应用双分子荧光互补技术分析米曲霉Fus3与Ste12之间的蛋白互作

论文摘要

【背景】双分子荧光互补(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)在水稻恶苗病菌(Fusarium fujikuroi)等微生物蛋白互作中的应用已有报道,但在工业菌株米曲霉(Aspergillus oryzae)中还未见应用。【目的】探究米曲霉中Fus3和Ste12蛋白在生长发育中可能存在的相互作用关系,建立在米曲霉活细胞中检测蛋白互作的方法,即BiFC体系。该系统可用于特异性、可视化米曲霉目标蛋白在活细胞中的定位,并且可以更加直观地探究蛋白之间是否存在相互作用。【方法】利用MultisiteGateway复杂载体构建技术,使用切开的绿色荧光蛋白,将荧光蛋白分子的两个片段N端和C端分别与米曲霉Fus3和Ste12蛋白融合,对获得的转化株进行荧光观察。通过BiFC系统检测蛋白之间的相互作用。【结果】成功转化的米曲霉菌丝中观察到荧光,Fus3和Ste12在米曲霉中存在相互作用。【结论】通过BiFC技术证实蛋白质Fus3和Ste12在无性繁殖菌株米曲霉体内发生互作,暗示它们通过互作可能参与除了有性生殖之外的其他细胞功能,并为米曲霉蛋白互作功能研究提供一种新的检测技术和方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 引物、质粒和菌株
•     1.1.2 主要试剂和仪器
•     1.1.3 主要培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 米曲霉RNA的提取与c DNA的合成
•     1.2.2 实时荧光定量PCR实验
•     1.2.3 质粒构建
•     1.2.4 重组米曲霉菌株的构建和培养
• 2 结果与分析
•   2.1 识别米曲霉中Fus3和Ste12的同源基因
•   2.2 米曲霉中fus3和ste12基因的表达水平
•   2.3 双分子荧光互补表达质粒的构建及验证
•   2.4 Fus3和Ste12蛋白相互作用的BiFC分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 庄淼,张智敏,王宝腾,金锋杰

关键词: 米曲霉,双分子荧光互补,蛋白质相互作用

来源: 微生物学通报 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 南京林业大学江苏省南方现代林业协同创新中心

基金: 国家自然科学基金(31570107)~~

分类号: Q936

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180951

页码: 269-277

总页数: 9

文件大小: 1452K

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