禽源弯曲菌和产气荚膜梭菌分离鉴定和耐药性研究

论文摘要

导致人与多种动物疾病的人兽共患病原菌种类繁多,不仅严重威胁动物及人类食品安全,还对公共卫生安全造成影响,弯曲菌属、梭菌属和弧菌属等都是与人类食源性疾病相关的主要种属。在自然界中,弯曲菌的宿主非常普遍,产气荚膜梭菌在自然环境、粪便及许多人和动物的肠道中的分布也较为广泛。这些病原菌可通过不同的方式和途径感染人类与动物,从而导致各种疾病的发生。细菌耐药也出现了多样性。就目前看来,我国因感染弯曲菌和产气荚膜梭菌而引起的人类和动物中毒的病例报道并不是很多,相关的流行病学资料统计的也并不详细。为了比较分析我国不同地区的家禽和野生动物感染的流行情况,获得耐药本底数据,阐明耐药菌的传播机制,本研究采集来自吉林、辽宁、江西、青海、广东、广西、内蒙等地1244份家禽粪便样品,549份健康候鸟粪便样品,9只死亡动物的各心、肝、脾、肺、肾、肠共54份样品,通过选择性培养基培养、PCR方法来鉴定弯曲菌和产气荚膜梭菌,使用多重PCR的方法对产气荚膜梭菌进行毒素分型,并进行生物被膜的测定,通过药敏片与试纸条确定产气荚膜梭菌的耐药值,为临床应用提供基础数据。从我国吉林、辽宁、江西、青海、广东、广西共六个地区1244份家禽粪便样品,分离鉴定出20株弯曲菌,总分离率为1.6%（16/1244）,空肠弯曲菌16株,结肠弯曲菌4株。从吉林、黑龙江、江西等地区共123份家禽粪便样品,分离鉴定出24株产气荚膜梭菌,分离率为19.5（24/123）,从549份健康候鸟粪便样品中,分离鉴定出42株产气荚膜梭菌,分离率为7.7%（42/549）,从死亡动物54份样品中分离鉴定出16株产气荚膜梭菌分离率为29.63%（16/54）,产气荚膜梭菌的总分离率为11.29（82/726）。将分离鉴定出的产气荚膜梭菌进行生物被膜的测定,其中,30株产气荚膜梭菌经测定能够形成生物被膜,在本研究中发现,生物被膜的形成与细菌对抗生素的敏感性呈现了一定的相关性。通过多重PCR方法鉴定分离菌株的毒素型,根据PCR鉴定的结果:从广西南宁夜鹭中,分离出1株E型产气荚膜梭菌,从广西北海鸻鹬类中,分离出2株E型产气荚膜梭菌,从吉林松花江死亡鸟类病料组织中,分离出2株E型产气荚膜梭菌,所分离的其它菌株均为A型产气荚膜梭菌,所有菌株均未检出β2毒素、肠毒素和NetB毒素基因。通过药敏实验,利用E-test药敏检测试纸条,测定抗生素的最小抑菌浓度（MIC值）根据CLSI对厌氧梭菌类细菌的耐药性判定标准,对敏感率和耐药率进行统计分析,分离菌株对黏菌素、克林霉素和红霉素的耐药率在40%以上,所有产气荚膜梭菌菌株均对复方新诺明和莫西沙星敏感,多重耐药株（R≥3类药物）占比例为50%（22/44）。共有6株菌对超过5种以上的抗生素具有耐药性。迁徙候鸟携带产气荚膜梭菌的比例较低,但是对部分抗生素的高耐药性值得关注。本研究通过采集不同地区的禽源样品,对弯曲菌进行分离鉴定,对产气荚膜梭菌进行分离鉴定,并进行毒力基因检测、分型、生物被膜形成能力鉴定及耐药性测定,探讨迁徙鸟类携带该病原菌通过环境和食物链传播疾病的风险,了解耐药菌在其中的的流行情况,为细菌耐药性防控奠定基础,也为食品安全监测提供参考数据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
•   1.1 弯曲菌的生物学背景
•     1.1.1 弯曲菌
•     1.1.2 弯曲菌病
•   1.2 产气荚膜梭菌的生物学背景
•     1.2.1 产气荚膜梭菌
•     1.2.2 产气荚膜梭菌研究现状
•   1.3 细菌耐药生物化学机制
•     1.3.1 细菌产生灭活酶
•     1.3.2 细菌药物靶位点改变
•     1.3.3 细菌细胞膜通透性改变
•     1.3.4 药物主动流出系统系统
•     1.3.5 细菌生物被膜的形成
•   1.4 禽源产气荚膜梭菌的耐药性研究进展
•   1.5 研究内容
•   1.6 研究目的与意义
• 2 材料与方法
•   2.1 材料
•     2.1.1 实验菌株
•     2.1.2 试剂耗材
•     2.1.3 仪器设备
•     2.1.4 生物学信息分析软件
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 样品物种聚类分析
•     2.2.2 弯曲菌的培养优化
•     2.2.3 弯曲菌属分离鉴定
•     2.2.4 弯曲菌种的鉴定
•     2.2.5 产气荚膜梭菌的分离鉴定
•     2.2.6 产气荚膜梭菌多重PCR鉴定毒素型
•     2.2.7 产气荚膜梭菌生物被膜形成测定
•     2.2.8 产气荚膜梭菌的耐药性分析
• 3 结果与分析
•   3.1 样品物种聚类分析结果
•   3.2 弯曲菌的分离鉴定结果
•     3.2.1 弯曲菌的培养优化结果
•     3.2.2 弯曲菌的培养分离结果
•     3.2.3 弯曲菌属的鉴定结果
•     3.2.4 弯曲菌种的鉴定结果
•   3.3 产气荚膜梭菌的鉴定结果
•     3.3.1 产气荚膜梭菌的分离培养
•     3.3.2 产气荚膜梭菌的鉴定结果
•     3.3.3 产气荚膜梭菌的细菌毒素分型和主要毒力基因鉴定结果
•   3.4 产气荚膜梭菌生物被膜测定结果
•   3.5 药物敏感性实验结果
• 4 讨论
•   4.1 弯曲菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定
•   4.2 产气荚膜梭菌的主要毒力基因鉴定
•   4.3 产气荚膜梭菌的耐药性分析
• 5 结论
•   5.1 弯曲菌的分离鉴定
•   5.2 产期荚膜梭菌的分离鉴定
•   5.3 产气荚膜梭菌生物被膜的测定
•   5.4 产气荚膜梭菌耐药分析
• 参考文献
• 作者简介
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 司南

导师: 陈萍,郭学军

关键词: 弯曲菌,产气荚膜梭菌,毒素分型,耐药性

来源: 吉林农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技,医药卫生科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学,预防医学与卫生学

单位: 吉林农业大学

分类号: S852.61;R155

DOI: 10.27163/d.cnki.gjlnu.2019.000531

总页数: 57

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