解脂耶氏酵母表面展示β-淀粉酶与α-葡萄糖转苷酶及一步法由淀粉合成低聚异麦芽糖

论文摘要

低聚异麦芽糖（IMO）所具有的良好理化性质和生理功能,使得其在食品、医药、饲料、化妆品等领域得到广泛应用。但目前工业上采用多酶协同法由淀粉合成低聚异麦芽糖,步骤繁琐、成本较高。因此开发出更加经济简便的方法生产低聚异麦芽糖具有重要的应用价值。通过将β-淀粉酶（βa）和耐热α-葡萄糖转苷酶（GT）以不同的方式进行融合,并利用表面展示系统固定在食品安全微生物解脂耶氏酵母细胞表面,实现自我表达与固定。筛选得到高产菌株Yβa-GT29。大量培养获得细胞,转化液化的淀粉可实现一步法合成IMO,50℃转化20h即可得到纯度为75.3%的低聚异麦芽糖,方便了低聚异麦芽糖的生产。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与培养基
•   1.2 菌株的构建
•     1.2.1 构建包含β-淀粉酶基因 （β-amylase） 的酵母展示菌株
•     1.2.2 构建包含α-葡萄糖苷酶基因 （α-transglucosidase, GTase） 的酵母展示菌株
•     1.2.3 β-amylase与GTase融合基因质粒构建
•     1.2.4 大肠杆菌表达质粒的构建
•   1.3 菌株的纯化与表达
•     1.3.1 酵母菌株的纯化与鉴定
•     1.3.2 酵母菌株活性的表达
•     1.3.3 大肠杆菌菌株活性的表达
•     1.3.4 一步法由淀粉合成低聚异麦芽糖 （IMO）
•   1.4 产物的分析方法及酶活检测
• 2 结果与分析
•   2.1 融合基因质粒表达盒的构建与表达
•   2.2 Y.lipolytica工程菌合成IMO
•     2.2.1 含β-amylase与GTase单基因的酵母展示菌株Yβa和YGT的选择
•     2.2.2 含βa-GT和GT-βa融合基因的酵母展示菌株YGT-βa和Yβa-GT的选择与表达差异
•     2.2.3 不同转化子合成IMO的差异可能是由于外源基因插入染色体的位置不同而造成的
•   2.3 E.coli工程菌合成IMO
•     2.3.1 含β-amylase与GTase单基因的大肠杆菌菌株Eβa和EGT合成麦芽糖与IMO的性能
•     2.3.2 含βa-GT和GT-βa融合基因的E.coli菌株EGT-βa和Eβa-GT合成IMO的性能
•     2.3.3 不同的基因融合顺序对表达的酶活性的影响
•   2.4 一步法合成IMO

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘大文,程海荣,邓子新

关键词: 解脂耶氏酵母,酵母表面展示,低聚异麦芽糖,淀粉酶,耐热葡萄糖转苷酶

来源: 生物工程学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金(No.21661140002)资助~~

分类号: TQ926

DOI: 10.13345/j.cjb.180077

页码: 121-132

总页数: 12

文件大小: 2006K

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