绿色木霉耐高温葡萄糖氧化酶的特性分析

论文摘要

从绿色木霉（Trichoderma viride）WX24菌株发酵中分离、纯化葡萄糖氧化酶（T. viride glucose oxidase,TvGOD）,研究其酶学特性,为葡萄糖氧化酶的应用提供理论基础。将绿色木霉胞外产酶发酵液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析纯化,并研究酶学性质。由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测得TvGOD表观分子质量93 kDa,达到电泳纯。经纯化,TvGOD比活力为426.67 U/mg,纯化倍数为14.36,活力回收率19.15%。TvGOD最适pH 6.0,最适反应温度60℃。70℃以下、pH 4～7之间,TvGOD稳定性好。所测金属离子中,Na+和K+对酶活力无影响,Fe2+、Cu2+和Zn2+有轻微抑制作用,Mg2+和Ca2+对TvGOD有显著激活作用,而重金属离子Hg2+和Pb2+几乎完全抑制酶活力;丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟和金属螯合剂乙二胺四乙酸二钠对TvGOD抑制作用较为强烈;TvGOD对表面活性剂十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、Triton X-100和吐温80表现出强稳定性。以葡萄糖为底物,酶Km和Vmax分别为11.62μmol/L和8.244 mmol/（L·min）。基于TvGOD在高温、酸性下的高活性与高稳定性以及对表面活性剂的高耐受性、对底物葡萄糖高亲和性等优良特性,TvGOD很有希望在面粉加工、食品饮料、饲料及生物传感器领域以及需要在高温、高酸环境下使用的生物技术工业中应用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 TvGOD的发酵制备
•     1.3.2 酶的分离纯化
•     1.3.3 酶活力检测
•     1.3.4 蛋白含量测定
•     1.3.5 表观分子质量测定
•     1.3.6 酶学性质分析
•       1.3.6. 1 最适反应温度及热稳定性
•       1.3.6. 2 酶的最适反应pH值及pH值稳定性
•       1.3.6. 3 金属离子及抑制剂对酶活力的影响
•     1.3.7 酶的动力学分析
•   1.4 数据统计与分析
• 2结果与分析
•   2.1 TvGOD的分离纯化
•   2.2 TvGOD纯度和分子质量测定
•   2.3 TvGOD酶学性质分析
•     2.3.1 TvGOD最适作用温度及热稳定性
•     2.3.2 pH值对酶活力和酶稳定性的影响
•     2.3.3 金属离子及抑制剂对TvGOD活力的影响
•     2.3.4 TvGOD动力学分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高兆建,王先凤,尚业成,许祥,李宝林,张抗震,焦魏

关键词: 葡萄糖氧化酶,绿色木霉,纯化,性质

来源: 食品科学 2019年14期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 徐州工程学院食品(生物)工程学院,江苏智荟生物科技有限公司,江苏太合食品有限公司,邳州市金大地肥料有限公司

基金: 江苏省重点研发计划项目(BE2016316),江苏省苏北科技计划项目(BC2013417,BN2015021),徐州市科技计划项目(XF13C027),2014年度国家星火计划项目(2014GA690014)

分类号: TQ925

页码: 153-159

总页数: 7

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