牛MDSCs的分化,细胞中ECM2的表达量逐渐上升,并于第5天后表达趋于平稳。同时也检测了分泌到培养液中ECM2的含量,培养液中ECM2的含量也逐渐升高,并在3-5天时达到高峰。(2)利用CRISPR-dCase9系统,分别构建了ECM2基因的叁个激活载体和叁个抑制载体,将其转染至牛MDSCs后诱导分化48 h,收集细胞中的蛋白质,经过Western blot检测,筛选出激活和抑制效果最好的载体。结果发现,pSPgRNA-N1为最佳的激活载体;pSPgRNA-N2为最佳的抑制载体。(3)为了探究激活ECM2基因对牛MDSCs分化的影响,将筛选好的激活ECM2基因的载体,转染牛MDSCs,后将MDSCs诱导分化,利用免疫荧光染色技术,观察肌管形态以及统计肌管融合率的变化。结果显示,肌管形态变粗变长,肌管融合率显着增加。利用Western blot技术,检测其肌肉分化相关基因MYH3和MYOG的表达情况。结果发现激活ECM2基因后,细胞中的MYH3和MYOG的表达量都显着升高。说明激活ECM2基因能促进牛MDSCs的分化。(4)为了探究抑制ECM2基因的表达对牛MDSCs分化的影响,将筛选好的抑制ECM2基因的载体转染牛MDSCs中,后诱导分化,利用免疫荧光染色技术,观察肌管形态以及统计肌管融合率的变化。结果显示,肌管形态变短,并且肌管融合率显着下降。利用Western blot技术,检测其肌肉分化相关基因MYH3和MYOG的表达情况。结果发现抑制ECM2基因后,细胞中的MYH3和MYOG的表达量显着降低。说明抑制ECM2基因会使牛MDSCs的分化程度降低。(5)为了探究ECM2作用的分子机理,研究了ECM2与PI3K信号通道的关系,通过CRISPR-dCase9系统激活和抑制ECM2基因后,观察PI3K、Akt的蛋白水平及磷酸化水平。结果显示,激活ECM2基因后,PI3K和Akt的磷酸化水平都下降了;抑制ECM2基因,PI3K和Akt的磷酸化水平都升高了。说明ECM2基因能够抑制PI3K信号通路。接下来,为了探究PI3K信号通路对牛MDSCs分化的影响,使用PI3K信号通路抑制剂LY294002抑制PI3K信号通路,观察牛MDSCs分化相关基因MYH3和MYOG的表达情况。结果是MYH3和MYOG的表达量都上升了。上述结果说明,ECM2基因通过抑制PI3K信号通路来促进牛MDSCs的分化。本实验首次证实了ECM2基因对牛MDSCs分化的影响,证明了ECM2基因能够促进牛MDSCs的分化,而且进一步指出了ECM2基因通过抑制PI3K信号通道来促进牛MDSCs的分化。为家畜牛的遗传育种提供理论依据。(本文来源于《东北农业大学》期刊2018-06-01）
郝卫杰[9]（2018）在《RanGAP1对牛肌肉卫星细胞分化的影响》一文中研究指出肌肉卫星细胞是一种在肌肉发育过程中紧贴在骨骼肌细胞表面扁平有突起的肌源性干细胞,是发育生物学研究的重要内容,在发育过程中会融合成多核肌管,最后形成肌纤维。本研究以牛肌肉卫星细胞(Muscle-Derived Satellite Cells,MDSCs)为研究对象,通过体外培养、体外分化、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色等实验技术,检测RanGTPase的激活蛋白RanGAP1(RanGTPase activating protein 1)在牛MDSCs体外分化过程中表达的变化,研究RanGAP1在过表达和低表达时,对MDSCs体外分化过程的影响,探究RanGAP1在MDSCs体外分化过程中与PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路的关系,来探讨RanGAP1对牛肌肉卫星细胞分化的影响。具体实验内容及结果如下:(1)RanGAP1表达水平研究:通过牛MDSCs体外分化,收集分化0 d、1 d、2 d、3 d的蛋白样,Western blot结果显示,随着体外分化时间的增加,RanGAP1的蛋白含量逐渐增加,MYOG的蛋白含量也逐渐增加。另外,通过免疫荧光染色分化0 d、1 d、3 d的体外分化的牛MDSCs,发现0 d没有肌管形成,1 d开始出现小型肌管,3 d小型肌管开始融合,形成多核肌管。(2)RanGAP1的过表达:通过CRISPR-dCas9技术构建激活载体vpr+R3。转染24h后,RanGAP1的蛋白含量增加,同时分化标记因子(myogenin,MYOG)的含量也同时增加。免疫荧光染色结果显示,vpr+R3组的肌管融合率明显增高。(3)抑制RanGAP1的表达:通过CRISPR-dCas9技术构建抑制载体dcas9+R3,转染24 h后,RanGAP1蛋白含量降低,同时MYOG的含量也降低。免疫荧光染色结果显示,dcas9+R3组的肌管融合率明显降低。(4)RanGAP1与PI3K/AKT信号通路的关系:牛MDSCs分化培养体系中加入PI3K抑制剂LY294002 24 h后检测,显示抑制剂组RanBP2、RanGAP1和MYOG的蛋白含量都下降。(5)RanGAP1与MAPK/ERK1/2信号通路的关系:牛MDSCs分化培养体系中加入MAPK/ERK抑制剂U0126 24 h后检测,显示抑制剂组RanBP2、RanGAP1和MYOG的含量都没有明显变化。结果表明:RanGAP1促进牛MDSCs分化,在分化过程中受PI3K/AKT信号通路的调控,而不受MAPK/ERK1/2信号通路的影响。(本文来源于《东北农业大学》期刊2018-06-01）
高丽,胡思敏,谷明娟,王丽荣,扈廷茂[10]（2016）在《反义RNA干扰MSTN对牛肌肉卫星细胞脂肪生成相关基因的影响》一文中研究指出肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)属于转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)超家族成员,在骨骼肌中高表达;敲除MSTN后,肌肉质量增加、脂肪含量变少,但抑制MSTN表达后,如何影响脂肪沉积,尚未研究清楚。为了探究抑制MSTN表达后对脂肪相关基因表达的影响,本研究利用反义RNA技术,成功构建了双向表达载体p MSTN-CMV-CAG-anti MSTN,并通过Western blot筛选出抑制效果最佳的MSTN的反义载体。利用最佳反义MSTN载体在牛(Bos taurus)肌肉卫星细胞中有效干扰MSTN表达后,检测了脂肪合成相关基因(脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN),乙酰Co A羧化酶(acetyl-Co A carboxylase,ACC)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-Co A desaturase-1,SCD-1))、脂肪酸氧化分解相关基因(肉毒碱棕榈酰转移酶IB(carnitine palmitoyltransferase 1b,CPT-IB),乙酰辅酶A氧化酶(acyl-Co A oxidase,ACOX1)和烯酰辅酶A水合酶(enoyl-Co A hydratase 1,ECHDC1))以及脂肪转运蛋白(fatty acid transport proteins,FATP)表达的变化。结果显示,在MSTN基因被干扰后,肌肉卫星细胞中脂肪酸合成相关基因表达量上调,脂肪氧化分解相关基因中ACOX1和CPT-1B表达量上调,而ECHDC1基因表达量下调,另外,FATP表达基本没有变化。MSTN功能缺失后,脂肪合成和脂肪氧化分解过程都得到了加强,所以MSTN敲除所导致的脂肪减少并不是由于抑制了脂肪合成,而是由于脂肪分解加强,为肌肉提供更多的能量。MSTN下调后,CPT-1B的表达上调最为显着,而CPT-1B是脂肪酸β氧化的关键基因,所以研究结果提示MSTN对于脂肪的影响主要是通过影响β氧化过程实现的。研究结果为MSTN下调所导致的脂肪含量下降提供了理论依据,为MSTN作用于脂肪沉积的机制做出了初步探讨。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2016年12期）
肌肉卫星细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究牛骨骼肌的发育对牛肉生产行业具有重要意义。在哺乳动物中,骨骼肌来自胚胎中胚层,并且通过逐渐发育过程受到高度调节。最初,肌源性祖细胞分化成为成肌细胞,成肌细胞通过增殖,分化和融合形成多核肌管,最后形成成熟的肌纤维。这一系列过程受到很多基因的调控。WD重复蛋白13(WD repeat domain 13,WDR13)属于WD重复基序家族,其在脊椎动物中高度保守。WDR13基因在大多数组织中表达,在胰腺,脑,睾丸和卵巢中表达较高。有研究表明,WDR13的缺失导致小鼠胰腺β细胞增殖的增强,而增加JNK活性的糖尿病小鼠模型中缺乏这种蛋白质显示出AP1靶基因水平的降低和保护免受炎症反应。然而,WDR13的很多功能研究目前尚不清楚。在本实验室前期研究工作中,我们通过对分化的牛肌肉卫星细胞(muscle-derived satellite cells,MDSCs)进行高通量测序,结果发现WDR13在牛MDSCs中随着细胞分化,其表达量也呈现增加的趋势,所以我们推测WDR13可能影响牛MDSCs的分化。同时在实验室另一项研究中,我们通过免疫共沉淀结果发现WDR13与磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PI3K inter-acting protein 1,PIK3IP1)相互作用,有研究表明PIK3IP1是PI3K的负调节因子,而PI3K/AKT信号通路对于细胞的增殖,分化有很重要的影响,所以我们推测WDR13可能通过影响PI3K/AKT信号通路从而影响牛MDSCs的分化。具体研究内容如下,探究WDR13在牛MDSCs分化不同时期的表达和定位。Western blot结果显示WDR13的蛋白表达水平随着分化天数的增加而增加,免疫荧光结果显示,随着牛MDSCs的分化,肌管变得更多更长,而且WDR13染色在较长的肌管中表达量更高,激光共聚焦结果显示WDR13主要在细胞质中表达,在细胞核内没有检测到荧光信号;探究激活WDR13基因后对牛MDSCs分化的影响。我们构建并获得了激活WDR13表达效果最好的CRISPR载体pSPgRNA-B1。将其与SP-dCas9-VPR共转到牛MDSCs中。免疫荧光结果显示,激活WDR13后肌管明显变粗变长,肌管融合率升高0.38倍,Western blot结果显示,激活WDR13后MYOG和MYH3的蛋白表达量也明显增加。证明激活WDR13促进牛MDSCs的分化;探究抑制WDR13基因后对牛MDSCs分化的影响。我们构建并获得了抑制WDR13表达效果最好的CRISPR载体pSPgRNA-B4。将其与dCas9共转到牛MDSCs中。免疫荧光结果显示,抑制WDR13表达后肌管明显变细变短,肌管融合率降低0.23倍,Western blot结果显示,抑制WDR13表达后MYOG和MYH3的蛋白表达量也明显降低。证明抑制WDR13抑制牛MDSCs的分化;探究PI3K/AKT信号通路对牛MDSCs分化的影响。在牛MDSCs中体外添加PI3K特异性抑制剂LY294002后,免疫荧光结果显示,其肌管明显变粗变长,肌管融合率升高0.21倍,Western blot结果显示,信号通路相关蛋白P-PI3K和P-AKT的表达量明显降低,而MYOG和MYH3的蛋白表达量明显增加。证明抑制PI3K/AKT信号通路促进牛MDSCs的分化;探究WDR13对PI3K/AKT信号通路和牛MDSCs分化的影响。激活WDR13后,Western blot结果显示,信号通路相关蛋白P-PI3K和P-AKT的蛋白表达量明显降低,而MYOG和MYH3的蛋白表达量明显增加,抑制WDR13后,信号通路相关蛋白P-PI3K和P-AKT的蛋白表达量明显增加,而MYOG和MYH3的蛋白表达量明显降低。证明WDR13通过影响PI3K/AKT信号通路促进牛MDSCs分化。以上结果表明WDR13促进牛MDSCs分化。同时WDR13通过影响PI3K/AKT信号通路促进牛MDSCs分化。这为我们研究WDR13基因促进肌肉分化的作用,以及探索肌肉生长发育的机理从而提高肉牛的肌肉产量提供帮助。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肌肉卫星细胞论文参考文献
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