Thermotoga sp.RQ7内切纤维素酶TsCel12A蛋白的酶学性质和晶体学研究

论文摘要

纤维素作为丰富的可再生资源,可以通过水解制取乙醇、低聚糖等多类产品,在能源与食品等领域有广泛应用,生物酶法降解因为高效环保而成为纤维素的工业应用的主要途径.内切纤维素酶可以通过水解β-1,4糖苷键将纤维素转变为短片段多糖,是起始纤维素水解的关键酶,稳定高效的内切纤维素酶是纤维素生物酶解的关键.本文成功表达、纯化了来源于嗜热菌Thermotogasp.RQ7的内切纤维素酶TsCel12A,酶学性质实验结果显示其最适反应温度为95℃、最适反应pH为9.0,Km为（0.360 2±0.034 3）mmol/L,Kcat为（4.58±0.121 1）s-1,且于5mol/L NaCl盐溶液中不失活,说明该酶具备在高温、高盐及碱性环境下工业应用的潜力.通过结晶和优化筛选到高质量晶体,X-衍射数据分析获得了分辨率为2.36,所属空间群P 6 2 2,晶胞参数为a=184.974,b=184.974,c=49.873,α=90°,β=90°,γ=120°的晶体数据,为此酶三维结构的测定及其催化机制的阐明和酶性质的改造提供了结构基础.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 TsCel12A重组表达载体的构建
•   1.3 TsCel12A的表达与纯化
•   1.4 TsCel12A酶学性质的测定
•   1.5 TsCel12A的结晶和X-衍射数据收集
• 2 结果与讨论
•   2.1 TsCel12A融合蛋白的纯化
•   2.2 TsCel12A酶学性质的研究
•   2.3 TsCel12A结晶条件的筛选和优化
•   2.4 TsCel12A晶体衍射数据的收集

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李媛,张丽,陈安琪,季朝能

关键词: 糖苷酶,内切纤维素酶,热稳定性,工业应用

来源: 复旦学报(自然科学版) 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 复旦大学生命科学学院

基金: 国家重点研发计划“蛋白质机器与生命过程调控”(2016YFA0500600)

分类号: Q55

DOI: 10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2019.04.011

页码: 489-496

总页数: 8

文件大小: 2951K

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