导读:本文包含了人胎儿论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胎儿,瘢痕,干细胞,细胞,创面,结缔组织,视网膜。
人胎儿论文文献综述
胡祥上,宫德正,蒋建国,刘雨,蔡世昌[1]（2019）在《不同月龄人胎儿肝脏抗氧化能力初探》一文中研究指出目的探讨不同月龄胎儿肝脏组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和叁磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量的变化趋势。方法选取临床4～10个月月龄的胎儿肝脏组织,分别测定MDA、GSH、和ATP的含量。结果 7月龄的胎儿肝脏组织中MDA含量最低、GSH含量最高、ATP含量最高。结论 7月龄的胎儿肝脏组织的代谢水平较高(较旺盛),抗氧化能力较强。(本文来源于《临床医药文献电子杂志》期刊2019年52期）
宋雨健[2]（2017）在《CTGF在人胎儿皮肤无瘢痕愈合机制中作用的研究》一文中研究指出研究背景:1971年,学者首次发现人胎儿创伤后无瘢痕形成的现象,并提出“无瘢痕愈合”的相关概念,在世界范围内引起了研究无瘢痕愈合机制的热潮,并希望通过对其具体机制的研究,在人体内复制该过程,以避免瘢痕的产生。近年来,结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)这一促纤维化蛋白因子越来越受到重视,其主要由成纤维细胞、肝星状细胞、血管平滑肌细胞等间质细胞合成并分泌,富含半胱氨酸,在机体内呈生理状态量分泌。有研究证实,其在促纤维化方面作用较强,且具有专一性,并被认为是TGF-β_1的直接下游效应因子。但关于CTGF的相关研究目前被局限于其对细胞外基质的作用以及在疾病组织中的表达水平,国内外鲜有CTGF在胚胎皮肤无瘢痕愈合方面的报道,同时CTGF在无瘢痕愈合中的作用机制仍不清楚。研究目的:探讨CTGF在人胎儿皮肤无瘢痕愈合中作用机制,并通过建立人胚胎无瘢痕愈合模型,观察模型中CTGF的表达水平变化,明确其与胚胎无瘢痕愈合的关系。同时观察干预CTGF的表达对人胎儿皮肤无瘢痕愈合过程及相关重要因素的影响,为阐明CTGF在胚胎无瘢痕愈合机制中的作用提供实验依据,为瘢痕疙瘩的防治提供新的思路。研究方法:将20只裸鼠随机分为人胎儿无瘢痕愈合模型组与改良瘢痕动物模型组,每组各10只裸鼠。分别将孕龄20~24w的人水囊引产胎儿皮肤及人全厚皮片移植于裸鼠背部皮下。待移植物存活后,在其上作全层切口,以制造创面。分别在两组裸鼠创面产生前、创面产生后第1、3、7、14天以及第120d对移植物进行取材。分别使用苦味酸-天狼星红偏振光法、图像分析技术、免疫组化染色SABC法检测样本组织纤维化程度和CTGF蛋白质表达水平。比较2组透明质酸(HA)、以及PRX-2、HOXB13、HOX2.2以及HOX2.3等同源异形框基因的差异。在此基础上,体外培养人胎儿无瘢痕愈合组织成纤维细胞,随机分为CTGF ASODN治疗组、DOSPER脂质体对照组和空白对照组。其中CTGF ASODN治疗组(AT组)使用特异性CTGF反义寡核苷酸进行全硫代修饰后转染基因;DOSPER脂质体对照组(LC组)使用无CTGF ASODN的DOSPER脂质体进行处理;空白对照组(C组)则不进行任何处理。使用荧光显微镜观察3组细胞中CTGF ASODN的时相分布特点,并通过H3-脯氨酸掺入法对3组成纤维细胞的胶原合成情况进行检测,通过噻唑蓝(MTT)比色实验对其增殖活力进行检测,对其CTGF m RNA的表达水平以及CTGF蛋白质的表达水平分别进行RT-PCR检测和免疫细胞化学染色SABC法检测。以明确CTGF在人胎儿皮肤无瘢痕愈合机制中的作用。结果:1.人胎儿无瘢痕愈合模型组与改良瘢痕动物模型组中所有大鼠均存活。前者创面制造后120d可见其皮片无皱缩,表面红润,有毛发生长,体积未见缩小,镜下观察移植物则与周围正常皮肤无显着差异。后者创面制造后120d可见其瘢痕部分变软,伴有不同程度的挛缩,并显着高于皮面,镜下观察到真皮层显着增厚,且真皮乳头层与网状层间界限不清,胶原纤维致密,紊乱的漩涡或结节状排列,其间微血管与细胞核分裂细胞比例增加,与成人增生性瘢痕组织无显着差异。2.人胎儿无瘢痕愈合模型组III型胶原纤维分布广泛,I型胶原纤维数量较少,CTGF蛋白质含量少,阳性颗粒分布密度较低,HA含量显着及其受体CD44表达水平显着增高,发育生物学相关同源异形框基因(PRX-2、HOXB13、HOX2.2以及HOX2.3)在表皮组织和真皮组织均有阳性表达。改良瘢痕动物模型组I型胶原纤维广泛分布于真皮层,CTGF蛋白质含量多,阳性颗粒分布密度高,HA含量显着及其受体CD44表达水平低。3.CTGF ASODN转染HSF细胞后首先进入细胞浆,然后转移至细胞核,最后消失。且转染后HSF细胞增殖能力和H~3脯氨酸掺入率均降低,CTGF蛋白质表达水平与mRNA表达均下调。结论:1.将孕龄20~24w人胎儿背部皮肤移植至裸鼠背部皮下后,皮肤可以成活,且继续维持人胎儿皮肤生长发育的基本特性。同时,在移植物制造创面后,进行组织学观察,至愈合后第120d,创面未产生瘢痕。该模型可作为人胎儿皮肤无瘢痕愈合相关研究的理想模型。2.人胎儿皮肤无瘢痕愈合过程中,组织内CTGF表达水平低于成人皮肤瘢痕愈合,提示在瘢痕愈合的过程中,CTGF m RNA转录、翻译水平增高,其产物能够刺激瘢痕组织中的Fb增殖和ECM(以胶原为主)沉积,直至组织广泛纤维化并产生瘢痕增生。3.人胎儿皮肤无瘢痕愈合组织内HA及其受体CD44表达水平更高,两者结合形成HA-CD44复合体并触发Fb合成HA、改变细胞骨架等行为,在胎儿皮肤无瘢痕愈合过程中发挥重要作用。4.发育生物学相关同源异形框基因(PRX-2、HOXB13、HOX2.2以及HOX2.3)在表皮组织和真皮组织均有阳性表达,而成人皮肤瘢痕愈合过程中表皮组织仅有PRX-2、HOXB13表达,真皮组织仅有HOXB13表达。其表达差异与组织创伤后愈合的不同过程有关。5.CTGF在瘢痕愈合中能促进胶原合成与Fb增殖,CTGF ASODN能显着降低HSF中的CTGF m RNA水平,抑制CTGF蛋白质表达,进而减少HSF细胞的胶原合成。因此,CTGF ASODN可通过抑制CTGF表达成为治疗瘢痕愈合的有效方法。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2017-11-01）
刘婷,马晓娜,杨婷婷,马海滨,金毅然[3]（2017）在《人胎儿侧胎盘间充质干细胞对急性肺损伤患者的炎症调节作用》一文中研究指出目的:探讨人胎儿侧胎盘间充质干细胞对急性肺损伤患者的炎症调节作用。方法:采用酶消化法从人胎盘间充质干细胞中分离出胎儿侧胎盘间充质干细胞,与急性肺损伤患者的外周血淋巴细胞共培养,MTT方法确定细胞增殖,ELISA方法测定炎症因子的变化,流式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化。结果:人胎儿侧胎盘间充质干细胞能够抑制急性肺损伤患者淋巴细胞的增殖(t=3.154,P=0.008),下调γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的分泌(t=162.94,P=0.000),上调白细胞介素(interleukin,IL)-10的分泌(t=52.848,P=0.000),并下调CD4+与CD8+T淋巴细胞的比例(分别为t=15.564、P=0.004,t=7.506、P=0.017)。结论:人胎儿侧胎盘间充质干细胞能够下调急性肺损伤患者的炎症反应。(本文来源于《包头医学院学报》期刊2017年10期）
焦亚[4]（2017）在《人胎儿真皮间充质干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学活性的影响》一文中研究指出研究背景瘢痕疙瘩是一种由成纤维细胞异常增殖和胶原过度沉积导致的皮肤纤维化疾病。由于该疾病形成机制复杂,目前研究尚未能完全揭示其发病原因和生长机制,临床上也未出现效果理想的治疗方案,所以新的治疗方案亟待出现。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)因其抗纤维化作用已在肺纤维化、心肌梗塞等纤维化疾病治疗方面崭露头角,而人胎儿真皮间充质干细胞(Fetal dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)被认为在早期胎儿无瘢痕愈合中起到决定性作用的细胞,但是,该细胞是否可应用于瘢痕疙瘩的治疗方面还未见文献报道。目的通过研究 FDMSCs 条件培养基(FDMSCs conditioned medium,F-CM)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblasts,KFs)生物学活性的影响,探索FDMSCs相关疗法治疗瘢痕疙瘩的可行性。方法分别提取并鉴定成人真皮成纤维细胞(Adult dermal fibroblasts,ADFs)、FDMSCs和KFs,并应用ADFs和FDMSCs制备ADFs条件培养基(ADFs conditioned medium,A-CM)和 F-CM。KFs 分别用空白对照培养基(SFM)、A-CM和F-CM培养,培养48h后对各组KFs进行一系列实验分析,包括细胞形态观察(倒置显微镜下)、细胞数量变化(MTT比色实验)、细胞增殖率和凋亡率改变(BrdU细胞增殖实验和TUNEL细胞凋亡实验)、细胞共培养干预实验和条件培养基干预实验对比、凋亡相关基因和蛋白的表达变化(qPCR和Western blot)、细胞凋亡时期检测(Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测)结果通过一系列实验,结果显示相对于对照组和A-CM组,F-CM可以诱导KFs出现凋亡形态,并可减少活细胞的数目。但KFs增殖率没有明显改变但凋亡率明显增加,这说明细胞数目的减少主要得益于细胞凋亡的增多。FDMSCs与KFs共培养实验的结果同培养基干预KFs实验结果没有明显区别。进一步实验表明F-CM可促进细胞促凋亡蛋白BCL-2的表达并抑制细胞抑凋亡蛋白BAX的表达,导致BCL-2/BAX升高而促进细胞凋亡。Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡实验结果表明细胞凋亡时期主要为晚期凋亡。结论(1)FDMSCs可成功从早期人胎儿皮肤中提取并进行体外培养、传代,并能维持稳定的生物学特性。(2)F-CM干预KFs实验结果与细胞共培养干预实验结果一致,避免了 FDMSCs直接应用于机体的潜在风险。(3)F-CM可以通过抑制细胞抑凋亡蛋白BCL-2的表达并促进细胞促凋亡蛋白BAX的表达来促进细胞凋亡。(4)F-CM所诱导的KFs凋亡时期主要为晚期凋亡。(本文来源于《山东大学》期刊2017-04-15）
宋雨健,李世荣,刘剑毅[5]（2016）在《CTGF,PCNA,IL-1α及α-SMA在人胎儿皮肤无瘢痕愈合中的作用》一文中研究指出目的动态观察结缔组织生长因子(CTGF),增殖细胞核抗原(PCNA),IL-1α以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在人胎儿皮肤无瘢痕愈合过程中的表达及其与损伤时间的关系。方法将胎儿皮肤移植于裸鼠皮下,建立人胎儿皮肤无瘢痕愈合模型。并随机分为5组:未创伤组、创伤后1d组、创伤后2d组、创伤后3d组、创伤后7d组。通过免疫组织化学法检测创面中PCNA和α-SMA的表达变化,蛋白印迹法观察创面中CTGF的表达变化。通过酶联免疫吸附试验检测血浆IL-1α含量动态变化。结果创伤后,创面PCNA与α-SMA表达不断上调,创伤后7d开始下调。未创伤组、创伤后1d组、创伤后2d组、创伤后7d组CTGF蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),都呈现低表达;创伤后3d组CTGF蛋白表达上调,高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。创伤后1d到3d血浆IL-1α含量不断升高,创伤后7d急剧下降。结论 PCNA,α-SMA与IL-1α高表达与CTGF的低表达和人胎儿皮肤创伤后无瘢痕愈合相关。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2016年05期）
王永霞,马娜,钟兴明,崔蓉,王小兰[6]（2015）在《Caspase-3、TNF-α、bcl-2、bax在人胎儿卵巢中的表达》一文中研究指出目的探讨人胎儿卵泡的发育形成过程中卵细胞凋亡及其调控机制。方法收集2013年1~12月广东省计划生育科学技术研究所妊娠24~32周引产的女性胎儿卵巢组织18例,其中24~27+6周胎儿卵巢8例,28~32周胎儿卵巢10例。采用免疫组织化学染色法观察胎儿卵巢卵泡发育及形成过程中凋亡因子Caspase-3、TNF-α、bcl-2、bax的表达情况。结果 Caspase-3表达在孕中期及孕晚期表达均为强阳性,TNF-α在卵母细胞中均表达,胎儿卵巢内的颗粒细胞及其他间质组织细胞未见阳性表达。凋亡抑制因子bcl-2的表达在孕中期及孕晚期均为阴性。促凋亡因子Bax在卵母细胞及卵巢颗粒细胞内均为阳性表达。结论胎儿卵巢发育过程中,原始卵母细胞不断发生凋亡,由四种凋亡因子同时共同参与,而bcl-2和bax可能通过活化Caspase-3引起少量颗粒细胞凋亡。(本文来源于《中国医药导报》期刊2015年31期）
计江东[7]（2015）在《人胎儿视网膜色素上皮细胞移植治疗视网膜变性疾病的实验研究》一文中研究指出研究背景:视网膜变性是一类难治性疾病,其中较常见的包括年龄相关性黄斑变性(age related degeneration,AMD)、视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)等。氧化应激,炎症,代谢失调,遗传因素等造成视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)的功能障碍继而导致视网膜感光细胞和脉络膜的变性和萎缩,是这些视网膜变性类疾病的发生的原因。因视网膜属于终末神经组织,神经细胞再生困难,此类疾病的治疗非常棘手。细胞移植是治疗RPE细胞变性的具有前景的方法。目前研究较多的用于视网膜变性疾病治疗的细胞中,胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)因其全能分化特性(可分化为包括RPE在内的体内所有细胞类型)和无限增殖能力,被认为是可用于视网膜变性类疾病治疗的重要种子细胞。然而,ESCs来源的治疗细胞的免疫排斥和成瘤风险、以及不可控增殖、伦理学等问题限制了 ESCs的临床使用。iPSCs具有与ESCs类似的形态和分化能力,来源广泛,无免疫排斥且不存在伦理问题,但细胞制备成本过高,程序复杂,分化效率还不高,原细胞的基因缺陷仍然存在,诱导中的基因突变问题尚未解决,用于人体的临床实验已暂时中止。与ESCs和iPSCs相比,胎儿RPE具有分离培养相对简单,在体外具有较强的增殖能力,免疫原性低等特点,在治疗中枢神经系统疾病的细胞移植中,胎儿细胞已被证明效果良好,但在视网膜变性里研究较少。动物实验对任何疾病研究与治疗都是极其重要的。尽管视网膜变性的鼠模型能够用于基本的生理及视觉相关基因研究,但鼠没有黄斑结构,与人种属差异较大,而非理想的视网膜变性动物模型。灵长类动物具有与人相似的黄斑结构,但一直没有一种合适的视网膜变性的动物模型,制约了该类疾病的研究。本研究首次实验通过颈动脉注射碘酸钠制作食蟹猴视网膜变性的动物模型,并通过视网膜下移植胎儿来源的RPE细胞对其进行治疗,观察其存活情况及可能的疗效。方法:1.选用8只健康雄性食蟹猴,随机分为l0mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg四组,每组各两只。按分组,通过单侧颈动脉注射根据体重计算出的相应剂量碘酸钠造模,对侧眼为对照。通过ERG,眼底照相,FFA,OCT观察造模后的视网膜结构和功能的变化,筛选出合适的造模剂量。2.自流产胎儿眼球获取原代视网膜色素上皮细胞,分离,培养,观察细胞形态,通过流式细胞仪和免疫荧光染色对其进行鉴定;通过内路法在显微镜直视下将人胎儿视网膜色素上皮细胞移植到视网膜变性食蟹猴模型的神经视网膜下,通过ERG,眼底照相,FFA,OCT观察造模后的视网膜结构和功能的变化,通过组织切片观察色素上皮的存活状况。结果:1.各剂量组食蟹猴造模后1周起眼底照片和FFA显示视网膜色素上皮发生萎缩,脱色素改变,逐渐加重,6周后各组可看到不同程度的色素上皮萎缩,呈剂量依赖性,其中20mg/kg组及眼底彩照,OCT及FFA显示极部色素斑驳,上皮萎缩明显。各剂量组视网膜电图a,b波在造模后首次检查时下降到最低,在造模后6周内都缓慢回升,l0mg/kg组和15mg/kg组恢复近造模前水平。20mg/kg组缓慢上升后维持在较低水平。25mg/kg组ERG明显下降,不能量化检查。2.胎儿RPE细胞分离后能在体外培养并能监测到分子标志物ZO-1、RPE65的表达。移植后立即进行OCT检查可以见到视网膜的泡样隆起,术后四周起在眼底照片上可见团块状色素增殖改变,OCT示色素带局部粗糙增厚,ERG a,b波有少许上升,但与对照相比差异没有显着性。组织切片检查可见增殖的色素细胞。结论:1.颈动脉注射20mg/kg碘酸钠,可以造成食蟹猴视网膜色素上皮萎缩和视网膜功能减退,是一个安全,可控的视网膜变性动物模型的制作方法。2.显微镜直视下免玻切内路法视网膜色素上皮细胞移植是一种简单,成功率高的细胞移植方法。3.胎儿RPE细胞能在食蟹猴神经视网膜下存活,未见明显的排斥反应,但未观察到视网膜功能的明显改善。(本文来源于《南京医科大学》期刊2015-11-01）
李耀南[8]（2015）在《外源性免疫细胞干预人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面修复机制的初步研究》一文中研究指出目的：(1)创建人妊娠中期胎儿皮肤裸鼠移植模型及相应深Ⅱ°烫伤创面修复模型,并观察其愈合过程。(2)观察并比较外源性免疫细胞干预下人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的愈合过程的变化。(3)结合两种创面愈合过程中MMP-9和TIMP-1的表达变化规律探讨妊娠中期人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的愈合机制及外源性免疫细胞干预人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的作用机制。方法：将妊娠中期人胎儿皮肤埋植于裸鼠背部皮瓣下方。温养2周后,利用灭菌的恒温电烫仪(烫头温度为80℃)接触移植成活的人胎儿皮肤,持续5秒钟,以此创建人胎儿皮肤深Ⅱ°°烫伤创面,而后在部分创面下注射健康成人外周血单个核细胞(hPBMCs),观察并比较人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面及hPBMCs干预下人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面的愈合过程。采用免疫组织化学染色法观察并比较两种创面愈合过程中MMP-9和TIMP-1的表达规律。结果：(1)人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面修复完成时间大约为2周。在修复过程早期无明显急性炎症反应,修复细胞在烫伤后第7天开始大量增殖迁移,烫伤后第10天可见增殖的残存附件上皮细胞已迁移至创缘,烫伤后第14天可见上皮化已完成,并且无瘢痕组织形成；hPBMCs干预下人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤创面在烫伤后3周仍未完成修复过程,在修复过程早期即可见炎性细胞向创面浸润,烫伤后第7天可见创面大量炎性细胞聚集,烫伤后第14天创周炎症反应减弱,创面内增殖的Fb密集,新生胶原排列杂乱,残存附件上皮细胞已向创缘迁移。烫伤后第21天创面仍未完成上皮化修复过程,并且原缺损部位可见明显瘢痕组织形成。(2)人胎儿皮肤深Ⅱ°烫伤后第3天MMP-9和TIMP-1均保持着低阳性水平表达。烫伤后第7天MMP-9在残存皮肤附件上皮细胞胞浆中表达水平升高并持续至烫伤后第10天,而后开始降低直至烫伤后第14天创面修复完成。TIMP-1表达与MMP-9不同,阳性颗粒在烫伤后第7天才开始出现,并一直升高,直至创面修复完成。在烫伤后第7天,阳性颗粒主要表达于残存皮肤附件周围Fb中。烫伤后第10天,在创周的Fb胞浆中TIMP-1开始出现广泛阳性表达。烫伤后14天,TIMP-1在增殖的皮肤附件上皮细胞及新生基底膜周围Fb胞浆中均可见广泛大量阳性表达；hPBMCs干预下烫伤后第3天MMP-9主要表达于烫伤创面皮下脂肪层,创面亦均出现阳性表达。烫伤后第7天皮下脂肪层中阳性表达量降低,创周表达量达到峰值,随后开始逐渐降低。残存皮肤附件上皮细胞胞浆中阳性蛋白表达量从烫伤后第7天开始出现且持续升高直至试验观察结束。TIMP-1表达规律与之相差较大,阳性水平从烫伤后第3天起即在创面有散在表达。烫伤后第7天,TIMP-1表达出现峰值,广泛表达在新生毛细血管内皮细胞、创面及创缘中增殖的Fb胞浆中,而后表达水平逐渐降低,直至消失。结论：妊娠中期人胎儿皮肤深Ⅱ °烫伤创面在宫外环境下可实现无瘢痕愈合。而在hPBMCs干预下,无瘢痕愈合所依赖的低炎症反应环境被破坏,MMP-9及TIMP-1的动态平衡被打破,创伤修复模式转为炎症性瘢痕愈合。(本文来源于《山东大学》期刊2015-05-11）
田婷,程赛,柳琦,张汝芝[9]（2015）在《体外Oct4单因子转染诱导人胎儿头皮细胞克隆的作用》一文中研究指出目的探讨Oct4单因子转染人胎儿头皮来源的原代混杂细胞和第3代黑素细胞后,形成多能干细胞的可能性。方法培养人胎儿头皮来源的原代混杂细胞和第3代黑素细胞,应用慢病毒介导Oct4单因子诱导这些细胞。所生成的克隆采用碱性磷酸酶染色及荧光显微镜观察。结果 Oct4单因子诱导的第8和第12天,被转染的原代细胞和第3代黑素细胞出现克隆。转染后第18天,人工挑取的克隆接种于基质胶包被板,克隆很快贴壁生长,荧光显微镜下显现出绿色荧光,碱性磷酸酶染色呈紫色。结论 Oct4单因子可以诱导人胎儿头皮来源的混杂细胞及第3代黑素细胞产生克隆,但产生效率很低。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2015年03期）
李川,姜笃银[10]（2014）在《人胎儿皮肤浅Ⅱ°烫伤创面愈合及MMP-2、7表达特征》一文中研究指出目的促进创面愈合和预防瘢痕形成,以及诱导皮肤附件再生和体外重建汗腺等是目前创面治疗的难题。胚胎皮肤的"无瘢痕愈合"机制是目前解决这一难题的最主要的线索。我们以人胎儿皮肤(rluman fetal skin,hFS)裸鼠移植模型为基础,进行hFSⅡ°烫伤后观察创面愈合的特征并探讨其与MMP-2、7表达之间的关系。(本文来源于《中华医学会急诊医学分会第17次全国急诊医学学术年会论文集》期刊2014-08-07）
人胎儿论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景:1971年,学者首次发现人胎儿创伤后无瘢痕形成的现象,并提出“无瘢痕愈合”的相关概念,在世界范围内引起了研究无瘢痕愈合机制的热潮,并希望通过对其具体机制的研究,在人体内复制该过程,以避免瘢痕的产生。近年来,结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)这一促纤维化蛋白因子越来越受到重视,其主要由成纤维细胞、肝星状细胞、血管平滑肌细胞等间质细胞合成并分泌,富含半胱氨酸,在机体内呈生理状态量分泌。有研究证实,其在促纤维化方面作用较强,且具有专一性,并被认为是TGF-β_1的直接下游效应因子。但关于CTGF的相关研究目前被局限于其对细胞外基质的作用以及在疾病组织中的表达水平,国内外鲜有CTGF在胚胎皮肤无瘢痕愈合方面的报道,同时CTGF在无瘢痕愈合中的作用机制仍不清楚。研究目的:探讨CTGF在人胎儿皮肤无瘢痕愈合中作用机制,并通过建立人胚胎无瘢痕愈合模型,观察模型中CTGF的表达水平变化,明确其与胚胎无瘢痕愈合的关系。同时观察干预CTGF的表达对人胎儿皮肤无瘢痕愈合过程及相关重要因素的影响,为阐明CTGF在胚胎无瘢痕愈合机制中的作用提供实验依据,为瘢痕疙瘩的防治提供新的思路。研究方法:将20只裸鼠随机分为人胎儿无瘢痕愈合模型组与改良瘢痕动物模型组,每组各10只裸鼠。分别将孕龄20~24w的人水囊引产胎儿皮肤及人全厚皮片移植于裸鼠背部皮下。待移植物存活后,在其上作全层切口,以制造创面。分别在两组裸鼠创面产生前、创面产生后第1、3、7、14天以及第120d对移植物进行取材。分别使用苦味酸-天狼星红偏振光法、图像分析技术、免疫组化染色SABC法检测样本组织纤维化程度和CTGF蛋白质表达水平。比较2组透明质酸(HA)、以及PRX-2、HOXB13、HOX2.2以及HOX2.3等同源异形框基因的差异。在此基础上,体外培养人胎儿无瘢痕愈合组织成纤维细胞,随机分为CTGF ASODN治疗组、DOSPER脂质体对照组和空白对照组。其中CTGF ASODN治疗组(AT组)使用特异性CTGF反义寡核苷酸进行全硫代修饰后转染基因;DOSPER脂质体对照组(LC组)使用无CTGF ASODN的DOSPER脂质体进行处理;空白对照组(C组)则不进行任何处理。使用荧光显微镜观察3组细胞中CTGF ASODN的时相分布特点,并通过H3-脯氨酸掺入法对3组成纤维细胞的胶原合成情况进行检测,通过噻唑蓝(MTT)比色实验对其增殖活力进行检测,对其CTGF m RNA的表达水平以及CTGF蛋白质的表达水平分别进行RT-PCR检测和免疫细胞化学染色SABC法检测。以明确CTGF在人胎儿皮肤无瘢痕愈合机制中的作用。结果:1.人胎儿无瘢痕愈合模型组与改良瘢痕动物模型组中所有大鼠均存活。前者创面制造后120d可见其皮片无皱缩,表面红润,有毛发生长,体积未见缩小,镜下观察移植物则与周围正常皮肤无显着差异。后者创面制造后120d可见其瘢痕部分变软,伴有不同程度的挛缩,并显着高于皮面,镜下观察到真皮层显着增厚,且真皮乳头层与网状层间界限不清,胶原纤维致密,紊乱的漩涡或结节状排列,其间微血管与细胞核分裂细胞比例增加,与成人增生性瘢痕组织无显着差异。2.人胎儿无瘢痕愈合模型组III型胶原纤维分布广泛,I型胶原纤维数量较少,CTGF蛋白质含量少,阳性颗粒分布密度较低,HA含量显着及其受体CD44表达水平显着增高,发育生物学相关同源异形框基因(PRX-2、HOXB13、HOX2.2以及HOX2.3)在表皮组织和真皮组织均有阳性表达。改良瘢痕动物模型组I型胶原纤维广泛分布于真皮层,CTGF蛋白质含量多,阳性颗粒分布密度高,HA含量显着及其受体CD44表达水平低。3.CTGF ASODN转染HSF细胞后首先进入细胞浆,然后转移至细胞核,最后消失。且转染后HSF细胞增殖能力和H~3脯氨酸掺入率均降低,CTGF蛋白质表达水平与mRNA表达均下调。结论:1.将孕龄20~24w人胎儿背部皮肤移植至裸鼠背部皮下后,皮肤可以成活,且继续维持人胎儿皮肤生长发育的基本特性。同时,在移植物制造创面后,进行组织学观察,至愈合后第120d,创面未产生瘢痕。该模型可作为人胎儿皮肤无瘢痕愈合相关研究的理想模型。2.人胎儿皮肤无瘢痕愈合过程中,组织内CTGF表达水平低于成人皮肤瘢痕愈合,提示在瘢痕愈合的过程中,CTGF m RNA转录、翻译水平增高,其产物能够刺激瘢痕组织中的Fb增殖和ECM(以胶原为主)沉积,直至组织广泛纤维化并产生瘢痕增生。3.人胎儿皮肤无瘢痕愈合组织内HA及其受体CD44表达水平更高,两者结合形成HA-CD44复合体并触发Fb合成HA、改变细胞骨架等行为,在胎儿皮肤无瘢痕愈合过程中发挥重要作用。4.发育生物学相关同源异形框基因(PRX-2、HOXB13、HOX2.2以及HOX2.3)在表皮组织和真皮组织均有阳性表达,而成人皮肤瘢痕愈合过程中表皮组织仅有PRX-2、HOXB13表达,真皮组织仅有HOXB13表达。其表达差异与组织创伤后愈合的不同过程有关。5.CTGF在瘢痕愈合中能促进胶原合成与Fb增殖,CTGF ASODN能显着降低HSF中的CTGF m RNA水平,抑制CTGF蛋白质表达,进而减少HSF细胞的胶原合成。因此,CTGF ASODN可通过抑制CTGF表达成为治疗瘢痕愈合的有效方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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