抗菌肽Eumenitin序列修饰后的毕赤酵母重组表达载体构建

论文摘要

为了构建高效低毒的新型抗菌肽,将抗菌肽Eumenitin及其序列修饰后获得4条新型短肽的毕赤酵母真核表达载体,采用生物信息学方法对Eumenitin及其衍生肽的理化参数进行预测,基因序列经毕赤酵母密码子优化后,克隆至pMD19T-simple载体上,鉴定后连接至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,构建的重组表达质粒经Avr Ⅱ线性化后,电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,涂布于YPDSZ平板上,进行表型筛选和高拷子筛选,并对5条短肽的溶血率进行测定。结果显示:Eumenitin及其衍生肽均为较稳定的疏水性多肽,空间结构以α螺旋为主,且序列中不含有信号肽。经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,成功构建了5条短肽的毕赤酵母重组表达载体,经设计改造后的抗菌肽溶血性均较低。本研究结果为后续进行重组蛋白的表达以及抑菌活性研究奠定了基础,以期获得抗菌活性强、溶血性低、高表达的新型抗菌肽。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 主要工具酶和试剂
•   1.3 AMPs的序列修饰及生物学信息分析
•   1.4 毕赤酵母重组表达载体的构建
•   1.5 重组表达质粒的线性化及电转化毕赤酵母GS115
•   1.6 多拷贝重组转化子的筛选
•   1.7 合成肽溶血活性测定
• 2 结果与分析
•   2.1 AMPs的生物信息学分析
•   2.2 毕赤酵母重组表达载体的构建
•   2.3 表达E1～E5毕赤酵母工程菌的构建及高拷贝子的筛选
•   2.4 溶血性测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 尚翠玲,孟佳丽,李昕,王小月,李丹,蓝肇煜,姚景丽,武静桥,范真玮,金天明

关键词: 毕赤酵母,抗菌肽

来源: 畜牧与兽医 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 天津农学院动物科学与动物医学学院

基金: 国家自然基金项目(31572492),天津市科技计划项目(高端兽药先进制造科技重大专项)(17ZXGSNC00030),天津市农委农业科技示范推广项目(201601380)

分类号: Q78

页码: 96-99

总页数: 4

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