粪肠球菌Ace抗原表位预测及重组表位疫苗载体构建与表达

论文摘要

利用生物信息学软件预测抗原表位,然后将筛选出的6个抗原表位基因片段分别与铁蛋白H亚基基因片段连接,并克隆到p ET-32a表达载体中,构建能融合表达Ace抗原表位和铁蛋白H亚基的重组质粒p ET-32aace1、p ET-32a-ace2、p ET-32a-ace3、p ET-32a-ace4、p ET-32a-ace5、p ET-32a-ace6,并经测序验证;优化诱导条件获得原核表达的重组蛋白后,用SDS-PAGE和Western Blot验证其相对分子质量大小和免疫原性;将重组蛋白进行纯化超滤,然后进行透射电镜成像检查。结果显示,本研究成功构建了7种原核表达载体;在IPTG诱导下获得了5种可溶性表达的融合蛋白,且均有较强的免疫原性;重组融合蛋白Ace1-H、Ace3-H、Ace5-H和Ace6-H在透射电镜下观察到了具有与天然铁蛋白类似的特殊中空结构,且其直径与天然铁蛋白纳米笼类似;而带多表位的重组蛋白Ace-H虽然也能自组装成纳米级颗粒,但没有中空核心,其直径也比天然铁蛋白略大。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验菌株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 方法
•     1.3.1 胶原蛋白黏附素Ace抗原表位分析
•     1.3.2 重组质粒构建
•     1.3.3 目的基因双酶切鉴定
•     1.3.4 重组载体的构建与鉴定
•     1.3.5 重组蛋白的诱导表达及纯化
•     1.3.6 Western Blot分析
•     1.3.7 重组融合蛋白的超滤及透射电镜观察
• 2 结果与分析
•   2.1 胶原蛋白黏附素Ace的抗原表位分析结果
•   2.2 目的基因ace双酶切鉴定结果
•   2.3 重组质粒的双酶切鉴定结果
•   2.4 重组质粒测序鉴定
•   2.5 重组蛋白的最佳诱导表达条件及蛋白纯化
•   2.6 重组蛋白Western Blot分析结果
•   2.7 透射电镜观察重组融合蛋白的表征
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭珍珍,和春昊,李滨洲,楚红燕,张晨昕,杨国宇,陈丽颖

关键词: 粪肠球菌,胶原蛋白黏附素,铁蛋白,纳米笼,表位

来源: 河南农业大学学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院,北京化工大学国际教育学院,河南省动物性食品安全重点实验室

基金: 河南省重点科技攻关项目(152102310081)

分类号: S852.61

DOI: 10.16445/j.cnki.1000-2340.2019.03.009

页码: 379-384

总页数: 6

文件大小: 3633K

下载量: 102