鸡传染性贫血病毒VP3基因的原核表达及抗血清制备

论文摘要

为了研究鸡传染性贫血病毒（Chicken anemia virus,CIAV）VP3蛋白与病毒自身蛋白之间的相互作用,需对该蛋白进行原核表达制备相应兔源抗血清,试验通过提取CIAV M9905株基因组DNA,PCR扩增出VP3基因,构建重组质粒pET30a（+）-VP3,然后转化入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,进一步通过IPTG诱导表达后用Ni-NTA亲和柱纯化获得融合蛋白,经SDS-PAGE分析后对融合蛋白进行乳化,免疫新西兰兔制备抗血清,并对其进行ELISA效价测定、Western-blot及IFA检测。结果表明:SDS-PAGE分析证实获得高纯度的重组蛋白VP3,大小约为22 ku,且其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在;ELISA法检测制备的兔源抗VP3血清效价在1∶6 400以上;经Western-blot及IFA检测证实,VP3兔源血清可特异性结合Vero细胞表达的VP3蛋白。说明试验成功表达出CIAV VP3蛋白,制备的兔抗血清具有较好的特异性。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 试验动物
•   1.2 毒株、质粒及细胞
•   1.3 工具酶和主要试剂
• 2 方法
•   2.1 引物的设计与合成
•   2.2 DNA提取与PCR扩增
•   2.3 重组质粒pET30a （+） -VP3的构建及酶切鉴定
•   2.4 重组蛋白VP3诱导表达及SDS-PAGE鉴定
•   2.5 重组蛋白VP3的纯化与复性
•   2.6 兔源抗VP3血清的制备
•   2.7 兔源抗VP3血清效价的ELISA测定
•   2.8 兔源抗VP3血清的Western-blot检测
•   2.9 兔源抗VP3血清的IFA检测
• 3 结果与分析
•   3.1 VP3基因的PCR扩增及酶切鉴定
•   3.2 重组蛋白VP3诱导表达及纯化
•   3.3 兔源抗VP3血清效价的ELISA测定
•   3.4 兔源抗VP3血清的Western -blot检测
•   3.5 兔源抗VP3血清的IFA检测
• 4 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙芬芬,高玉龙,潘伟,王笑梅

关键词: 鸡传染性贫血病毒,蛋白,蛋白相互作用,原核表达,纯化,抗血清

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年13期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 徐州医科大学形态学实验教学中心,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队,徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室

基金: 国家肉鸡产业技术体系项目(CARS-42-G07)

分类号: S852.65

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.07.0123

页码: 7-10+172

总页数: 5

文件大小: 323K

下载量: 103