导读:本文包含了细胞骨架重排论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:骨架,细胞,蛋白,信号,微血管,内皮,基质。
细胞骨架重排论文文献综述
黄静,张璐,陈星华,杨英杰,李紫燃[1]（2019）在《高糖环境下IQGAP1在足细胞中的表达及其对足细胞骨架重排的调节作用》一文中研究指出目的观察高糖环境下IQ结构域GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)在足细胞中的表达情况,并探讨IQGAP1在调节高糖诱导的足细胞骨架重排中的作用及其可能的机制。方法 (1)体外培养永生化的小鼠足细胞。取一部分足细胞加入不同浓度葡萄糖(5 mmol/L、10 mmol/L、15 mmol/L、20 mmol/L、25 mmol/L、30 mmol/L)刺激48 h,另取一部分细胞加入高浓度葡萄糖(30 mmol/L)刺激不同时间(0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h),检测各组足细胞IQGAP1蛋白的表达情况。(2)将足细胞分为正常糖浓度组(5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组)、高渗对照组(5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇,HO组)、HG+IQGAP1质粒转染组、HG+空质粒转染组、NG+IQGAP1质粒转染组、NG+空质粒转染组。给予相应干预后,比较NG组、HG组、HO组足细胞的IQGAP1蛋白表达情况及纤维状肌动蛋白(F-actin)骨架分布,比较NG组、HG组、HG+IQGAP1质粒转染组、HG+空质粒转染组足细胞的F-actin骨架分布,比较6组足细胞的IQGAP1蛋白及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)表达情况、IQGAP1和Cdc42蛋白的结合情况。结果 (1) 30 mmol/L葡萄糖刺激后足细胞的IQGAP1蛋白表达水平低于5 mmol/L葡萄糖刺激后的水平(P<0.05),高糖刺激48 h后的足细胞IQGAP1蛋白表达水平低于高糖刺激0 h后的水平(P<0.05)。(2) HG组足细胞的F-actin排列紊乱,F-actin形成核外周环,F-actin外周环评分(CFS)高于NG组(P<0.05)。(3) HG+IQGAP1质粒转染组的足细胞骨架重排部分逆转,CSF低于HG组(P<0.05)。(4) HG+IQGAP1质粒转染组的IQGAP1蛋白及Cdc42表达水平、两者结合水平均高于HG组(均P<0.05)。结论高糖刺激可减少IQGAP1及Cdc42蛋白表达以及两者结合,并诱导足细胞骨架重排,而IQGAP1可能通过与Cdc42结合调节细胞骨架重排。(本文来源于《广西医学》期刊2019年07期）
陈金丽[2]（2018）在《PI3K-mTOR-RhoA通路调控细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力的关系》一文中研究指出背景和目的:慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)发病率和死亡率呈逐年上升趋势,疾病负担重,但其具体发病机制不清。研究发现,肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能下降是慢阻肺急性加重的重要原因之一,AM吞噬过程主要与细胞骨架重排有关;另有研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-Ras同源基因家族成员A(RhoA)信号通路参与调控细胞骨架重排,但PI3K-mTOR-RhoA信号通路调控细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力的研究鲜见报道,故本研究采用基因干扰(RNAi)技术沉默该通路的PI3K、mTOR蛋白,探讨PI3K-mTOR-RhoA信号通路调控细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力的关系及其具体机制。方法:培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,实验分为4组:空白组(不进行转染)、阴性对照组(用含随机序列的短发夹RNA,即shRNA转染细胞)、沉默PI3K基因组(PI3K-RNAi组)和沉默mTOR基因组(mTOR-RNAi组)。蛋白印迹法(Western blot)检测基因沉默效率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应检测PI3K、mTOR、RhoA的mRNA水平;Western blot检测PI3K、mTOR、RhoA和磷酸化RhoA(p-RhoA)蛋白的表达;激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架形态;流式细胞术检测细胞吞噬异硫氰酸酯荧光素标记大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,平均荧光强度(MFI)和吞噬阳性细胞百分比(吞噬%)代表吞噬能力的强弱。结果:1.基因沉默效率:PI3K和mTOR的基因沉默效率分别为(62±7)%、(61±8)%。2.各组PI3K、mTOR、RhoA的mRNA和蛋白及磷酸化RhoA(p-RhoA)蛋白表达:(1)PI3K-RNAi组PI3K、mTOR、RhoA的mRNA、蛋白表达和p-RhoA[(0.29±0.07、0.38±0.02)、(0.54±0.13、0.72±0.02)、(0.59±0.06、0.74±0.03)和0.68±0.02]均低于空白组[(1.00±0.00、1.00±0.04)、(1.00±0.00、1.00±0.04)、(1.00±0.00、1.00±0.04)和1.00±0.06]和阴性对照组[(0.98±0.05、1.00±0.04)、(1.01±0.11、1.01±0.08)、(0.99±1.03、1.00±0.04)和1.03±0.07](均Р<0.01);(2)mTOR-RNAi组mTOR的mRNA、蛋白表达(0.30±0.08、0.39±0.02)均较空白组、阴性对照组减低(均Р<0.01),RhoA的mRNA、蛋白和p-RhoA蛋白表达[(1.40±0.21、1.54±0.04)和1.33±0.01]较空白组和阴性对照组升高(均Р<0.01)。3.各组细胞骨架形态变化:PI3K-RNAi组细胞形态僵硬,丝状伪足伸出短小、杂乱,应力纤维数量减少;mTOR-RNAi组细胞变形更为明显,丝状伪足伸出更细长而密集,应力纤维数量明显增加;空白组和阴性对照组细胞变形较明显,丝状伪足伸出较长,应力纤维数量较多。4.各组细胞吞噬FITC-E.coli的能力:PI3K-RNAi组MFI及吞噬%[7435±705、(70.73±2.66)%]均较空白组[11733±935、(79.97±1.07)%]和阴性对照组[10983±954、(79.60±1.17)%]减低(均Р<0.01);mTOR-RNAi组MFI及吞噬%[18583±1090、(87.72±1.58)%]均较空白组和阴性对照组增加(均Р<0.01);空白组和阴性对照组MFI及吞噬%无差异(Р>0.01)。5.相关性分析:RNAi沉默前后,各组细胞PI3KmRNA、蛋白表达与mTORmRNA、蛋白表达呈正相关(均Р<0.05);PI3KmRNA、蛋白表达与RhoAmRNA、蛋白、p-RhoA蛋白表达呈正相关(均Р<0.05);mTORmRNA、蛋白表达与RhoAmRNA、蛋白、p-RhoA蛋白表达呈负相关(均Р<0.05);PI3K、RhoA的mRNA和蛋白表达和p-RhoA与MFI和吞噬%均呈正相关(均Р<0.05);mTOR mRNA和蛋白与MFI和吞噬%均呈负相关(均Р<0.05)。结论:1.慢病毒转染法可以成功沉默PI3K、mTOR基因;2.细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力改变有关;3.PI3K-m TOR-RhoA信号通路调控细胞骨架重排;4.PI3K正性调控mTOR-RhoA通路,促进细胞骨架恰当重排,增强巨噬细胞吞噬能力;mTOR负性调控该通路,抑制细胞骨架恰当重排,减弱巨噬细胞吞噬能力。(本文来源于《兰州大学》期刊2018-04-01）
宋明谕,田发发,黄霞,丁冬雪[3]（2015）在《FAK-p120RasGAP-Ras介导的细胞骨架重排信号通路在戊四氮点燃模型中的表达变化以及与苔藓纤维出芽发生的关系》一文中研究指出目的在戊四氮慢性点燃模型中动态观察FAK-p120GAP-Ras介导的细胞骨架重排信号通路在戊四氮点燃模型中的表达变化以及与癫痫和苔藓纤维出芽发生的关系。方法 6-8周健康雄性SD大鼠,共150只,随机分为戊四氮组(n=90)和对照组(n=60)。戊四氮组予以每日腹腔注射戊四氮亚惊厥剂量(35mg/kg)建立慢性点燃颞叶癫痫模型,对照组每日予以腹腔注射等量的生理盐水。根据首次腹腔注射后第3天、1周、2周、4周和6周将实验组和对照组均随机分为5个亚组,其中戊四氮组每个亚组18只大鼠,对照组(本文来源于《第六届CAAE国际癫痫论坛摘要集》期刊2015-10-29）
潘劲松,吴建楠[4]（2015）在《Rho信号通路在张应变诱导的人牙周膜细胞细胞骨架重排中的作用》一文中研究指出目的:正畸牙齿移动是建立在牙周组织受力后所发生的生物学改建的基础上的,与正畸牙齿移动相关的改建包括牙骨质、牙周膜与牙槽骨的改建。矫治力作用于牙齿之上,牙周膜内的细胞感受机械刺激发生迁移以及细胞骨架的改变,研究正畸加力初期对人牙周膜细胞细胞骨架重排的影响,明确Rho信号通路在张应变诱导的人牙周(本文来源于《第十一届全国生物力学学术会议暨第十叁届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编》期刊2015-10-10）
梁强[5]（2014）在《HAb18G/CD147在肝癌中调节vinculin介导的黏着斑形成和细胞骨架重排的作用研究》一文中研究指出细胞骨架是组成细胞结构体系之一。主要分为:微管、微丝、中间纤维叁种类型。在细胞的运动和形态改变中,微丝发挥了重要作用。尤其是在肿瘤细胞的侵袭转移过程中,细胞骨架的重排是侵袭转移等肿瘤恶性行为发生的必要条件。肿瘤细胞的细胞骨架骨架的形成是以vinculin为标志蛋白,并调节黏着斑(Focal adhesion,FA)的形成。黏着斑的大约由几十种蛋白组成,常见的有integrin、FAK、talin、paxillin、vitronectin、actin等。HAb18G/CD147(CD147)是细胞表面的糖基化单次跨膜蛋白,属于免疫球蛋白超家族成员,是肿瘤侵袭和转移的标志性分子,不良预后的标志物。之前的大量研究已经发现CD147能够影响肝癌细胞骨架重排。但CD147调节细胞骨架的机制尚不清楚。为了研究CD147高表达调节肝癌细胞侵袭转移和影响细胞骨架重排的机制。我们采用分子生物学方法western blot,荧光报告基因,结合细胞水平下激光共聚焦观察细胞形态,骨架染色、黏着斑荧光漂白恢复FRAP、荧光能量共振转移FRET等新方法,对细胞骨架和运动相关功能进行检测。结果显示CD147参与了vinculin介导的黏着斑蛋白复合物的形成,动态调节其聚合和解离。通过和标志性蛋白vinculin的直接相互作用影响黏着斑的面积和强度,从而导致了细胞骨架的重排。第一部分:CD147调节vinculin的表达及其相互作用K7721细胞系是在之前SMMC-7721肝癌细胞系的基础上,对CD147分子进行敲除,经过筛选得到的稳定细胞系。在K7721细胞的基础上我们又稳定转染pc DNA3.1-CD147质粒,筛选并获得回复CD147表达的细胞系R7721。细胞系T7721细胞是本实验室先前构建的SMMC-7721过表达CD147的肝癌细胞系。我们将对这四株细胞系中CD147和vinculin的表达量进行检测。采用si RNA分别干涉CD147和vinculin的方法检测蛋白表达的相互调控。免疫荧光染色的方法观察细胞内CD147和vinculin的定位关系,免疫共沉淀采用用本室自制的CD147抗体,vinculin抗体,mouse-Ig G对树脂柱进行处理,之后用western blot的方法检测SMMC-7721细胞株裂解液是否存在结合。最后我们分别构建了p EGFP-CD147、Dsred2-N1-vinculin的携带荧光蛋白的质粒,分别转染SMMC-7721细胞,并采用共转染的方法将两种质粒转入同一细胞中,使用激光共聚焦,观察FRET现象说明其二者发生相互作用发生在小于10nm的距离。实验结果显示,si RNA干涉CD147,使CD147和vinculin的表达量同时下调,而对vinculin的干涉,没有发现CD147表达量的变化。在对四株肝癌细胞系中CD147和vinculin的表达量进行检测时发现,在K7721细胞中,vinculin的表达显着上调,而在高表达CD147的SMMC-7721、R7721、T7721细胞中,vinculin的表达量很低。免疫共沉淀结果显示,在SMMC-7721细胞裂解液中,CD147和vinculin存在结合。之后使用荧光标签的质粒进行FRET实验,共转p EGFP-CD147和Dsred2-N1-vinculin两种质粒的细胞发生了FRET现象,并且在黏着斑的位置这种相互作用较强。以上结果提示CD147与vinculin存在相互作用。第二部分:不同细胞系内黏着斑及骨架的观察Vinculin是构成黏着斑(Focal Adhesion)的主要蛋白,大量的报道证实:vinculin和actin存在直接结合,因此通过vinculin可以直接调节细胞骨架的形成。由于四株细胞系CD147的表达水平不同,观察vinculin为主导的黏着斑的面积、强度、圆度、直径等参数,可以明确CD147的表达对以vinculin为标志的黏着斑的影响。与此同时我们用鬼笔环肽对细胞的骨架进行染色观察,发现四株细胞系各自不相同的黏着斑的参数,和细胞骨架的组织形式,对这些数据进行统计学处理,寻找相互的关系,从而明确CD147通过黏着斑影响细胞骨架,对肝癌细胞的黏附和运动状态产生重要作用。黏附作为一种定向运动必需的重要步骤之一,需要黏着斑的组装和解离,在这个过程中拉伸细胞骨架,在肌球蛋白等的作用下,细胞的前端不断形成点状的FA,而细胞后部的FA不断的解离,细胞就在黏着斑不断动态组装和解离的过程中,产生定向运动。因此CD147对黏着斑的调节最终影响的是细胞的运动过程。由于FA的形成是一个动态过程,我们采用了荧光漂白回复的方法,构建p EYFP-vinculin的质粒,分别转入四株细胞系,在活细胞状态下,采用激光共聚焦488nm的激光100%功率漂白vinculin在细胞膜上形成的黏着斑,同时观察其回复的时间,之后对数据进行处理,代入数学模型公式进行计算得到解离常数。对四种细胞骨架和黏着斑的观察结果显示,SMMC-7721细胞的黏着斑的平均强度大于其他叁种细胞,这说明细胞在相同的黏着斑面积下聚集了更多的vinculin蛋白参与组装,其细胞骨架清晰可见,排列集中,但存在随细胞边缘变化的自然弯曲。在敲除CD147的K7721细胞中,细胞骨架排列紊乱松散,没有明显的微丝束,存在更多的细小分支分布于细胞边缘。R7721回复后,发现细胞呈线性排列,黏着斑分部在骨架两端,其面积和强度较SMMC-7721细胞都有一定程度的减少。T7721的细胞骨架相比于其他细胞比较短小,但黏着斑分部广泛,到达了细胞的中心位置。FRAP的结果同样发现,四株细胞具有完全不同的结合和解离常数。纯数学结合模型的方程拟合SMMC-7721细胞的vinculin回复曲线残差更小,并且经计算,其解离常数的数值最大。第叁部分:CD147对细胞黏附和铺展及细胞形态的影响黏着斑是细胞黏附于细胞外基质的重要方式,当细胞外基质不同时,存在不同的黏附方式,其黏附力的提供也有所不同。本文采用matrigel作为细胞基质预处理培养皿,4℃过夜。细胞铺展实验中,我们采用matrigel胶作为细胞外ECM包被培养板,将消化下来的细胞重悬于无血清培养基,转入包被后的培养板中,在15分钟的间隔时段,以激光共聚焦微分干涉相差显微镜(DICM)观察细胞形态。细胞铺展实验结果显示:细胞铺展速度与黏着斑的生成和聚集程度有重要的相互联系。在对四株细胞铺展的过程观察发现,SMCC-7721、R7721和T7721具有较大的黏着斑,能较快地黏附于matrigel预处理的培养皿底面。而在K7721细胞中由于CD147的敲除,黏着斑蛋白vinculin的荧光信号微弱,长时间内细胞无法贴壁,铺展的过程十分缓慢。在细胞形态方面T7721细胞是以明显的丝状伪足来铺展的,而SMMC-7721的铺展方式是板状伪足。黏着斑的观察结果显示,T7721细胞的黏着斑在细胞底面的整个区域都有分布,而在SMMC-7721、R7721细胞中,黏着斑的生成随着细胞贴壁面积的扩大,会向细胞边缘聚集,而未见黏着斑在细胞中心位置的分布。(本文来源于《第四军医大学》期刊2014-10-01）
潘劲松,王莉,汪廷乐,宋萌[6]（2014）在《Rho信号通路在周期性张应力诱导人牙周膜细胞骨架重排中的作用》一文中研究指出目的探讨周期性张应力对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)骨架重排的影响及Rho信号通路在其中的作用。方法应用FX-5000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLCs施加周期性张应力,幅度为10%,频率为0.1 Hz,加载时间为6 h和24 h。以未加载的细胞作为对照组。应用倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞免疫荧光染色和共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin的变化,并应用Western blot检测Rho通路相关蛋白的表达变化。用Rock的特异性抑制剂Y-27632预处理细胞后,在0.1 Hz,10%幅度条件下,加载6 h和24 h,检测细胞骨架蛋白F-actin的变化和Rho信号通路相关蛋白的表达变化。结果与静态组相比,周期性张应力诱导hPDLCs细胞骨架重排差异有统计学意义,Rho信号通路Rock和p-cofilin蛋白表达增加(P<0.05)。Rock的特异性抑制剂Y-27632可以降低Rock(P<0.05)和p-cofilin蛋白表达和细胞骨架重排。结论周期性张应力可促进体外培养的hPDLCs细胞骨架重排,Rho信号通路参与了此过程。(本文来源于《广东牙病防治》期刊2014年06期）
王莉,汪廷乐,欧学平,宋萌,潘劲松[7]（2014）在《TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排的机制》一文中研究指出目的:牙周病是由多种因素引起的,特别是人牙周膜细胞的缺失。转化生长因子-β1(TGF-β1)是一种多功能细胞因子,在治疗牙周病中发挥重要的作用,但很少有人清楚地研究TGF-β1对人牙周膜细胞的影响。因此,本研究的目的是探讨TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排的信号通路。方法:人牙周膜细胞取自健康的前磨牙,并向同步化处理的细胞中加入10 ng/ml的TGF-β1,并通过相差显微镜观察它们的形态学变化。通过免疫组化和共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白重排。用Western blot分析蛋白表达情况。结果:我们发现TGF-β1诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排,激活ROCK蛋白的表达,并增加p-lIMK和p-cofilin的蛋白表达。ROCK抑制剂Y-27632使ROCK,p-lIMK和p-cofilin的蛋白表达下降。结论:TGF-β1可以诱导人牙周膜细胞细胞骨架重排,并且是通过上凋ROCK,p-lIMK和p-cofilin的活性完成的。本研究可以增强对TGF-β1在治疗牙周疾病方面的作用机制的了解。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2014年08期）
张可,李强,王佳贺,方文刚,陈誉华[8]（2014）在《大肠杆菌K1株毒力岛基因ibeT参与调节脑微血管内皮细胞骨架重排》一文中研究指出目的探讨大肠杆菌K1株毒力岛基因ibeT与人脑微血管内皮细胞(HBMEC)骨架重排的关系。方法从大肠杆菌K1 E44中剔除侵袭基因ibeT,利用ibeT基因缺失突变株侵袭HBMEC 10 min后,再用罗丹明标记的毒伞素对细胞骨架进行染色,荧光显微镜观察。结果 E44与E44:△ibeT均能引起HBMEC的微丝发生重新分布。与E44相比,E44:△ibeT侵袭HBMEC的微丝向细胞周边延伸的程度较E44侵袭后的HBMEC弱,所形成的膜皱褶结构较少。E44侵袭细胞皮质区的肌动蛋白纤维基本消失,E44:△ibeT侵袭HBMEC细胞皮质区的肌动蛋白纤维仍然清晰可见。结论侵袭基因ibeT参与大肠杆菌K1侵袭HBMEC骨架重排。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2014年02期）
彭娜娜,庄红芹,王耀,华子春[9]（2013）在《乳腺癌细胞中MRJ稳定干扰导致MMP-9表达增强和细胞骨架重排》一文中研究指出应用构建稳定乳腺癌细胞系的方法研究MRJ干扰后上调乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶MMP-9的表达,并影响细胞骨架的重排。为了探讨MRJ(S)与MMP-9和细胞骨架的关系,将MDAMB-231细胞转染干扰质粒pRNAT-U6.1/neo-MRJsi,用G418(Zeocin)(600μg/mL)筛选得到MRJ(S)稳定干扰的细胞系,命名为MDA-MB-231/MRJsi。利用Q-PCR和Western blot检测MDA-MB-231/MRJsi细胞和野生型细胞之间MRJ mRNA水平和蛋白水平的差异。利用鬼笔环肽染色和anti-α-tublin的免疫荧光分析观察MDA-MB-231/MRJsi细胞系中微丝和微管的变化。同时,利用明胶酶谱法检测MDA-MB-231和MDA-MB-231/MRJsi细胞系中基质金属蛋白酶MMP-9的酶活性变化并进一步利用Q-PCR检测MRJ干扰后细胞内MMP-9的mRNA水平差异。结果表明,成功构建MRJ稳定干扰的MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系,与野生型MDA-MB-231细胞比较,MDA-MB-231/MRJsi细胞系中MRJ mRNA水平下降了50%(P<0.05),MRJ(S)蛋白表达水平下调70%;细胞骨架微丝和微管发生重排;MMP-9酶活性增强;MMP-9的mRNA水平显着上升(P<0.01),与其酶活性水平变化一致。该文MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系提供了一个研究MRJ(S)与乳腺癌发生发展的细胞模型;MRJ(S)可以影响MDA-MB-231细胞中MMP-9的表达并引发细胞骨架重排。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2013年09期）
林毅[10]（2013）在《血管生成素样蛋白3及不同结构域影响足细胞骨架重排的机制研究》一文中研究指出研究背景大量蛋白尿是肾病综合征的特征性表现,也是直接影响肾脏疾病进展的独立危险因素,其产生与足细胞广泛足突融合有关。拥有大量的足突是足细胞形态学的突出特点,这一结构由足细胞内肌动蛋白细胞骨架所维系。病理情况下的足细胞运动能力增加、肌动蛋白细胞骨架重排是足突广泛融合消失及大量蛋白尿发生的基础。足细胞内肌动蛋白受到诸多分子的精密调控,分布于足细胞基底膜面的整合素家族在其中起重要作用。Rho家族小GTP酶成员,特别是RhoA, Rac1和Cdc42,可以将膜蛋白的分子信号传递到肌动蛋白纤维,被公认为细胞骨架调节过程的分子开关。血管生成素样蛋白3(Angiopoietin-like3, Angptl3)是一种分泌蛋白,正常情况下肾脏仅微量表达,而在多种以蛋白尿为主要表现的肾脏疾病中表达量显着增多。我们的前期研究发现,足细胞分泌的Angptl3参与了蛋白尿的发生,且体外实验证实上调足细胞Angptl3表达可以增强足细胞活动能力。预实验中我们也发现,重组pAngptl3分子干预可使足细胞发生明显的肌动蛋白细胞骨架重排,这一过程的具体分子机制尚不清楚；Angptl3有螺旋样结构域(Coiled-coil domain, CCD)和纤维蛋白原样结构域(Fibrinogen-like domain, FLD)两个不同结构域,这是Angptl3具有多种生物学作用的基础。这两个结构域是否都参与了对足细胞的影响,目前尚不明确。本课题分两部分分别解决以上两个问题。第一部分血管生成素样蛋白3通过小GTP酶影响足细胞肌动蛋白细胞骨架重排的分子机制研究研究目的：探讨Angptl3引起足细胞肌动蛋白纤维重排的主要表现及分子机制。方法：(1)免疫荧光染色检测细胞株WT-1及podocin的表达,鉴定足细胞株；(2)重组Angptl3分子干预培养足细胞,以荧光素标记的鬼笔环肽对足细胞肌动蛋白纤维染色,荧光显微观察肌动蛋白骨架重排情况；(3)重组Angptl3分子干预培养足细胞,以G-LISATM方法检测足细胞小GTP酶的激活情况；(4)阻断剂阻断可被Angptl3活化的小GTP酶,观察Angptl3引起的肌动蛋白骨架重排现象是否消失；(5)阻断整合素αvβ3,然后应用重组Angptl3干预培养足细胞,观察是否可以阻断足细胞骨架重排、检测是否可以阻断小GTP酶的激活；(6)分别阻断整合素αvβ3的下游关键分子FAK和PI3K,观察是否可以阻断Angptl3引起的足细胞肌动蛋白骨架重排及小GTP酶激活,并应用Western Blot检测可能的下游分子的磷酸化水平变化,以明确可能的分子通路；(7)以WesternBlot检测Angptl3干预后小GTP酶的表达水平变化,明确Angptl3是否可以影响小GTP酶的表达。结果：(1)足细胞株WT-1及podocin表达均呈阳性,可用于实验；(2)Angptl3可使足细胞出现明显的肌动蛋白细胞骨架重排,主要表现为板状伪足和细胞棘的生成；(3)Angptl3可激活足细胞中的小GTP酶Racl和RhoA,其中Racl活化程度较强、持续时间长,RhoA仅存在一个瞬时、低水平的活化；(4)阻断Racl可阻断Angptl3引起的足细胞板状伪足的生成；(5)阻断整合素αvβ3可阻断Angptl3引起的足细胞肌动蛋白纤维重排及阻断小GTP酶激活；(6)阻断FAK或PI3K均可阻断Angptl3引起的足细胞板状伪足的生成及并阻断Racl的激活；Angptl3可使足细胞FAK、PI3K的磷酸化水平增高；阻断整合素αvβ3可阻断Angptl2引起的FAK、PI3K磷酸化；阻断FAK可阻断Angpt13引起的PI3K的磷酸化；(7)Angptl3可引起足细胞Rac1表达水平的增加,不影响RhoA及Cdc42表达。结论：(1)Angptl3可以引起足细胞肌动蛋白细胞骨架重排,主要作用为促进板状伪足生成；(2)Rac1和RhoA的激活,特别是Rac1激活,是Angptl3引起足细胞肌动蛋白细胞骨架重排的基础；(3)Angplt3引起足细胞板状伪足生成通过整合素αvβp3-FAK-PI3K-Rac1途径；(4)足细胞可增加Rac1的表达。第二部分血管生成素样蛋白3不同结构域对足细胞肌动蛋白纤维重排及足细胞失黏附损伤的影响研究目的：明确Angpt13不同结构域对足细胞肌动蛋白骨架重排的影响；探讨Angptl3对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside, PAN)引起的足细胞失黏附的影响,及各个结构域在其中的作用方法：(1)应用重组Aingptl3-CCD分子片段、Angptl3-FLD分子片段以及重组完整Angptl3分子干预培养足细胞,分别观察其对足细胞肌动蛋白纤维重排情况的影响；(2)应用重组Angpt13分子分别按浓度和时间梯度干预培养足细胞,之后给予PAN处理足细胞,应用Hexosaminidase Assay观察Angptl3对PAN引起的足细胞失黏附情况的影响；应用重组Angptl3-CCD分子片段、Angptl3-FLD分子片段预处理足细胞,继给予PAN处理,观察Angptl3各个结构域对PAN引起的足细胞失黏附情况的影响。结果：(1)仅Angptl3-FLD可引起足细胞肌动蛋白细胞骨架重排,且与Aingptl3完整分子处理时等效；(2)Angptl3预处理后,足细胞较对照组失黏附情况明显减轻；且失黏附的减轻程度随处理时间的延长及处理剂量的加大而明显；Angptl3-FLD分子片段干预的结果与完整Angptl3分子干预相类似,随干预时间的延长足细胞失黏附情况较前减轻；Angptl3-CCD分子片段干预时广足细胞表现出失黏附情况先加重后减轻的情况。结论：(1)FLD片段是Angptl3引起足细胞肌动蛋白骨架重排的关键结构域；CCD片段不参与Angptl3对足细胞肌动蛋白骨架重排的影响；(2)Angptl3可减轻PAN引起的足细胞失黏附损伤；FLD和CCD片段都参与了PAN对足细胞失黏附损伤的影响,两者作用效果有所不同,FLD片段起主导作用；CCD片段也可对足细胞产生影响,其受体和具体途径目前尚不明确。(本文来源于《复旦大学》期刊2013-04-07）
细胞骨架重排论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景和目的:慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)发病率和死亡率呈逐年上升趋势,疾病负担重,但其具体发病机制不清。研究发现,肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能下降是慢阻肺急性加重的重要原因之一,AM吞噬过程主要与细胞骨架重排有关;另有研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-Ras同源基因家族成员A(RhoA)信号通路参与调控细胞骨架重排,但PI3K-mTOR-RhoA信号通路调控细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力的研究鲜见报道,故本研究采用基因干扰(RNAi)技术沉默该通路的PI3K、mTOR蛋白,探讨PI3K-mTOR-RhoA信号通路调控细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力的关系及其具体机制。方法:培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,实验分为4组:空白组(不进行转染)、阴性对照组(用含随机序列的短发夹RNA,即shRNA转染细胞)、沉默PI3K基因组(PI3K-RNAi组)和沉默mTOR基因组(mTOR-RNAi组)。蛋白印迹法(Western blot)检测基因沉默效率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应检测PI3K、mTOR、RhoA的mRNA水平;Western blot检测PI3K、mTOR、RhoA和磷酸化RhoA(p-RhoA)蛋白的表达;激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架形态;流式细胞术检测细胞吞噬异硫氰酸酯荧光素标记大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,平均荧光强度(MFI)和吞噬阳性细胞百分比(吞噬%)代表吞噬能力的强弱。结果:1.基因沉默效率:PI3K和mTOR的基因沉默效率分别为(62±7)%、(61±8)%。2.各组PI3K、mTOR、RhoA的mRNA和蛋白及磷酸化RhoA(p-RhoA)蛋白表达:(1)PI3K-RNAi组PI3K、mTOR、RhoA的mRNA、蛋白表达和p-RhoA[(0.29±0.07、0.38±0.02)、(0.54±0.13、0.72±0.02)、(0.59±0.06、0.74±0.03)和0.68±0.02]均低于空白组[(1.00±0.00、1.00±0.04)、(1.00±0.00、1.00±0.04)、(1.00±0.00、1.00±0.04)和1.00±0.06]和阴性对照组[(0.98±0.05、1.00±0.04)、(1.01±0.11、1.01±0.08)、(0.99±1.03、1.00±0.04)和1.03±0.07](均Р<0.01);(2)mTOR-RNAi组mTOR的mRNA、蛋白表达(0.30±0.08、0.39±0.02)均较空白组、阴性对照组减低(均Р<0.01),RhoA的mRNA、蛋白和p-RhoA蛋白表达[(1.40±0.21、1.54±0.04)和1.33±0.01]较空白组和阴性对照组升高(均Р<0.01)。3.各组细胞骨架形态变化:PI3K-RNAi组细胞形态僵硬,丝状伪足伸出短小、杂乱,应力纤维数量减少;mTOR-RNAi组细胞变形更为明显,丝状伪足伸出更细长而密集,应力纤维数量明显增加;空白组和阴性对照组细胞变形较明显,丝状伪足伸出较长,应力纤维数量较多。4.各组细胞吞噬FITC-E.coli的能力:PI3K-RNAi组MFI及吞噬%[7435±705、(70.73±2.66)%]均较空白组[11733±935、(79.97±1.07)%]和阴性对照组[10983±954、(79.60±1.17)%]减低(均Р<0.01);mTOR-RNAi组MFI及吞噬%[18583±1090、(87.72±1.58)%]均较空白组和阴性对照组增加(均Р<0.01);空白组和阴性对照组MFI及吞噬%无差异(Р>0.01)。5.相关性分析:RNAi沉默前后,各组细胞PI3KmRNA、蛋白表达与mTORmRNA、蛋白表达呈正相关(均Р<0.05);PI3KmRNA、蛋白表达与RhoAmRNA、蛋白、p-RhoA蛋白表达呈正相关(均Р<0.05);mTORmRNA、蛋白表达与RhoAmRNA、蛋白、p-RhoA蛋白表达呈负相关(均Р<0.05);PI3K、RhoA的mRNA和蛋白表达和p-RhoA与MFI和吞噬%均呈正相关(均Р<0.05);mTOR mRNA和蛋白与MFI和吞噬%均呈负相关(均Р<0.05)。结论:1.慢病毒转染法可以成功沉默PI3K、mTOR基因;2.细胞骨架重排与巨噬细胞吞噬能力改变有关;3.PI3K-m TOR-RhoA信号通路调控细胞骨架重排;4.PI3K正性调控mTOR-RhoA通路,促进细胞骨架恰当重排,增强巨噬细胞吞噬能力;mTOR负性调控该通路,抑制细胞骨架恰当重排,减弱巨噬细胞吞噬能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞骨架重排论文参考文献
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