重组绵羊FSH在CHO-K1细胞中的表达及其应用

论文摘要

在CHO-K1细胞中分泌表达重组绵羊FSH及其生物活性初探。构建重组表达质粒pcDNA3.1-FSHβα,转染至全悬浮CHO-K1细胞中,经过G418加压筛选出表达量高的单克隆细胞,于生物反应器中扩大培养,并进行超滤浓缩,将浓缩后的重组绵羊FSH免疫小鼠,测定小鼠卵巢重量并分析血清中黄体生成素和孕酮含量。成功构建了重组质粒pcDNA3.1-FSHβα,并成功在全悬浮CHO-K1细胞中实现分泌表达,表达量为297.97 ng/mL,注射重组绵羊FSH的小鼠卵巢重量显著增加,黄体生成素和孕酮含量均显著上调。重组绵羊FSH蛋白在CHO-K1细胞中成功表达,并具有一定的生物活性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 重组FSH设计及合成
•     1.2.2 重组质粒pcDNA3.1-FSHβα的酶切、测序鉴定
•     1.2.3 重组质粒pcDNA3.1-FSHβα电转染CHO-K1-S2细胞
•     1.2.4 CHO-K1-S2-FSH单克隆细胞筛选
•     1.2.5 单克隆细胞的生物反应器培养
•     1.2.6 重组绵羊FSH蛋白超滤
•     1.2.7重组绵羊FSH小鼠试验
•     1.2.8统计学分析
• 2 结果
•   2.1 重组表达质粒pcDNA3.1-FSHβα的酶切、测序验证
•   2.2 重组质粒pcDNA3.1-FSHβα蛋白表达检测
•   2.3 CHO-K1-S2-FSH单克隆细胞筛选
•   2.4 单克隆细胞的生物反应器培养
•   2.5 重组绵羊FSH蛋白超滤
•   2.6 重组FSH对小鼠卵巢重量的影响
•   2.7 小鼠孕酮Pg及黄体生成激素LH的ELISA检测
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王兴陇,李倩,马瑞仙,李生军,李向茸,冯若飞

关键词: 促卵泡激素,细胞,生物反应器

来源: 生物技术通报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室,西北民族大学生命科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31460665),西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助研究生项目(Yxm2019147),国家民委中青年英才计划[批准号(2018)98],教育部“创新团队发展计划”项目(IRT_17R88)

分类号: S826

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0668

页码: 112-117

总页数: 6

文件大小: 3988K

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