拟南芥MDH2基因GFP载体构建及转基因植株的筛选鉴定

论文摘要

[目的]以野生型拟南芥为材料构建MDH2基因GFP载体及GFP转基因植株,研究MDH2基因在植物响应镉胁迫机制中的功能。[方法]通过提取野生型拟南芥的RNA,反转录成为cDNA,并以cDNA为模板,利用PCR扩增MDH2基因,将扩增所获得MDH2基因和pXB94-GFP质粒双酶切后连接,并转化进大肠杆菌感受态细胞中,鉴定正确后再转入农杆菌感受态细胞中,通过菌落PCR鉴定出阳性单菌落。再通过浸花法转入野生型拟南芥中,最后利用抗性筛选和PCR鉴定获得MDH2转基因阳性植株。[结果]成功克隆MDH2基因,并构建了MDH2-GFP重组质粒,抗性筛选获得了MDH2-GFP转基因植株。[结论]成功获得MDH2-GFP转基因植株,为进一步研究该基因在植物响应镉胁迫机制中的功能奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 材料。
•     1.1.2 主要试剂。
•   1.2 方法
•     1.2.1 拟南芥无菌苗培养。
•     1.2.2 拟南芥总RNA的提取。
•     1.2.3 拟南芥cDNA的反转录。
•     1.2.4 MDH2基因的克隆。
•     1.2.5 大肠杆菌的转化。
•     1.2.6 农杆菌的转化。
•     1.2.7 花序浸染法获取转基因拟南芥。
•     1.2.8 转基因阳性植株鉴定。
• 2 结果与分析
•   2.1 拟南芥MDH2基因的克隆
•   2.2 过表达载体的连接和转化
•   2.3 农杆菌转化及花序浸染
•   2.4 MDH2-GFP转基因植株的抗性筛选
•   2.5 MDH2-GFP转基因阳性植株的验证
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王媛媛,韩洋洋,耿庆鎏,朱香豫,曹树青,樊婷婷

关键词: 拟南芥,载体,转基因植株

来源: 安徽农业科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 合肥工业大学食品与生物工程学院

基金: 中央高校基本科研业务费专项资金资助(JZ2018HGTB0248)

分类号: Q943.2

页码: 96-98

总页数: 3

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