构建eat-2/cpl-1&Plgg-1gfp∶∶lgg-1双突变体线虫

论文摘要

LGG-1是线虫中与哺乳动物LC3-Ⅰ同源的蛋白,eat-2是限制性饮食突变体,cpl-1编码组织蛋白酶L,主要表达在溶酶体中参与降解蛋白质。为了研究三者之间关系,文章构建了eat-2&Plgg-1gfp∶∶lgg-1、cpl-1&Plgg-1gfp∶∶lgg-1双突变体。通过Plgg-1gfp∶∶lgg-1雄虫与eat-2/cpl-1雌雄同体杂交,在F3代中,通过绿色荧光和基因测序等方法来筛选出纯合的双突变体。最后分别检测双突变体中组织蛋白酶L及咽部收缩速率的变化。

论文目录

• 0 引 言
• 1 材料和方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 主要试剂
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 线虫培养基的配置
•     1.3.2 线虫的同步化及培养
•     1.3.3 PCR反应体系及程序
•     1.3.4 胶回收及测序
•     1.3.5 线虫总蛋白的提取及western blot
•     1.3.6 统计学处理
• 2 结果与分析
•   2.1 筛选双突变体中纯合的LGG-1∶∶GFP线虫
•   2.2 eat-2与cpl-1基因的扩增
•   2.3 eat-2 与cpl-1突变体测序鉴定
•   2.4 鉴定所构建的转基因线虫的表型特征
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 聂先奇,鲍斌

关键词: 秀丽隐杆线虫,自噬,组织蛋白酶,杂交

来源: 合肥工业大学学报(自然科学版) 2019年12期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 合肥工业大学食品与生物工程学院

基金: 国家自然科学基金青年科学基金资助项目(31401204)

分类号: Q32

页码: 1699-1703

总页数: 5

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