DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值

论文摘要

为了阐明ERK（extracellular signal-regulated protein kinases）1/2通路在传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）复制过程中的作用以及双特异性磷酸酶6（dual specificity phosphatase 6, DUSP6）对ERK的反馈性负向调控在IBV复制过程中的作用。本研究通过Western blot、Northern blot检测发现:IBV感染Vero和H1299细胞可导致ERK1/2的磷酸化水平和DUSP6表达均上调;利用MEK1/2特异性抑制剂U0126处理病毒感染的细胞后,可明显下调ERK1/2的磷酸化,同时抑制病毒的增殖;利用DUSP6的特异性抑制剂BCI抑制DUSP6的活性或者用siRNA阻断DUSP6的表达后,再感染IBV,发现ERK1/2的磷酸化水平增高,病毒蛋白的表达上调。综上,推测IBV感染细胞激活ERK1/2信号通路,有助于病毒的复制,同时,细胞通过诱导表达DUSP6,负向调控ERK1/2的磷酸化水平,抑制病毒增殖。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒和细胞
•   1.2 主要试剂和抗体公司；氯仿、异丙醇、甲醛购自美国Thermo Fisher公司；乙醇购自上海泰坦科技股份有限公司；逆转录酶AMV购自Roche Diagnostics公司；Oligo dT由金唯智公司合成；地高辛标记试剂盒、DIG Wash and Block Buffer Set、DIG easy Hyb、Anti-digoxigenin-AP Fab fragments和CDP-Star均购自德国罗氏公司；溴化乙锭试剂购自Bio-Rad中国公司；HybondTM-N+膜、硝酸纤维素膜购自Amersham Biosciences公司；DEPC水、冰醋酸、柠檬酸钠、三（羟甲基）氨基甲烷购自生工生物（上海）股份有限公司；DUSP6、p-ERK1/2、ERK1/2抗体购自CST公司；β-tubulin抗体购自美国Eptiomics公司；抑制剂U0126和BCI购自美国Sigma公司；siRNA由上海吉玛公司合成。
•   1.3 RNA提取
•   1.4 探针合成
•   1.5 Northern blot
•   1.6 Western blot
•   1.7 U0126抑制实验
•   1.8 siRNA干扰实验
• 2 结果
•   2.1 IBV感染引起ERK1/2的磷酸化
•   2.2 U0126抑制IBV-N蛋白的表达
•   2.3 IBV诱导DUSP6的表达
•   2.4 药物抑制DUSP6活性或者siRNA干扰DUSP6表达，均能上调ERK1/2磷酸化水平，并促进IBV增殖
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王欢,丁铲,刘定祥,廖瑛

关键词: 传染性支气管炎病毒,通路,双特异性磷酸酶,病毒复制

来源: 中国动物传染病学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院上海兽医研究所,华南农业大学群体微生物中心

基金: 国家自然科学基金(31772724),国家重点研发计划“畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发”重点专项(2017YFD0500802)

分类号: S852.65

页码: 10-16

总页数: 7

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