晚期胃癌含铂化疗疗效相关circRNA芯片表达谱和生物信息学分析及相关功能研究

论文摘要

胃癌（gastric cancer,GC）是全球第四大常见的恶性肿瘤,也是恶性肿瘤患者死亡的第二大原因。尽管肿瘤的治疗方式不断地发展与改善,但是,晚期胃癌的预后仍然很差。目前,以铂类为主的联合化疗方案仍然是晚期胃癌的一线治疗选择,而化疗耐药问题往往是化疗失败的主要原因,所以,寻找能够预测胃癌患者铂类化疗疗效的分子标记物,可为胃癌的个体化治疗提供一定的理论依据。环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类特殊的非编码RNA,近年来逐渐成为研究的热点。国内外相关研究表明,circ RNA可参与调节肿瘤的发生、发展以及化疗耐药等。本课题研究拟在文献报道的基础上,旨在探索与胃癌铂类化疗耐药相关的circ RNA及其相关生物学功能和临床意义。本研究分为两个部分。第一部分晚期胃癌含铂化疗患者血浆差异表达环状RNA芯片表达谱和生物信息学分析目的利用circ RNA芯片测序技术筛选出能预测晚期胃癌患者含铂化疗疗效的血浆中差异表达的circ RNA分子,并进行生物信息学分析,为下一步探索circ RNA作为预测胃癌化疗疗效的生物标记物的研究奠定基础。方法1.收集初诊初治的晚期胃癌患者,予以含顺铂或者奥沙利铂的方案化疗至少2疗程,在初次化疗之前抽取患者外周血,离心分离出血浆后提取血浆总RNA,-80℃冰箱保存用于circ RNA芯片测序。根据RECIST1.1实体瘤疗效评定标准判断胃癌患者的化疗疗效,将其分为化疗敏感组和耐药组。2.利用circRNA芯片检测晚期胃癌患者含铂化疗敏感组和耐药组之间血浆中差异表达的circ RNA表达谱。利用mi Randa软件预测mi RNA可能结合的circ RNA,构建circ RNA-mi RNA共表达网络。然后通过Disease、GO（Gene Ontology）和pathway富集分析预测差异表达的circ RNA对应线性转录本的生物学功能及其所参与的信号通路。结果1.与化疗敏感组相比较,circ RNA芯片在化疗耐药组中共检测出181个差异表达的circ RNAs,包括173个上调,8个下调（变化倍数≥2）。2.通过mi Randa软件发现circ RNA可能通过mi RNA海绵参与化疗敏感性的调节,最后通过生物信息学分析发现失调circ RNA来源的m RNA可能参与化疗敏感性相关的信号通路,例如Hippo信号通路、焦点黏着斑、MAPK信号通路等等。结论筛选出与晚期胃癌含铂化疗疗效相关的差异表达的circ RNAs,并预测了其生物学功能,有助于阐明胃癌患者铂类化疗敏感或耐药的分子机制,并为临床晚期胃癌患者是否选择含铂化疗方案提供参考依据。第二部分环状RNA hascirc0010985对胃癌细胞药物敏感性和生物学功能的影响及临床意义目的研究环状RNA hsacirc0010985在胃癌细胞和组织中的表达,并探索hsacirc0010985对胃癌细胞顺铂耐药、增殖和凋亡的影响及其临床意义。方法实时荧光定量PCR（quantificational real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR）检测hsacirc0010985在胃癌细胞及组织中的表达情况,并分析hsacirc0010985在GC组织中的表达与临床病理特征的关系,通过受试者工作曲线（ROC曲线）探讨hsacirc0010985在GC中的诊断价值;利用小干扰RNA（si RNA）转染SGC7901/DDP和BGC823细胞,以敲低hsacirc0010985的表达,通过细胞计数方法（CCK-8）检测敲低hsacirc0010985后对GC细胞顺铂敏感性以及增殖的影响;流式细胞仪检测hsacirc0010985对GC细胞凋亡的影响。方法结果Hsacirc0010985在SGC7901/DDP中相较于SGC7901细胞高表达,在GC细胞中相较于胃正常粘膜细胞GES-1高表达,在GC组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织,差异均具有统计学意义（P<0.05）,与淋巴结转移之间差异有统计学意义（P<0.05）,而与患者性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原CA199（CA-199）、肿瘤位置之间差异无统计学意义（P>0.05）;通过受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析,ROC曲线下面积（AUC）为0.631（P<0.05）,特异度和灵敏度分别为0.814和0.419,提示其可能对GC的诊断具有一定的参考价值;敲低hsacirc0010985可一定程度上降低SGC7901/DDP的存活力,逆转顺铂耐药,并促使GC细胞增殖能力减弱,凋亡率增加。结论Hsacirc0010985可能促使胃癌顺铂耐药,促进GC细胞发生发展,并有望成为GC诊断的生物标志物及治疗靶标。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 晚期胃癌含铂化疗患者血浆差异表达环状circRNA的芯片表达谱和生物信息学分析
•   1 前言
•   2 材料与方法
•   3 结果
•   4 讨论
•   5 结论
•   6 参考文献
• circ₀010985 对胃癌细胞药物敏感性和生物学功能的影响及临床意义'>第二部分 环状RNA has_circ₀010985 对胃癌细胞药物敏感性和生物学功能的影响及临床意义
•   1 前言
•   2 实验材料
•   3 实验方法
•   4 结果
•   5 结论
•   6 结论
•   7 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
•   参考文献

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 高敏

导师: 顾康生

关键词: 胃癌,顺铂耐药,化疗疗效,环状,增殖和凋亡

来源: 安徽医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,肿瘤学

单位: 安徽医科大学

基金: 安徽省自然基金委员会给予的经费

分类号: R735.2;Q811.4

总页数: 70

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