人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白的原核表达及纯化

论文摘要

目的原核表达及纯化带GST标签的人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白E6AP,为研究泛素化修饰与多种疾病的机制关联提供实验基础。方法以人卵巢文库为模板,利用PCR技术扩增E6AP编码序列,将其插入pGEXKG-GST载体中。利用DH5α感受态细胞鉴定重组质粒并大量克隆。质粒转入大肠杆菌Rossate菌株,小量诱导表达。利用GST融合蛋白纯化磁珠提取并纯化GST-E6AP融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western印迹检测纯化效率。结果 PCR技术成功获取大小约为2559 bp的E6AP编码序列,与pGEX-KG-GST载体连接,双酶切鉴定及公司测序结果显示GST-E6AP载体构建成功。转入Rossate菌株后诱导质粒小量表达,获取并提纯带有GST标签的E6AP重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western印迹结果显示E6AP蛋白纯化成功。结论成功构建重组质粒并表达GSTE6AP蛋白,获取纯化E6AP蛋白,为进一步研究泛素化在疾病发生发展中的地位和作用奠定坚实基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 E6AP基因编码序列的扩增
•     1.2.2 GST-E6AP重组质粒的构建和鉴定
•     1.2.3 GST-E6AP的小量诱导表达及鉴定
•     1.2.4 GST-E6AP融合蛋白的纯化
• 2结果
•   2.1 E6AP基因编码序列克隆
•   2.2重组质粒GST-E6AP的构建和鉴定
•   2.3重组质粒GST-E6AP的小量诱导表达
•   2.4融合蛋白GST-E6AP的纯化
• 3讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曹博,张亚楠,孔祥芬,徐冬清,叶棋浓,丁丽华,卫勃

关键词: 人基因,人类乳头状瘤病毒相关蛋白,原核表达,纯化,泛素化

来源: 军事医学 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 解放军总医院第一医学中心普通外科,军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,陆军第81集团军医院

基金: 国家自然科学基金（81773135）,北京科学技术委员会生物医药与生命科学创新培育研究（Z171100000417023）

分类号: R373

页码: 352-356

总页数: 5

文件大小: 1451K

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