导读:本文包含了外源基因的表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:核糖开关,适体核酶,枯草芽胞杆菌,基因调控
外源基因的表达论文文献综述
缪胜男,杨婷尧,崔文璟,周哲敏[1]（2019）在《茶碱激活型RNA分子开关的构建及在枯草芽胞杆菌中调节外源基因表达的性能》一文中研究指出枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis在工业生物技术以及合成生物学领域作为一种重要的微生物可广泛用作代谢工程、重组蛋白表达以及新型基因电路的底盘。在B. subtilis中构建基于非编码RNA的高精准调节元件,能够实现不依赖蛋白质因子的基因表达调控,丰富B.subtilis基因表达通用工具。通过基因工程手段,设计了基于茶碱适体域的核糖开关E和适体核酶AZ调节元件,并与不同的B.subtilis内源组成型启动子适配,构建出茶碱激活型基因表达控制元件。测定这两种调节元件与6种组成型启动子组合匹配下报告基因GFP的荧光强度,鉴定并分析各调控元件的工作性能。并进一步以红色荧光蛋白mCherry和普鲁兰酶两种不同的异源蛋白验证核糖开关或适体核酶与启动子的最优组合。结果表明,同一种RNA调节元件与不同启动子组合呈现不同水平的调控效率。在核糖开关与启动子的组合中,启动子PsigW和核糖开关E组合(sigWE)对GFP表达的诱导率最高,达到16.8。在适体核酶与启动子的组合中,AZ与启动子P43、PrpoB组合(P43AZ和rpoBAZ)的诱导率最高,分别达到了6.1和6.2。进一步验证结果显示,sigWE调控mCherry的诱导率最高(9.2),而P43E调控普鲁兰酶的诱导率最高(32.8),产酶水平达到了81U/mL。核糖开关和适体核酶对GFP、mCherry、普鲁兰酶均能实现调控,但是不同元件组合的调控性能有所差异,对不同基因的调控效果也不尽相同。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年08期）
杜京尧,尚飞,王高华,梁卫红[2]（2019）在《OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析》一文中研究指出水稻Rho GDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因。为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化。对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T_2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69～13.35倍。为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年14期）
侯倩倩[3]（2019）在《外源基因在产甘油假丝酵母中的表达策略及应用研究》一文中研究指出产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)作为甘油高效工业化生产菌株,拥有独特的耐高渗透压、耐高温高糖、耐有机酸等抗逆性强特点,是潜在的合成生物学底盘工业微生物。该菌株在遗传与分子生物学方面研究仍有许多空白,阻碍了对其工业应用潜力的开发。酵母作为外源基因表达的重要真核表达系统之一,影响基因表达的因素有很多。本研究从密码子偏好性、启动子、mRNA二级结构等对外源基因在该菌株中表达策略进行研究,旨在为工业抗逆酵母改造、生产高附加值产品提供基础,本论文研究具体如下:为从密码子偏好性优化外源基因表达,研究利用Codon-W分析C.glycerinogenes密码子使用情况,结果发现,C.glycerinogenes平均GC含量为40.3%,GC3s平均含量为37.2%,最优密码子有25个且多以A/U结尾;通过表达不同来源外源基因GFP、ldhA、xylB、xylD、kivD发现:GFP、ldhA密码子偏好与宿主相似,易于成功表达,而xylB、xylD、kivD的GC含量均大于65%,密码子多以G/C结尾,CAI值均约为0.2,ENc值都在40以上,基因只转录不表达,只有在密码子优化后才成功表达;结果表明,利用密码子同义突变优化外源基因,减小GC含量和ENc值,提高CAI值,能够调控基因在C.glycerinogenes中的表达效率。基于启动子表达策略,进一步研究不同启动子对GFP、xylB和ldhA表达影响,具体为:从C.glycerinogenes中选择5个组成型启动子PGAP、PPDC、PPGK1、PCS1和PLSC2表达GFP,PGAP启动强度最强,其次为PPDC和PPGK1;利用低pH诱导型启动子PGMT1、PGUK1和组成型启动子PGAP、PPDC、PPGK1表达xylB和ldhA,发现组成型启动子调控表达基因在pH 5.0和4.0时无明显变化,pH 3.0时明显下降,低pH诱导型启动子PGMT1表达的xylB和ldhA转录水平pH 2.5相比pH 5.5分别提高14.3倍和23.3倍,导致木糖酸和乳酸产量分别提高2.6倍和3.2倍;研究显示,C.glycerinogenes作为宿主可对不同外源基因采用不同启动子表达策略,可实现外源基因进行表达量控制。以GFP和密码子优化后xylB为研究对象,探索在C.glycerinogenes中翻译起始区附近二级结构最小自由能变化和拷贝数的表达策略,研究发现,GFP翻译起始区二级结构ΔG_0=-3.3 Kcal·mol~(-1)降至ΔG_(12)=-12.0 Kcal·mol~(-1)时荧光强度降低49.6%,而ΔG_4=-6.3Kcal·mol~(-1)的碱基配对概率相比ΔG_0减小,荧光强度提高31.1%;xylB翻译起始区二级结构ΔG_0=-6.2 Kcal·mol~(-1)升至ΔG_1=-2.4 Kcal·mol~(-1)时,减弱了mRNA二级结构稳定性,碱基处于配对的概率减小,表达的酶活提高40.4%;增加外源基因拷贝数使重组菌C.g-6GFP荧光强度是单拷贝的3.9倍,C.g-4xylB01酶活和xylB转录水平分别是单拷贝的1.5倍和2.8倍,木糖酸的产量达到24.5 g·L~(-1),而6个xylB拷贝数时酶活和转录水平相比4个时降低35.7%和36.5%;结果表明,通过改变外源基因翻译起始区二级结构的最小自由能和优化拷贝数在一定程度上可以控制外源基因在C.glycerinogenes中的表达量。(本文来源于《江南大学》期刊2019-06-01）
刘性坡[4]（2019）在《表达外源基因的重组鸭坦布苏病毒的构建与稳定性研究》一文中研究指出自2010年以来,新发鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)病在我国广泛流行,给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。本研究拟利用弱毒疫苗株(FX2010-180P)建立的反向遗传操作系统,探索在该致弱毒株基因组的不同位置插入报告基因,找到一处能够表达外源蛋白的插入位点,为以后新型疫苗的研发奠定基础。为了探究DTMUV是否能够稳定表达外源蛋白,利用融合PCR等方法,在DTMUV基因组的5’非编码区(UTR)与C基因、C基因与PrM基因、PrM基因与E基因、E基因与NS1基因之间分别插入绿色荧光蛋白基因(EGFP),并在基因之间插入表达口蹄疫2A蛋白的序列;在NS5基因与3’UTR之间插入内部核糖体引入位点(IRES)与EGFP,进而获得5’端含有启动子、外源基因序列的FX2010-180P株全长cDNA。然后以此为模板进行体外转录,得到具有感染性的RNA,将其转染至DF-1细胞4d后,只有NS5基因与3’UTR之间插入外源基因的转染孔出现了表达绿色荧光蛋白的重组DTMUV。将重组病毒连续传代,发现随着传代次数的增加荧光强度逐渐减弱,传至P5代荧光完全消失。测序结果显示,重组病毒不仅丢失了IRES 3’端506个核苷酸以及整个EGFP,而且还丢失了FX2010-180P株3’端紧挨着终止密码子的67个核苷酸。鉴于此,我们人为缺失这67个核苷酸,同时插入IRES与EGFP,同样方法进行重组病毒拯救,发现病毒能够增殖并且产生与亲代毒相似的细胞病变,传至第5代后荧光逐渐减弱,P7代后荧光完全消失,说明缺失这67个核苷酸的重组病毒依旧不能稳定表达外源蛋白。通过高通量测序发现,P2代重组病毒中至少含有12种不同长度序列缺失的病毒,缺失位置也不一致,每个位置丢失序列的长度也不尽相同。继续传代后发现细胞上清中重组病毒种类逐渐减少,最后以一种或者几种比较优势的状态存在。本研究证明在NS5基因与3’UTR之间虽然能够插入并表达外源基因,但是传代后不稳定;本研究获得一系列序列缺失病毒,为研究黄病毒基因稳定性的分子机制提供了素材,为构建稳定表达外源基因的病毒载体奠定了基础。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
赵艳,唐涌洲,史玉倩[5]（2019）在《水稻种子特异性谷蛋白GluB1启动子在水稻愈伤组织中驱动外源基因表达》一文中研究指出【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无表达活性。研究的目的是为了克服种子特异表达启动子筛选周期长的缺点。【方法】将由pGluB1驱动的霍乱毒素B亚单位和重组胰岛素原组成的融合基因(a fusion gene of the cholera toxin B subunit and human proinsulin, CTBIN)表达载体pCAMBIA1302-pGluB1sig-CTBIN-NOS经农杆菌介导法转化水稻成熟胚愈伤组织。通过RT-PCR和蛋白质印迹杂交试验检测融合基因CTBIN在水稻愈伤组织中的转录和翻译表达。【结果】获得的7个转基因愈伤克隆中,有6个克隆的融合基因CTBIN在转录水平上表达。选取其中4个克隆进一步进行蛋白质印迹杂交试验检测证实融合基因CTBIN均在翻译水平上表达,而且从分子量大小推断融合蛋白包含的谷蛋白GluB1的N-端信号肽序列(24个氨基酸残基)在所测的愈伤组织细胞中均被成功切除。【结论】水稻种子特异性启动子pGluB1在愈伤组织中具有驱动外源基因表达活性,种子蛋白体亚细胞定位信号肽序列可在愈伤组织细胞中被切除。这为在愈伤组织细胞中快速检测种子特异表达启动子活性和探索愈伤组织中蛋白质的亚细胞分拣机制奠定了基础。(本文来源于《中国水稻科学》期刊2019年01期）
王棋文,李盼,潘翠云,韩芬霞[6]（2019）在《乙二醇对体内外源基因表达的作用研究》一文中研究指出探索在液压转基因中乙二醇对小鼠肝脏外源基因表达的影响。以小鼠液压转基因的条件从小鼠尾静脉注射含不同浓度乙二醇的pEGFP-C1质粒溶液,分别在尾静脉注射后24 h、48 h和72 h取小鼠肝脏右叶制冷冻切片,在波长488 nm的荧光显微镜下观察,统计绿色荧光蛋白表达率;同时进行苏木素染色,进行小鼠肝脏形态结构观察。结果显示,乙二醇浓度在0.05 mol/L-0.5mol/L范围内,转基因后24 h时随着乙二醇浓度升高,绿色荧光蛋白阳性细胞率呈降低趋势;72 h时绿色荧光蛋白阳性细胞率随着乙二醇浓度升高而升高,且在72 h乙二醇浓度为0.5 mol/L时阳性细胞率较高。乙二醇在液压转基因中能调节外源基因的表达,使表达高峰向后推移。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年04期）
罗放,俞易,陈铭哲,杨以清,魏垠[7]（2018）在《外源基因表达造成的群体感应细菌生存压力的建模分析（英文）》一文中研究指出外源基因的表达及其对细菌种群的影响对于群体感应系统和合成生物学产业的研究具有重要意义。然而,人们对于表达外源蛋白的细菌本身的行为模式仍然知之甚少。为了研究菌落生长和外源基因表达的过程究竟受到哪些因素的影响,文中测量了受Lux类受体调控的外源基因在N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactone,N-AHL)信号分子诱导下的表达,并模拟了其对细菌种群动态的影响。文中建立了一个假设性的数学模型,对信号分子诱导表达下细菌种群生长受影响的现象进行了分析。先前的研究通常将细菌种群生长受群体感应系统影响的现象归咎于合成群体感应信号分子的消耗与N-AHL信号分子的毒性,文中提供了对于这种生存压力的另一种可能的解释。(本文来源于《生物工程学报》期刊2018年12期）
刘晓华,文冬梅,余庆,邓凯,陆凤花[8]（2018）在《组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达的影响》一文中研究指出本研究旨在探讨不同浓度的组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对转基因水牛成纤维细胞外源基因表达水平的影响,为外源基因表达机制研究及提高转基因水牛生产效率提供理论依据。试验首先使用不同浓度的UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5、5.0μmol·L~(-1))处理水牛胎儿成纤维细胞(BFFs)8d,绘制细胞生长曲线,并在UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1))处理BFFs 48h后,检测细胞核型,同时利用细胞免疫荧光技术分析组蛋白H3K9me2甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达效率的影响。结果表明:1)BFFs经不同浓度UNC0638处理后,生长曲线与对照组相似,均呈"S"形分布,0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1 )UNC0638处理组与对照组相比细胞增殖效率没有发生显着变化,5.0μmol·L~(-1)UNC0638抑制BFFs增殖;2)各处理组细胞核型正常率与对照组间差异不显着;3)此外,UNC0638处理组的细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平显着低于对照组(P<0.05);4)UNC0638(0、0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1))处理水牛转基因胎儿成纤维细胞24h,2.5μmol·L~(-1)组细胞eGFP的相对表达量显着高于对照组(P<0.05);处理48h,0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1)组eGFP的表达量与对照组相比显着提高(P<0.05)。综上表明,UNC0638可有效降低水牛成纤维细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平并提高水牛转基因细胞外源基因的表达效率。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年10期）
徐根兴,戴宇青,赵广义[9]（2018）在《一种含ELP60基因的载体pRELPN促进大肠杆菌的外源基因的高表达》一文中研究指出类弹性蛋白多肽(ELP)为含有人工合成的ELP60基因的表达载体pRELPN,能促使外源基因在大肠杆菌中的高表达。当ELP60在大肠杆菌表达载体p ET28a的多克隆位点被克隆后,其自身的表达低,也不与目的基因构成ELP融合蛋白质,而是促进克隆在ELP60基因后的含起始密码ATG的外源目的基因独立高表达。外源目的基因表达量占宿主蛋白的20%~60%,比用p ET28a载体表达的外源基因表达量高2~10倍。此类表达载体pRELPN适合于表达包括抗体、抗原、酶、重组蛋白质、多肽及ELP融合蛋白质等的外源基因的独立高表达。这些结果表明,pRELPN代表了一种有效的表达载体,有助于解决在原核表达中,所受限的普通载体对外源基因低表达或不表达所导致的不能产业化的问题。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2018年09期）
陈思涵,钱靖,彭杰军,鲁宇文,郑红英[10]（2018）在《农杆菌介导的外源基因在本氏烟中瞬时表达体系优化研究》一文中研究指出为提高外源蛋白的表达量及稳定性,期望通过RNA、蛋白水平的研究,制定一套高效的外源蛋白表达体系。通过共表达沉默抑制子、添加定位信号、沉默自噬关键基因atg5,分析各处理对植物外源蛋白表达的影响。结果表明:共表达植物病毒沉默抑制子p25或HC-Pro抑制mRNA降解速率,提高外源蛋白表达水平;外源蛋白增加内质网定位信号,可提高蛋白的持续表达能力;瞬时沉默自噬途径关键基因atg5,有利于外源蛋白的积累。外源蛋白表达过程中对易降解的外源蛋白,通过添加定位信号并结合使用沉默抑制子、自噬途径缺陷植株,可作为提高外源蛋白表达量及稳定性的新策略。(本文来源于《西南林业大学学报(自然科学)》期刊2018年04期）
外源基因的表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
水稻Rho GDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因。为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化。对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T_2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69～13.35倍。为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外源基因的表达论文参考文献
[1].缪胜男,杨婷尧,崔文璟,周哲敏.茶碱激活型RNA分子开关的构建及在枯草芽胞杆菌中调节外源基因表达的性能[J].生物工程学报.2019
[2].杜京尧,尚飞,王高华,梁卫红.OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析[J].江苏农业科学.2019
[3].侯倩倩.外源基因在产甘油假丝酵母中的表达策略及应用研究[D].江南大学.2019
[4].刘性坡.表达外源基因的重组鸭坦布苏病毒的构建与稳定性研究[D].山东农业大学.2019
[5].赵艳,唐涌洲,史玉倩.水稻种子特异性谷蛋白GluB1启动子在水稻愈伤组织中驱动外源基因表达[J].中国水稻科学.2019
[6].王棋文,李盼,潘翠云,韩芬霞.乙二醇对体内外源基因表达的作用研究[J].生物技术通报.2019
[7].罗放,俞易,陈铭哲,杨以清,魏垠.外源基因表达造成的群体感应细菌生存压力的建模分析（英文）[J].生物工程学报.2018
[8].刘晓华,文冬梅,余庆,邓凯,陆凤花.组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达的影响[J].畜牧兽医学报.2018
[9].徐根兴,戴宇青,赵广义.一种含ELP60基因的载体pRELPN促进大肠杆菌的外源基因的高表达[J].中国生物化学与分子生物学报.2018
[10].陈思涵,钱靖,彭杰军,鲁宇文,郑红英.农杆菌介导的外源基因在本氏烟中瞬时表达体系优化研究[J].西南林业大学学报(自然科学).2018