论文摘要
鸭疫里默氏菌是导致鸭浆膜炎的重要病原,感染发病后,其主要病理特征是纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎,给全球养鸭业造成重大经济损失。双组份系统能够辅助细菌应对多种刺激,如渗透压变化、抗生素、温度、氧气压力等,同时,参与调控毒力、抗生素耐药等生理过程。目前对鸭疫里默氏菌双组份调控相关基因研究有限。为此,本研究主要针对鸭疫里默氏菌的双组份调控基因G148-1936进行研究,结果如下:1.双组份调控系统的生物信息学分析利用双组份调控系统预测网站对NCBI已公布的31株鸭疫里默氏菌进行预测分析,发现双组份调控系统在鸭疫里默氏菌中广泛存在。对G148-1936基因编码的蛋白进行保守结构域分析,发现其含有OmpR保守结构域,属于YesN超家族,是一个具有信号受体结构域的DNA结合应答调控因子。2.G148-1936基因缺失株及回补株的构建通过同源重组将目的基因成功替换,获得缺失株RA-CH-2ΔG148-1936。利用大肠杆菌-鸭疫里默氏菌穿梭质粒pLMF02构建重组质粒,导入E.coli DH5α中,鉴定后抽提重组质粒,导入G148-1936基因缺失株,成功构建回补株RA-CH-2CΔG148-1936。3.G148-1936基因的功能研究在生长曲线测定、生化反应、血清杀菌试验、沉降曲线测定、半数致死量测定、组织学变化观察一系列表型相关试验中,发现缺失鸭疫里默氏菌G148-1936基因未对菌株表型造成明显变化。干燥耐受试验中,亲本株,缺失株,回补株存活率均不高（分别为52.15%、23.76%、44.97%）,缺失株存活率比亲本株更低;最小抑菌浓度试验发现缺失株对β-内酰胺酶类抗生素敏感性增强。4.G148-1936基因缺失株转录组测序分析对缺失株进行转录组测序,差异表达基因分析,缺失株中显著性差异表达基因总数429个,其中上调基因177个,下调基因252个,即超过RA-CH-2菌株总基因数的1/5的基因都显著性差异表达。GO富集分析显示差异表达基因在生物过程、分子功能、细胞组份三个大类中均有不同程度的富集;KEGG通路富集显示在56个通路上均有差异基因富集,富集分析表明G148-1936基因对鸭疫里默氏菌的基因转录具有调控作用。结合干燥耐受试验和抗生素敏感性试验分析转录组测序结果,表明基因G148-1936可通过控制细菌膜组成成分的改变,及其应答刺激和抗氧化活性的能力来应对干燥环境,同时,参与β-内酰胺酶类抗生素耐药的调控。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 万建邦
导师: 朱德康
关键词: 鸭疫里默氏菌,双组份调控系统,转录组分析,差异分析
来源: 四川农业大学
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 四川农业大学
分类号: S852.61
DOI: 10.27345/d.cnki.gsnyu.2019.000765
总页数: 78
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