血清4型禽腺病毒浙江株的分离鉴定及其全基因组序列分析

论文摘要

对2015年浙江省某鸡场疑似心包积液-肝炎综合征的患病鸡进行病原检测和分离鉴定,并对分离到的禽腺病毒全基因组进行遗传进化分析。采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增结合核酸测序分析确定其病原为血清4型禽腺病毒（FAdV4）;通过鸡胚接种和原代鸡胚肾（chicken embryo kidney, CEK）细胞多次传代培养,获得FAdV4细胞适应毒株ZJ2015。血凝实验显示:ZJ2015株不能凝集小鼠、大鼠、鸡和绵羊的红细胞,间接免疫荧光分析表明其半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose, TCID50)为2.0×106mL-1。以0.2 mL/枚剂量接种鸡胚,该毒株能100%致死鸡胚,且致死鸡胚胚体潮红、肝肿大、出血等。将FAdV4全基因组分11段分别进行PCR扩增和测序,获得跨越ZJ2015毒株的全基因组序列（GenBank登录号:MF521611.1）,对其全基因组、hexon和fiber-2基因的氨基酸进行遗传进化分析显示:ZJ2015毒株与近几年国内流行的FAdV4强毒株处于同一个分支上,同源性达到99.87%以上;与ON1、KR5、MX-SHP95等较早毒株相比,ZJ2015具有1 966 bp的大段缺失及Fiber-2蛋白上多个位点的突变。浙江毒株ZJ2015的分离可为进一步开展FAdV4的诊断防控技术和毒力变异机制的研究奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 病料采集与处理
•   1.3 病毒悬液的核酸提取和检测
•   1.4 病毒在鸡胚及鸡胚肾细胞中的传代培养
•   1.5 血凝实验
•   1.6 病毒半数组织培养感染剂量测定
•   1.7 鸡胚致病性实验及接毒鸡胚肝组织中Fiber-2蛋白的检测
•   1.8 病毒全基因组测序及序列分析
• 2 结果与分析
•   2.1 HHS发病鸡的病原鉴定
•   2.2 FAdV4的分离和细胞适应性分析
•   2.3 血凝实验结果
•   2.4 病毒滴度TCID50测定结果
•   2.5 FAdV4-ZJ2015的鸡胚致病性
•   2.6 FAdV4全基因组的分段扩增和序列测定
•   2.7 FAdV4全基因组遗传进化分析
•   2.8 基于Hexon和Fiber-2蛋白的遗传进化分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李夏,夏文君,毛鍶超,卢舒婷,莫开昆,廖敏,周继勇,郑肖娟

关键词: 血清型禽腺病毒,分离鉴定,全基因组测序,基因

来源: 浙江大学学报(农业与生命科学版) 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 浙江大学动物科学学院农业农村部动物病毒学重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2016YFD05000800),国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-40-K13)

分类号: S852.65

页码: 635-646

总页数: 12

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