基于Cre/LoxP系统建立软骨组织特异性印第安刺猬蛋白基因敲除小鼠模型

论文摘要

背景:印第安刺猬蛋白（Ihh）条件性基因敲除小鼠动物模型的建立,实现了印第安刺猬蛋白条件性基因敲除能够在时间和组织上具有选择性,能够为进一步研究与生长板有关的严重遗传病提供实验基础。目的:基于Cre/LoxP系统建立软骨组织特异性印第安刺猬蛋白基因敲除小鼠模型,并进一步观察其表型变化差异。方法:SPF级亲代Ihhfl/fl小鼠与Col2a1-CreERT2小鼠,均由美国布朗大学魏垒教授赠予。将亲代Ihhfl/fl小鼠与Col2a1-CreERT2小鼠杂交,获得基因型Col2a1-CreERT2,Ihhfl/-小鼠;再将此基因型小鼠自交,获得刚出生的小鼠。通过琼脂糖凝胶电泳对刚出生小鼠进行基因鉴定,随机分为2组:实验组小鼠于出生后第1天开始腹腔注射玉米油溶解的20 g/L他莫昔芬10μL,连续注射3 d;对照组小鼠腹腔注射等量玉米油。出生后第6天RT-qPCR检测印第安刺猬蛋白基因的敲除率;第8天小鼠膝关节行番红固绿染色、Von Kassa染色进行初步表型观察;第8周行小鼠大体形态观察、记录后肢股骨/胫骨长度,后肢X射线片观察。结果与结论:①通过RT-qPCR证实了印第安刺猬蛋白条件性基因敲除率为76.83%,8周龄小鼠大体形态表现为肢体短小畸形（P <0.01）;②X射线显示敲除小鼠胫骨明显缩短且骨骺端发育异常;③番红固绿染色显示印第安刺猬蛋白条件性敲除表达在发育中的小鼠胫骨生长板软骨组织这一特定区域;④Von Kassa染色显示Ihhd/d小鼠生长板过早闭合;⑤初步建立了印第安刺猬蛋白条件性基因敲除小鼠模型,印第安刺猬蛋白条件性基因敲除后引起小鼠生长板区软骨细胞增殖紊乱,生长板区软骨细胞提前矿化,生长板过早骨化闭合,小鼠表现为肢体短小畸形。

论文目录

• 文章快速阅读:
• 文题释义:
• 0引言Introduction
• 1 材料和方法Materials and methods
•   1.1 设计
•   1.2 时间及地点
•   1.3 材料
•     1.3.1 实验动物
•     1.3.2 小鼠的饲养和繁殖
•   1.4 实验方法
•     1.4.1 小鼠子代基因型鉴定
•     1.4.2 DNA的提取
•     1.4.3 鼠尾Cre、Ihh基因的扩增
•     1.4.4 扩增产物电泳
•     1.4.5 构建Col2a1-CreERT2 Ihhd/d基因小鼠模型
•     1.4.6 实验动物分组
•     1.4.7 RT-qPCR测定Ihh基因敲除率
•     1.4.8 番红固绿染色
•     1.4.9 Von Kassa染色
•     1.4.1 0 外观照及X射线片
•   1.5 主要观察指标
•   1.6 统计学分析
• 2 结果Results
•   2.1 PCR基因型分析
•   2.2 Ihh基因的敲除率
•   2.3 小鼠膝关节切片番红固绿染色结果
•   2.4 小鼠膝关节切片Von Kassa染色结果
•   2.5 小鼠膝关节切片外观形态照及后肢X射线观察
• 3 讨论Discussion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 袁涛,王勇卓,黄远章,席刚,魏垒,张民

关键词: 组织构建,骨组织工程,软骨生长板,条件基因敲除,动物模型,他莫昔芬,小鼠

来源: 中国组织工程研究 2019年19期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 山西医科大学附属第二临床医学院骨与软组织损伤修复山西省重点实验室,美国布朗大学医学院骨科/罗德岛州医院骨科

基金: 国家国际科技合作专项项目(2015DFA33050),项目参与者:张民,山西省人社厅择优资助重点项目(2017-19),项目负责人:张民~~

分类号: Q78;R-332

页码: 3013-3018

总页数: 6

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