重庆市中药研究院重庆400065
摘要：目的：观察桔梗配伍对人乳腺癌高肺转移细胞株MDA231-LM2增殖及侵袭的干预作用。方法：采用MTT法及Transwell法观察桔梗配伍即养阴润肺组（桔梗配伍麦冬含药血清）、活血散结组（桔梗配伍莪术含药血清）对MDA231-LM2细胞增殖及侵袭作用的影响进行研究。结果：桔梗配伍对乳腺癌肺转移有不同程度抑制作用；与对照组比较，养阴润肺组、活血散结组IL-6、IL-8、CXCL1的mRNA及蛋白表达量明显升高，MMP1的mRNA及蛋白表达量明显降低（P＜0．05，P＜0．01）。结论：桔梗配伍能够很好的抑制人乳腺癌高肺转移细胞株MDA231-LM2增殖及侵袭。
关键词：中药桔梗；乳腺癌肺转移；桔梗配伍
1试验材料
1.1试验用药
生理盐水、桔梗、蛇床子、获术、麦冬由某中医药大学附属医院中药房提供。
1.2实验动物
BALB/c小鼠，雌性，SPE级，日龄35~40天，体重（20±2）g，由中国科学院某实验动物中心提供。
1.3试验用细胞株及细胞培养
小鼠乳腺癌高肺转移潜能细胞系4T1，由中国科学院某细胞库提供，在含10%胎牛血清，50kU/L青霉素培养基中于37℃，5%C02下培养。
1.4试验试剂
胎牛血清，由四季青公司提供；1640培养基、青霉素、链霉素均由Gibco公司提供。TGFβ1及Smad7购自ABCAM公司；Smad4购自cellsignal公司；PVDF膜为millipore公司产品，孔径为0.45μm；蛋白预染Marke：购自碧云天公司，显影粉、定影粉及X光胶片购自冠龙照相器材，含50mMTris-HCI的RIPA缓冲液（pH7.4），150mMNaCI，1%NP-40，0.5%脱氧胆酸钠、0.1%SDS、原钒酸钠、氟化钠、EDTA均购自某生工生物技术有限公司。
2试验方法及观察指标
2.1建立小鼠乳腺癌肺转移动物模型
将4T1细胞消化计数，使细胞悬于PBS中，调整细胞浓度至2X105/ml。在无菌条件下，将细胞悬液接种于小鼠右侧第二对乳头脂肪垫处，接种量为0.1ml/只。
2.2分组及给药
药物临床常用剂量为桔梗6g、麦冬9g、蛇床子9g，莪术12g。本试验将实验动物按照数字表随机分为5组，每组10只，按照人鼠等效剂量换算，给药剂量为：桔梗组3g/（kg·d）生药量，桔梗+麦冬组（3+4.5）g/（kg·d）生药量，桔梗+蛇床子（3+4.5）g/（kg·d）生药量，桔梗+莪术组（（3+6）g/（kg·d）生药量；模型组给予等体积生理盐水灌胃。各组小鼠于接种后第5天开始给药，共给药28天。2.3试验取材给药后15天开始每5天用游标卡尺体外测量小鼠原位瘤直径，给药28天后，称量小鼠体重后脱颈处死，摘除原位肿瘤并剔除筋膜；开胸取出小鼠肺脏，电子天平称量原位瘤及肺脏重量并记录。每组随机选取6个原位瘤及6个肺组织生理盐水清洗后切成小块，置于eppendorf管内，-80℃冰箱保存，WesternBlot检测备用。
2.4统计学分析
采用SPSS15.0forwindows软件进行统计分析。试验数据以`x±s表示，多组样本均数的比较采用单因素方差分析，方差齐者采用LSD-t检验，方差不齐者采用Games-Howell检验，检验水准α=0.O5。
3试验结果
3.1桔梗及桔梗配伍不同治则中药给药期间对小鼠原位瘤体积的影响
给药14天，同模型组比较，桔梗配伍麦冬组原位瘤体积明显较小，具有统计学差异（p<0.05）；桔梗及其他各配伍组原位瘤体积虽较小，但同模型组比较无统计学差异（P>0.O5）；给药19天，同模型组比较，桔梗及桔梗配伍不同治则中药组原位瘤体积较小，但无统计学差异（p>0.O5）；给药24天，同模型组比较，桔梗配伍获术组原位瘤体积较小，具有显著统计学差异（p<0.01），其他各组间无差异（p>0.O5）。
3.2桔梗及桔梗配伍不同治则中药对肺转移模型小鼠瘤重、瘤重抑制率的影响
同模型组比较，桔梗及桔梗配伍不同治则中药组肺转移模型动物原位瘤的瘤重明显减轻（p<0.O1）。与桔梗组比较，桔梗各配伍组瘤重无统计学差异。与桔梗配伍蛇床子组比较，桔梗配伍获术组瘤重较轻（P<0.05）。桔梗及桔梗配伍不同治则中药组的抑瘤率由高至低分别为桔梗配伍获术（63.59%）、桔梗配伍麦冬（53.25%）、桔梗（42.69%）、桔梗加蛇床子（38.68%），结果表明，桔梗配伍获术组对肺转移动物原位瘤瘤重的调控作用优于桔梗组及其他桔梗配伍组。
3.3桔梗及桔梗配伍不同治则中药对肺转移模型小鼠肺重、肺重指数的影响
同模型组比较，桔梗及桔梗配伍不同治则中药组对肺转移模型小鼠肺重及肺重指数的影响无统计学差异。与桔梗组比较，桔梗配伍不同治则中药组对肺转移模型小鼠肺重及肺重指数的影响无统计学差异，桔梗配伍不同治则中药组对肺转移模型小鼠肺重及肺重指数影响的组间比较无统计学差异。结果表明，桔梗及桔梗配伍不同治则中药组对肺转移小鼠模型的肺重、肺重指数的影响无差异。
3.4桔梗及桔梗配伍不同治则中药对小鼠肺转移模型原位瘤中TGFβ1，Smad4，Smad7蛋白表达的影响
根据实验结果显示，与模型组比较，桔梗组肺转移模型动物原位瘤中Smad7，TGFβ1蛋白表达有所降低，但无统计学差异；桔梗配伍不同治则中药组肺转移模型动物原位瘤中Smad7，TGFβ1蛋白表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，桔梗及桔梗配伍不同治则中药组肺转移模型动物原位瘤中Smad4的蛋白表达明显升高（P<0.01）。与桔梗组比较，桔梗配伍莪术组肺转移动物原位瘤中Smad4蛋白表达明显升高（P<0.01），TGF明显降低（P<0.05），桔梗配伍麦冬组Smad4明显升高（P<0.05）。与桔梗配伍蛇床子组比较，桔梗配伍获术组肺转移动物原位瘤中Smad4蛋白表达明显升高（P<0.05）。结果表明，桔梗配伍莪术组对肺转移动物原位瘤中Smad4，TGFβ1蛋白表达的调控作用优于其他配伍组。
参考文献：
[1]刘骏，邓菲，李柯静，彭腾.中药桔梗及其临床配伍的研究进展[J].中国药业，2014，08：84-86.
[2]吴兰红.桔梗的效用及其临床配伍应用[J].上海中医药杂志，2012，11：67-68.