导读:本文包含了定向克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,抗体,环氧化物,子囊,宏基,糖苷酶,天冬。
定向克隆论文文献综述
王瑞[1]（2018）在《菜豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及定向改造》一文中研究指出手性环氧化物和邻二醇是合成手性化合物的重要中间体,在功能材料、医药和农药等的合成中有着重要的应用价值。环氧化物水解酶(epoxide hydrolases,EHs)能催化外消旋环氧化物的选择性开环生成相应的手性邻二醇或选择性保留手性环氧化物。区域选择性高且互补的单一EH催化外消旋环氧化物对映归一性水解是制备手性邻二醇的理想途径,但目前仅有少数EHs具有此特性。本论文从菜豆(Phaseolus vulgaris)基因组中扩增了一种编码PvEH3的基因pveh3,并将其在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中成功实现异源表达;采用定点和迭代突变技术对PvEH3进行分子改造,以获得高活力和高区域选择性的PvEH3突变体;通过构建双相催化体系解除底物对最优突变体PvEH3~(G170E/F187L/P237L)的抑制作用。以菜豆总RNA为模板,采用逆转录PCR和巢式PCR技术扩增了一条新型环氧化物水解酶的编码基因pveh3,其长度为957 bp,编码318个氨基酸。一级和叁维结构分析表明PvEH3属于α/β水解酶超家族,其催化叁联体为D101-H297-D262,两个保守质子供体为Y150和Y232。SDS-PAGE结果显示PvEH3的表观分子量为36.1 kDa,催化特性研究表明PvEH3能催化对氯环氧苯乙烷(pCSO)的对映归一性水解,产物(R)-对氯苯乙二醇(pCPED)的对映体过量值(ee_p)为85.1%。PvEH3对(S)-和(R)-pCSO的区域选择性系数α_S和β_R分别为87.0%和98.0%。通过镍离子亲和层析柱对目的蛋白进行纯化,PvEH3的比活力为1.36 U·mg~(-1),针对pCSO的动力学参数K_m和k_(cat)/K_m分别为6.60mM和0.583 mM~(-1)·s~(-1)。基于PvEH3与(R)-pCSO的分子对接模拟分析和与植物EHs的氨基酸序列比对结果对PvEH3的7个非保守氨基酸位点进行定点突变。其中突变体PvEH3~(G170E)全细胞比活力最高为12.86 U·g~(-1) wcw,是PvEH3的3.7倍;PvEH3~(F187L)和PvEH3~(P237L)对映归一性最好,ee_p分别从PvEH3的85.1%提高至90.0%和91.2%。随后经组合点突变和迭代饱和突变获得最优突变体PvEH3~(G170E/F187L/P237L),其全细胞比活力从3.45提高至20.31 U·g~(-1)wcw,区域选择性系数α_S和β_R分别为95.0%和98.0%。纯化后PvEH3~(G170E/F187L/P237L)催化pCSO的K_m和k_(cat)/K_m分别为4.86 mM和1.81 mM~(-1)·s~(-1)。在环己烷的体积比为5%、全细胞催化剂与底物的重量比为12:1(w/w)的双相催化体系中,PvEH3~(G170E/F187L/P237L)全细胞催化200 mM pCSO对映归一性水解5.5 h后,产物(R)-pCPED的ee_p和产率分别为96.1%和98.0%,时空产率STY为6.16 g·L~(-1)·h~(-1)。底物谱分析表明,PvEH3能催化环氧苯乙烷(SO)及其4种衍生物的水解,取代基的类型和位置均影响其活力和对映归一性,PvEH3~(G170E/F187L/P237L)对5种底物的催化活力较PvEH3均有提高,是PvEH3的2.1~5.9倍。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
张孙燕[2]（2016）在《巨大芽孢杆菌L-天冬酰胺酶基因的克隆表达及定向进化》一文中研究指出L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase,EC3.5.1.1)能专一催化水解L-天冬酰胺脱氨基生成L-天冬氨酸和氨。L-天冬酰胺酶不仅广泛应用于急性淋巴细胞白血病(ALL)、恶性淋巴瘤(ML)、霍奇金淋巴瘤(HL)等疾病的治疗,而且用于控制高温油炸、烘焙食品中丙烯酰胺的形成而不影响产品的外观、味道。目前L-天冬酰胺酶普遍存在稳定性差、酶活低、pH适用范围窄等问题,限制了其在食品加工中的应用。因此,寻找和发现新型的L-天冬酰胺酶具有深远理论意义和潜在的应用价值。本文针对以上问题,从土壤中筛选分离到一株高效产L-天冬酰胺酶菌株H-1,对其进行了形态特征、生理生化特征和分子生物学鉴定,并对其编码L-天冬酰胺酶基因ansA、ansZ进行了克隆和异源表达,以及对表达产物提纯和重组酶的酶学性质作了初步探讨。同时,对L-天冬酰胺酶的定向进化及其在油炸薯条中的应用进行了研究。主要研究结果分述如下。1.L-天冬酰胺酶产生菌的筛选与鉴定。采用酚红/BTB初筛平板筛选到100余株L-天冬酰胺酶产生菌,并通过摇瓶复筛,从江苏省某天冬酰胺生产企业排放污水口土壤中筛选一株具有较高酶活的菌株H-1,酶活达0.086±0.0023 IU/mL。对菌株H-1进行菌落形态观察、生理生化鉴定及分子生物学鉴定,确定菌株H-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。2.B.megaterium L-天冬酰胺酶的克隆与表达。根据Genbank中B.megaterium WSH-002的全基因组序列成功克隆出B.megateriumH-1 L-天冬酰胺酶基因ansA(1050 bp)、ansZ(1113 bp)序列,分别编码349与370个氨基酸蛋白。酶基因分别与表达载体pET-30a,pET-32a连接,成功构建了四个重组表达载体,实现L-天冬酰胺酶基因ansA、ansZ在Escherichia coli中异源表达,其中催化活力最高的pET-30a-BM-ansZ重组菌,经表达条件优化后酶活达4.26±0.22IU/mL,较野生菌的酶活提高约50倍,将该重组酶命名为BmAase。3.BmAase的分离纯化及其酶学性质研究。表达产物通过Ni亲和柱进行一步纯化,BmAase比活达到146.48 IU/mg(谷氨酰胺活性可忽略不计);SDS-PAGE分析与MALDI-TOF-MS检测出其分子量为39.628 kDa。BmAase的最适催化反应条件为40。℃,pH7.0;BmAase具有一个相对较宽的pH活性范围pH5.0-8.0,热稳定性好,60℃/70℃处理12 h仍分别保留70%/55%以上相对活力;BmAase动力学参数米氏常数Km为0.8 mM,最大反应速度Vmax为1.58IU/μg。4.B.megaterium L-天冬酰胺酶的定向进化。摸索易错PCR反应体系,按Mg2+、Mn2+浓度分别为2mM、0.06mM进行易错PCR反应。利用建立的基于96微孔板高通量筛选模型,经过2轮易错PCR,从8000多个突变株中筛选出酶活最高的突变株2MH6,其比活力为188.69 IU/mg,较BmAase提高约30%。以易错PCR筛选得到的突变体作为亲本进行DNA Shuffling,从5000多个突变株中筛选到突变株S-CA3,其比活力达到249.01 IU/mg,较BmAase提高70%,且该酶在pH5.0-9.0保持活力稳定,拓宽了碱性pH反应范围。5.L-天冬酰胺酶在油炸薯条中的应用。油炸前用L-天冬酰胺酶处理土豆条,通过HPLC-MS检测油炸薯条中丙烯酰胺含量发现,经L-天冬酰胺酶处理后油炸薯条中丙烯酰胺含量降低至7.6%(0.056 ± 0.0056 mg/kg),而未处理油炸薯条中丙烯酰胺含量高达0.738 ± 0.0163 mg/kg,说明B.megateriumL-天冬酰胺酶能有效控制薯条加工过程中丙烯酰胺的形成。(本文来源于《南京农业大学》期刊2016-06-01）
沙冲,邵蔚蓝,左万兵[3]（2015）在《酶基因克隆表达和定向进化技术的最新发展》一文中研究指出虽然酶工程技术已经得到高度的发展,酶的活性、稳定性和生产成本问题依然是工业酶的发展和推广应用的瓶颈。基因重组技术能够大幅度提高酶的生产效率,但是国际通用型基因工程技术尚不能满足人们对工业酶的低成本需求。没有进一步的技术创新,目前已经难以(本文来源于《2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会论文摘要集》期刊2015-08-21）
刘震,陈倩,陈荫楠,王祖鑫,朱秋享[4]（2015）在《枯草芽孢杆菌β-糖苷酶的克隆表达、体外定向进化及结构模拟》一文中研究指出【目的】从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出bgl C基因并在大肠杆菌中表达,分析表达产物的酶学性质并进行结构模拟,为进一步研究其生理功能及结构解析奠定基础。【方法】将bgl C基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,通过定向进化获取水解效率提高的突变株,经Ni-NTA镍离子层析柱纯化后,测定野生枯草芽孢杆菌β-糖苷酶与突变酶的性质。利用CD光谱,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及叁维结构建模,分析野生酶与突变酶的高级结构。【结果】野生酶的比活力为9.7 U/mg,最适催化温度为60℃,最适p H值是7.0。经过突变和筛选,我们得到一个突变体BS-GLY_M1(A242T/T385A/S425L),其比活力达到17.1 U/mg,最适温度为55℃,最适p H值是7.0,在55℃下的半衰期为3.5 h,比野生酶增加2 h。突变酶对4-硝基苯基-β-半乳糖苷、乳糖和熊果苷的催化效率(Km/Kcat)有所提高。酶在天然条件下以二聚体、四聚体状态存在,推测它以二聚体为基本功能单位。结构模拟结果表明突变后酶的叁维结构有轻微地变化,这可能是酶热稳定性和催化效率提高的原因。【结论】枯草芽孢杆菌β-糖苷酶可以在大肠杆菌中高效表达并可以通过定向进化提高其水解效率。(本文来源于《微生物学报》期刊2015年10期）
相微微,王建武[5]（2015）在《小麦HMW-GS基因的定向缺失亚克隆法解析》一文中研究指出针对小麦中HMW-GS基因克隆的方法——定向缺失亚克隆进行了详细的解析,对各个步骤应注意的事项进行了归纳总结,为小麦中HMW-GS基因的克隆提供参考意见。(本文来源于《农业与技术》期刊2015年07期）
孟妍[6]（2014）在《单克隆抗体：定向打击难治之症》一文中研究指出单克隆抗体（下称“单抗”）生物制品绝对可以被称为是药品市场的一座金矿。 单抗技术避免了抗体制备的特异性问题，可以制造出高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，也即精度更高的“制导导弹”，针对特定的疾病进行“定向打击”，因而被看作肿瘤、结核病等疾病的(本文来源于《第一财经日报》期刊2014-11-17）
李萌[7]（2014）在《嗜热真菌脂肪酶基因的克隆、表达及定向进化》一文中研究指出易错PCR方法,建立了含有9654个转化子的突变体库。通过叁丁酸甘油酯平板透明圈法、小量发酵和大量发酵法筛选突变体库。最终获得9个突变菌株,经发酵酶活测定发现酶活最高提高到原始菌株的1.24倍,没有达到预期的效果。同时利用易错PCR方法对疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶LN进行定向进化。采用易错PCR方法,建立了含有11736个转化子的突变体库。通过筛选,最终获得2株酶活力分别是野生菌酶活力3.4倍和2.2倍的突变体菌株：GS-LN4和GS-LNl1。对突变体菌株测序并与野生菌株基因比较发现,GS-LN4中有4个碱基发生改变,其中2个位点引起氨基酸变化,它们是A96V, Q132R; GS-LN11中基有7个碱基发生变化,其中引起7个氨基酸变化,分别是E16D, D50V, L98F, R130K, F147Y, N231D, T236S。对这两个工程菌株进行发酵,通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等步骤,得到了纯化的突变蛋白并测定酶活。通过酶学性质与野生菌进行比较,结果发现突变酶在最适反应温度、最适反应pH值和热稳定性等方面都有所改变。并通过同源建模,分析了突变脂肪酶酶活提高和热稳定性改变的可能机制。(本文来源于《山东农业大学》期刊2014-05-01）
欧阳凤菊[8]（2014）在《芽孢杆菌漆酶基因的克隆表达与分子定向进化》一文中研究指出漆酶(laccase),是一种典型的绿色催化剂,应用范围广泛。目前工业化的漆酶商品主要来源真菌发酵。但在高温、高盐或强碱性等极端环境中,真菌漆酶易失活,限制了其应用范围。相比之下,细菌漆酶具有耐高温、耐高碱性的优势,且发酵生产周期短,具有广阔的推广前景。为获得生产周期短,活性高的细菌漆酶,本文克隆了芽孢杆菌属的漆酶基因,并在大肠杆菌中进行了原核表达,利用分子定向进化手段获得表达量高、热稳定性较好、碱性环境耐受力较强的细菌漆酶突变株,并研究了突变漆酶的酶学特性和空间结构,在此基础上又进行了突变漆酶降解染料的研究,获得如下研究结果：(1)扩增解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens LS05)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis LS03)的漆酶基因。比对基因序列的同源性为74%,氨基酸序列同源性为77%。B. subtilis LS03cotA基因序列全长1542bp编码514个氨基酸残基,运用生物信息学方法推测其分子量58.5kDa。将B. subtilis LS03cotA漆酶基因与表达载体pETDuet-1连接构建重组表达质粒并转入表达宿主细胞,构建了野生型重组CotA漆酶,经低温微好氧环境诱导表达,重组CotA蛋白表现出漆酶的催化活性。表达产物存在于菌体破碎后的上清液中,经Ni-NTA亲和层析纯化后获得62kDa的目的蛋白,测得其比酶活为1.44U/mg。酶学性质研究表明,纯蛋白催化两种底物的最适反应pH为4.0(ABTS)和7.0(SGZ),在中性和碱性环境下酶活稳定性良好；最适反应温度60℃(SGZ)。低浓度Mg2+、Cu2+、Na+对野生型重组CotA漆酶活性有促进作用；10%浓度的有机溶剂可以维持漆酶活性60%以上；常规蛋白抑制剂能够抑制漆酶的活性；与底物丁香醛连氮(SGZ)具有较好的亲和性。(2)运用易错PCR向枯草芽孢杆菌属漆酶基因引入随机突变点作为下一轮Family Shuffling的多样性母本同源基因,通过Family Shuffling技术构建随机突变库,利用96孔板初筛和大量发酵复筛,最终获得叁个酶活性和热稳定均提高的突变漆酶：CotA-46、CotA-120和CotA-183。其中CotA-46纯酶的比酶活7.49U/mg,比野生型提高5倍；其最适反应温度为70℃比野生型提高10℃；同时表现出较好的热稳定性,较高的催化效率及较强的底物(SGZ)亲和力。同源建模获得的突变漆酶叁维结构表明叁个突变漆酶的相应氨基酸突变位点均位于酶分子表面或Loop区域,且大部分位于CotA蛋白的第叁结构域。(3)对B. subtilis LS03漆酶的结构域进行分子定向进化,通过易错PCR技术分别构建叁个结构域突变文库,以SGZ为底物的酶活为筛选指标,最终获得两株酶活提高的结构域突变漆酶(LS03-CotA-50和LS03-CotA-76)。同源建模分析发现由于突变氨基酸位点分别定位于第二和第叁结构域,且均远离催化中心,因而结构域突变漆酶的酶学特性变化不大,LS03-CotA-76的最适温度70℃,其热稳定性和催化效率也略有提高。(4)突变漆酶对四类化学结构类型不同的合成染料的脱色效率均高于野生漆酶,效果最为显着的是CotA-46。无介体参与时,该突变漆酶对9种合成染料的脱色率介于34-89%,随着脱色体系中介体的加入使各染料脱色率迅速提高2-3倍。当脱色蒽醌染料茜素红时,无介体参与CotA-46突变漆酶的脱色率为34.6%与介体乙酰丁香酮(ACE)参与野生型重组CotA漆酶的脱色率基本相同。对于模拟染料废水的脱色,CotA-46突变漆酶在酸性环境中最高脱色率可达40%；中性环境和碱性条件下介体漆酶脱色体系可使染料废水的最大脱色率提高到87%。(本文来源于《东北林业大学》期刊2014-03-01）
徐红娜,于洪巍[9]（2013）在《羧酸酯酶BioH的克隆表达及其水解活性的定向进化》一文中研究指出通过分子克隆手段获得大肠杆菌来源的羧酸酯酶BioH,采用定向进化的方法提高该酶的水解活性以提升其应用价值.通过PCR扩增,从大肠杆菌K12菌株中克隆得到羧酸酯酶BioH基因,目的基因长度为771bp,含256个氨基酸;将其连接到pET30a(+)质粒上并转入BL21(DE3)宿主细胞中,经诱导表达得到所需的目的蛋白,该蛋白分子质量约为28.2ku.野生型的BioH水解对硝基苯丁酸酯(p-NPB)的活性为18U/mg,且该酶具有良好的热稳定性.以p-NPB为底物进行高通量筛选,其水解底物为对硝基苯酚(p-NP),在405nm处有最大吸收峰.挑选出水解活性提高的突变体,并通过2轮定向进化过程,成功筛选到7个水解活性提高的优良突变体,它们的活性分别提高了20%~100%.结构分析表明,突变体的突变位点均分布在远离活性中心的位置.(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2013年06期）
李刚[10]（2013）在《台湾乳白蚁肠道宏基因组中新型β-葡萄糖苷酶基因的克隆及定向进化研究》一文中研究指出β-葡萄糖苷酶可将纤维二糖和可溶性纤维寡糖水解成葡萄糖分子及相应配基,因此在纤维素的分解、食品风味的改善、疾病的检测和药物研制等方面具有重大应用价值。为获得酶活力高且酶学特性优良的新型β-葡萄糖苷酶,本研究构建了台湾乳白蚁肠道的宏基因组文库,并利用功能筛选法从中筛选到一个作用机制非常特殊的β-葡萄糖苷酶基因bgl3311,该基因在两个亚基(bgll923和bgl1392)的协同作用下才能表现出β-葡萄糖苷酶活性。这种由两个蛋白质分子相互作用才能表现出β-葡萄糖苷酶活性的现象以前尚未被报道过,对于研究β-葡萄糖苷酶的分子结构以及来自不同结构域的蛋白质分子之间的相互作用具有重要意义。利用原核表达系统对其进行了异源表达和酶学性质研究,结果显示,以pNPG为底物时,重组酶的最适温度和pH值分别为51℃和6.8,其K_m值为0.29 mM,V_(max)为573μM/min。此外,重组酶展现了良好的葡萄糖耐受性,当葡萄糖浓度为1.5M时,Bgl3311仍能保持最高酶活的64.5%,其葡萄糖抑制常数Ki值高达2.24M。令人感兴趣地是,在葡萄糖浓度低于1M时,葡萄糖的存在还能大幅度提高酶的热稳定性。因此该酶具有重要的工业应用潜力。此外,为了进一步提高Bgl3311的酶活力,还进行了该酶的定向进化研究。通过易错PCR方法构建了随机突变文库,然后以酶活力为筛选指标,最终获得了一株突变酶Bglm0326,其酶活力较野生型酶提高了2.6倍。DNA序列分析结果表明,突变酶较野生型酶相比,有叁个碱基发生了突变,并导致了一个同义突变(T446T)和两个氨基酸替换(S556A和H860L)。本论文应用宏基因组的方法首次从台湾乳白蚁肠道宏基因组文库中获得β-葡萄糖苷酶基因,并进行了该酶的定向进化研究。研究结果对于今后丰富β-葡萄糖苷酶的来源以及促进未培养微生物中β-葡萄糖苷酶的研究和应用具有重要的意义。(本文来源于《第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2013-11-14）
定向克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase,EC3.5.1.1)能专一催化水解L-天冬酰胺脱氨基生成L-天冬氨酸和氨。L-天冬酰胺酶不仅广泛应用于急性淋巴细胞白血病(ALL)、恶性淋巴瘤(ML)、霍奇金淋巴瘤(HL)等疾病的治疗,而且用于控制高温油炸、烘焙食品中丙烯酰胺的形成而不影响产品的外观、味道。目前L-天冬酰胺酶普遍存在稳定性差、酶活低、pH适用范围窄等问题,限制了其在食品加工中的应用。因此,寻找和发现新型的L-天冬酰胺酶具有深远理论意义和潜在的应用价值。本文针对以上问题,从土壤中筛选分离到一株高效产L-天冬酰胺酶菌株H-1,对其进行了形态特征、生理生化特征和分子生物学鉴定,并对其编码L-天冬酰胺酶基因ansA、ansZ进行了克隆和异源表达,以及对表达产物提纯和重组酶的酶学性质作了初步探讨。同时,对L-天冬酰胺酶的定向进化及其在油炸薯条中的应用进行了研究。主要研究结果分述如下。1.L-天冬酰胺酶产生菌的筛选与鉴定。采用酚红/BTB初筛平板筛选到100余株L-天冬酰胺酶产生菌,并通过摇瓶复筛,从江苏省某天冬酰胺生产企业排放污水口土壤中筛选一株具有较高酶活的菌株H-1,酶活达0.086±0.0023 IU/mL。对菌株H-1进行菌落形态观察、生理生化鉴定及分子生物学鉴定,确定菌株H-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。2.B.megaterium L-天冬酰胺酶的克隆与表达。根据Genbank中B.megaterium WSH-002的全基因组序列成功克隆出B.megateriumH-1 L-天冬酰胺酶基因ansA(1050 bp)、ansZ(1113 bp)序列,分别编码349与370个氨基酸蛋白。酶基因分别与表达载体pET-30a,pET-32a连接,成功构建了四个重组表达载体,实现L-天冬酰胺酶基因ansA、ansZ在Escherichia coli中异源表达,其中催化活力最高的pET-30a-BM-ansZ重组菌,经表达条件优化后酶活达4.26±0.22IU/mL,较野生菌的酶活提高约50倍,将该重组酶命名为BmAase。3.BmAase的分离纯化及其酶学性质研究。表达产物通过Ni亲和柱进行一步纯化,BmAase比活达到146.48 IU/mg(谷氨酰胺活性可忽略不计);SDS-PAGE分析与MALDI-TOF-MS检测出其分子量为39.628 kDa。BmAase的最适催化反应条件为40。℃,pH7.0;BmAase具有一个相对较宽的pH活性范围pH5.0-8.0,热稳定性好,60℃/70℃处理12 h仍分别保留70%/55%以上相对活力;BmAase动力学参数米氏常数Km为0.8 mM,最大反应速度Vmax为1.58IU/μg。4.B.megaterium L-天冬酰胺酶的定向进化。摸索易错PCR反应体系,按Mg2+、Mn2+浓度分别为2mM、0.06mM进行易错PCR反应。利用建立的基于96微孔板高通量筛选模型,经过2轮易错PCR,从8000多个突变株中筛选出酶活最高的突变株2MH6,其比活力为188.69 IU/mg,较BmAase提高约30%。以易错PCR筛选得到的突变体作为亲本进行DNA Shuffling,从5000多个突变株中筛选到突变株S-CA3,其比活力达到249.01 IU/mg,较BmAase提高70%,且该酶在pH5.0-9.0保持活力稳定,拓宽了碱性pH反应范围。5.L-天冬酰胺酶在油炸薯条中的应用。油炸前用L-天冬酰胺酶处理土豆条,通过HPLC-MS检测油炸薯条中丙烯酰胺含量发现,经L-天冬酰胺酶处理后油炸薯条中丙烯酰胺含量降低至7.6%(0.056 ± 0.0056 mg/kg),而未处理油炸薯条中丙烯酰胺含量高达0.738 ± 0.0163 mg/kg,说明B.megateriumL-天冬酰胺酶能有效控制薯条加工过程中丙烯酰胺的形成。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
定向克隆论文参考文献
[1].王瑞.菜豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及定向改造[D].江南大学.2018
[2].张孙燕.巨大芽孢杆菌L-天冬酰胺酶基因的克隆表达及定向进化[D].南京农业大学.2016
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[6].孟妍.单克隆抗体：定向打击难治之症[N].第一财经日报.2014
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[9].徐红娜,于洪巍.羧酸酯酶BioH的克隆表达及其水解活性的定向进化[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2013
[10].李刚.台湾乳白蚁肠道宏基因组中新型β-葡萄糖苷酶基因的克隆及定向进化研究[C].第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2013
论文知识图
