5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立

论文摘要

为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型（canine adenovirus type 1,CAV-1）、犬腺病毒2型（canine adenovirus type 2,CAV-2）、犬冠状病毒（canine coronavirus,CCV）、犬瘟热病毒（canine distemper virus,CDV）、犬细小病毒（canine parvovirus,CPV） 5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2～3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10～100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 主要毒株和样品
•     1.1.2 主要试剂和仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 病毒基因组提取
•     1.2.2 引物、探针的设计与合成
•     1.2.3 质粒准备
•     1.2.4 PCR扩增
•     1.2.5 CDV、CPV质粒的构建
•     1.2.6 芯片制备
•     1.2.7 杂交
•     1.2.8 基因芯片的洗涤及结果扫描分析
•     1.2.9 特异性试验
•     1.2.10 灵敏性试验
•     1.2.11 临床样品检测
• 2 结 果
•   2.1 CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV PCR扩增结果
•   2.2 CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV PCR基因芯片检测结果
•   2.3 芯片灵敏性试验检测结果
•   2.4 芯片临床样品检测结果
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 苏霞,周宏专,常彦嫣,齐颀,林路路,张进,徐福洲,杨兵

关键词: 犬腹泻病毒,基因芯片,诊断

来源: 中国畜牧兽医 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室

基金: 中华人民共和国科学技术部-国家重点研发计划项目子课题(2016YFD0501001-12),北京市农林科学院畜牧兽医研究所项目(XMS201907,XMS201910),北京市农林科学院青年科研基金(QNJJ201731)

分类号: S852.65

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.08.003

页码: 2211-2219

总页数: 9

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