一株产低温β-半乳糖苷酶微杆菌的筛选鉴定、产酶条件及其酶学特性

论文摘要

【背景】低温β-半乳糖苷酶能在低温下仍保持较高的乳糖水解活性,筛选酶学特性适合在牛乳体系中高效水解乳糖的β-半乳糖苷酶生产菌株,是低乳糖牛乳加工产业关注的焦点。【目的】对天山中国一号冰川沉积物中分离的一株产低温β-半乳糖苷酶菌株的产酶条件和酶学特性进行研究。【方法】结合X-Gal平板法初筛和测定粗酶液酶活复筛,获得产低温β-半乳糖苷酶的菌株。通过形态学、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析对筛选菌株进行鉴定,单因素摇瓶实验优化菌株的产酶条件,硫酸铵分级沉淀初步纯化β-半乳糖苷酶并对其酶学特性进行分析。【结果】通过形态学、生理生化特征和16S rRNA基因鉴定,确定菌株LW106为微杆菌属（Microbacterium）菌株;该菌株最适产酶温度为25°C,最佳产酶碳源为可溶性淀粉,培养基初始pH为7.0,接种量为3%;对初步纯化的低温β-半乳糖苷酶酶学性质的研究表明,LW106所产β-半乳糖苷酶的最适pH为6.0,最适反应温度为35°C,4°C时酶活为最大酶活的78%,4°C和pH 7.0时的稳定性最好,10 mmol/L的Na+对酶活性基本没有抑制作用,Ca2+对酶活性具有一定的激活作用。【结论】菌株LW106所产低温β-半乳糖苷酶的酶学特性表明该酶在乳品低温加工领域具有进一步研究和应用的价值。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 样品采集及预处理
•   1.2 培养基
•   1.3 主要试剂和仪器
• 2 方法
•   2.1 产β-半乳糖苷酶菌株的分离筛选
•     2.1.1 初筛
•     2.1.2 复筛
•   2.2 oNP标准曲线的绘制
•   2.3 β-半乳糖苷酶活力的测定
•   2.4 产酶菌株的鉴定
•     2.4.1 形态观察
•     2.4.2 生理生化鉴定
•     2.4.3 16S rRNA基因序列分析
•   2.5 产酶条件研究
•     2.5.1 培养时间对产酶的影响
•     2.5.2 培养温度对产酶的影响
•     2.5.3 碳源对产酶的影响
•     2.5.4 培养基初始p H对产酶的影响
•     2.5.5 接种量对产酶的影响
•   2.6 酶学性质初步研究
•     2.6.1 β-半乳糖苷酶的初步纯化
•     2.6.2 温度对酶活力的影响
•     2.6.3 p H对酶活力的影响
•     2.6.4 金属离子对酶活力的影响
• 3 结果与分析
•   3.1 菌株的鉴定
•     3.1.1 菌株的形态特征和生理生化特征
•     3.1.2 菌株LW106的16S rRNA基因序列分析
•   3.2 菌株产酶条件的研究
•     3.2.1 培养时间和温度对生长及产酶的影响
•     3.2.2 培养基初始p H对产酶的影响
•     3.2.3 碳源对产酶的影响
•     3.2.4 接种量对产酶的影响
•   3.3 酶学特性的初步研究
•     3.3.1 酶的最适温度及热稳定性
•     3.3.2 酶的最适p H及p H稳定性
•     3.3.3 金属离子对LW106所产β-半乳糖苷酶活性的影响
• 4 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张宇洁,王丽军,李梦,顾燕玲,关波,倪永清

关键词: 低温半乳糖苷酶,微杆菌,中国一号冰川,酶学特性

来源: 微生物学通报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 石河子大学食品学院

基金: 国家自然科学基金(31560432),石河子大学青年创新人才培育计划项目(CXRC201702)~~

分类号: Q936

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180241

页码: 609-617

总页数: 9

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