导读:本文包含了短干涉论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:白血病,干扰,蛋白,果蝇,基因治疗,大鼠,细胞。
短干涉论文文献综述
孙聪[1]（2009）在《STAT3特异性短干涉RNA抑制神经胶质瘤细胞增殖的研究》一文中研究指出目的:探讨在STAT3基因不同的结构域选择干涉靶点制备的siRNA对大鼠神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法:针对STAT3编码区的叁个不同结构域SH2、CCD和TAD各分别选择一段序列,在体外构建短发夹结构,连到人U6启动子后,克隆到T载体中,构建重组体,再对重组质粒进行酶切鉴定,阳性的质粒DNA测序分析后再克隆到穿梭质粒PDC316中,通过Lipofectamine2000的介导和腺病毒包装质粒PBHG共转染至人胚肾HEK293细胞株中,经同源重组后获得重组腺病毒rAdUshSTAT3,应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。以阴性为对照,转染到大鼠神经胶质瘤(C6)细胞,MTT法检测C6细胞增殖情况,吖啶橙法检测C6细胞形态的改变,RT-PCR法和Western-blot法观察STAT3基因表达改变,用免疫组织化学卵白素-生物素-过氧化酶(ABC)检测C6细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:获得了带有U6启动子及STAT3反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshSTAT3(1-4),病毒滴度分别为108.6 TCID50/ml, 109.2 TCID50/ml,108 TCID50/ml, 108.4 TCID50/ml;未转导病毒的细胞相比,rAdSTAT3(1)、rAdSTAT3(2)和rAdSTAT3(3)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为20.16%、56.25%、73.18%; 19.76%、52.06%、70.2%;12.93%、49.59%、60.39%。rAdUshSTAT3(1)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了68.82% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了68% (p<0.005);rAdUshSTAT3(2)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了56.93% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了44% (p<0.01); rAdUshSTAT3(3)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了56.95% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了38%;与rAdSTAT3(4)相比,rAdSTAT3(1)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为18.76%、41.22%和62.35%;rAdSTAT3(2)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为18.34%、35.58%和58.16%;rAdSTAT3(3)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为11.4%、31.7%和48.33%。rAdUshSTAT3(1)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了65.24% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了56.25% (p<0.01);rAdUshSTAT3(2)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了51.98% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了37% (p<0.05); rAdUshSTAT3(3)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了50.95% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了31% (p<0.05)。吖啶橙染色法结果显示rAdUshSTAT3(1-3)转染后的细胞数量明显减少,细胞质萎缩,细胞核相对较大,并且出现凋亡小体。尤其是rAdUshSTAT3(1)转染后最为明显。免疫组化法显示rAdUshSTAT3(1)转染C6细胞后的PCNA表达量明显低于rAdUshSTAT3(4)转染C6细胞后的PCNA表达量(P<0.05)结论:在SH2结构域上选择的干涉靶点上制备的SiRNA抑制神经胶质瘤细胞增殖的效果最强,在CCD和TAD结构域上选择的干涉靶点上制备的SiRNA抑制神经胶质瘤细胞增殖的效果虽然也很好,但弱于在SH2结构域上选择的干涉靶点制备的SiRNA,这为今后针对STAT3的RNA干涉的再深入研究奠定了坚实基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2009-04-01）
[2]（2008）在《果蝇的内生短干涉RNAs》一文中研究指出本刊讯转座因子最近被发现在体细胞及生殖细胞中都是活跃的。最近,一类小RNA,即piRNAs,被发现能从生殖细胞的反转录转座子中表达,并且能调控它们的转录沉寂。在这项研究中,Kawamura等人识别出另一类小RNA,即内生短干涉RNA(endo-siRNA(本文来源于《中国医院用药评价与分析》期刊2008年06期）
李宁,钱新华,王志远[3]（2006）在《短干涉RNA特异性抑制白血病细胞中肺耐药相关蛋白基因表达(英文)》一文中研究指出背景和目的双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,导致转录后水平的基因沉默。肺耐药相关蛋白的过度表达与白血病细胞多药耐药密切相关。本研究旨在探讨白行设计的LRP特异性siRNA能否发挥特异性降解LRPmR- NA、抑制蛋白质表达的作用。方法构建LRP真核表达载体pcDNA3．0／LRP。以pcDNA3．0／LRP、pEGFP-C1、二者的特异性siRNA分别组和,转染K562细胞。以RT-PCR方法和流式细胞术检测LRP mRNA和蛋白质水平的变化,以荧光显微镜检测GFP的表达的变化。结果K562细胞转染pcDNA3．0／LRP后,LRP mRNA水平明显升高,蛋白质表达由阴性转为阳性,阳性率30％;LRP特异性siRNA与pcDNA3．0／LRP共同转染K562细胞,LRP mRNA和蛋白质表达均明显降低,由阳性转为阴性;LRP特异性siRNA与pEGFP-C1共同转染K562细胞,GFP的表达与pEGFP-C1单独转染无差异;GFP特异性siRNA与pcDNA3．0共同转染K562细胞,LRP mRNA水平和蛋白质表达与pcDNA3．0／LRP单独转染无差异。结论 LRP特异性siRNA在K562细胞中能够特异性地降解LRPmRNA、抑制其蛋白质表达。该研究将为利用 siRNA逆转LRP引起的白血病细胞MDR奠定理论基础。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2006年01期）
李宁[4]（2003）在《短干涉RNA特异性抑制K562细胞肺耐药相关蛋白基因表达的研究》一文中研究指出在多种生物中，外源双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)导入细胞中，与dsRNA同源的mRNA受到降解，其相应基因受到抑制，称为RNA干涉(RNA interference，RNAi)。这种属于RNA水平上的基因抑制，可能是生物普遍存在的RNA水平上调节基因表达的方式，同时也提供了一种特异性失活功能基因的方法。新近发现，体外合成dsRNA可直接触发RNAi，这些小分子dsRNA被称为小干涉RNA(small interfering RNA)或短干涉RNA(short interfering RNA)，即siRNA。多项实验证明，siRNA具有强大、特异的基因抑制功能，对于体外转导的基因和细胞的内生基因同样有效。尤其是在特异性抑制哺乳动物细胞基因方面，既可以特异性抑制、降解同源mRNA序列，有效阻止相应蛋白质的表达，又可避免长链dsRNA引起的非特异性基因降解和细胞死亡。其优点在于：靶序列的识别过程是高度特异的；触发RNAi所需的有效浓度并不高，并可以在RNAi作用中循环产生；能抵抗核酸酶的消化作用。与相应的单链反义寡核苷酸相比，体外合成siRNA造成的基因抑制效率更高、特异性更好，所需有效浓度大大减低。体外合成的siRNA通常由两条互补的核苷酸单链组成，每条单链为21～25 nts，具有5′磷酸基、3′羟基的结构，每个3′端都具有突出的2个碱基。 多药耐药(multi-drug resistance，MDR)造成是白血病化疗失败主要原因之一。与MDR相关的基因和蛋白有多种，肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein，LRP)是其中之一，它的主要功能是导致细胞内、尤其是细胞核内药物聚集缺陷，因而与多种肿瘤细胞MDR有重要相关性。在白血病细胞中，其表达直接影响着患者化疗的预后，是造成白血病MDR的重要机制之一：在成人急性髓性白血病和儿童白血病中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，致使完全缓解率低，完全缓解所需时间长，易复发；难治性或复发性的白血病细胞LRP的过度表达比未经过化疗或化疗敏感的白血病细胞更常见。由于LRP的耐药机制属非ATP依赖性，通常用于逆转P蛋白MDR的药物如维拉帕米、环孢素等对其没有逆转作用。 因此，采用siRNA介导的RNAi技术，阻断L即在白血病细胞中的过度表达，有望能消除LRP的作用，为逆转其引起的MDR的基因治疗提供理论基础，开创一条新的途径。 本研究内容包括: ①采用丁酸钠(sodi切叮bu如献e，NaB)诱导K562细胞系，建立K562细胞高表达LR卫的细胞模型。K562细胞经2 nnno比NaB处理后，LR卫mRNA水平显着增高;LRP蛋白表达由阴性转为阳性，LR卫阳性细胞百分率为36%;细胞内柔红霉素(山鱿morUbicin，DNR)蓄积减少了68.70%，阿霉素(adri田皿ycin，ADM)细胞核分布减少，细胞浆分布增加。 ②由克隆载体中扩增出LRP全长cDNA，采用粘端连接法，将其克隆入真核表达载体peDNA3的B别盯Hl和Hindlll酶切位点，成功构建了LR卫真核表达载体PcDNA3几Rp。测序结果显示基因序列正确，转染K562细胞能表达LRP基因和蛋白。 ③按照siRNA的设计原则自行设计LR卫特异性siRNA(siRNA-LRP)，Blast同源分析未见其靶InRNA与其它基因m丑NA有完全互补的碱基序列，计算机辅助分析显示该序列适合RNAi作用。 ④采用脂质体转染的方法，用LRP特异性siRNA与LRP真核表达载体pcDNA3/LR卫共同转染K562细胞，检测siRNA一LRP对LRp基因和蛋白表达抑制作用的有效性;用siRNA一LRP对绿色荧光蛋白质粒pEGFP一c1(表达的影响，检测siRNA一LRP对LRP抑制作用的特异性。结果显示siRNA.LR卫能有效且特异性地在转录后水平抑制K562细胞外源LR卫基因的表达。 ⑤采用脂质体转染的方法，用siRNA一LRP转染上述由NaB诱导K562细胞高表达LRP的细胞模型，转染前后结果比较发现，转染后K562细胞中LRPm丑NA被降解，LRP蛋白表达明显抑制，LRP的作用被消除，即细胞内DNR蓄积增加，细胞核内ADM增多，胞浆内ADM减少，恢复到未经处理的K562细胞的水平。 ⑥分别以脂质体包裹siRNA一LRP和空脂质体转染K562细胞，台盼兰染色检测细胞死亡率，MTT法检测细胞增殖情况，结果显示二者的一2一细胞死亡率、细胞增殖无显着差异，表明siRNA一LRP转染K562细胞，既未引起大量细胞非特异性死亡，亦不影响细胞增殖。 上述实验结果表明，NaB能诱导K562细胞LRP mRNA水平和蛋白表达增高，LRP表现出减少药物在细胞内蓄积、改变药物核一浆分布、减少药物在细胞核内分布的作用;自行设计的LRP特异性s1RNA能有效、特异地降解LRP mRNA、抑制LRP蛋白表达，进而消除其作用，为进一步开展逆转LRP介导的白血病细胞MDR的基因治疗奠定了实验基础。(本文来源于《中国人民解放军第一军医大学》期刊2003-05-01）
短干涉论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本刊讯转座因子最近被发现在体细胞及生殖细胞中都是活跃的。最近,一类小RNA,即piRNAs,被发现能从生殖细胞的反转录转座子中表达,并且能调控它们的转录沉寂。在这项研究中,Kawamura等人识别出另一类小RNA,即内生短干涉RNA(endo-siRNA
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
短干涉论文参考文献
[1].孙聪.STAT3特异性短干涉RNA抑制神经胶质瘤细胞增殖的研究[D].吉林大学.2009
[2]..果蝇的内生短干涉RNAs[J].中国医院用药评价与分析.2008
[3].李宁,钱新华,王志远.短干涉RNA特异性抑制白血病细胞中肺耐药相关蛋白基因表达(英文)[J].南方医科大学学报.2006
[4].李宁.短干涉RNA特异性抑制K562细胞肺耐药相关蛋白基因表达的研究[D].中国人民解放军第一军医大学.2003
论文知识图
