耐酸与酸敏酒酒球菌环丙烷脂肪酸合酶基因的差异

论文摘要

目的:研究筛选得到的野生耐酸与酸敏酒酒球菌环丙烷脂肪酸基因（cfa）的差异,探索酒酒球菌环丙烷脂肪酸基因与酒酒球菌耐酸性的相关性。方法:35株野生酒酒球菌中,利用酸胁迫环境筛选耐酸能力最强的菌株,并与野生酸敏菌SX-1b及实验室离子注入诱变的耐酸、酸敏突变菌a3、b2共同进行环丙烷脂肪酸基因cfa的克隆、测序和比对;选择存在氨基酸突变的野生耐酸酒酒球菌及野生酸敏菌株的cfa基因在植物乳杆菌ATCC33222中进行外源表达,从而验证耐酸菌株cfa基因与耐酸能力的相关性。结果:（1）筛选出野生型耐酸酒酒球菌CS-7b和ME-5b,确定其耐酸生长极限为p H 2.6;（2）对野生菌与诱变菌的cfa基因进行测序比对发现,耐酸菌株的野生型和诱变型的序列相同,较酒酒球菌PSU-1发生3处碱基突变,而酸敏菌野生型、诱变型的序列则与酒酒球菌PSU-1一致;（3）将SX-1b与CS-7b的cfa基因在植物乳杆菌中表达,构建重组载体pMG36ecfa1和pMG36e-cfa2,并得到对应重组菌L1和L2;（4）在pH 3.6培养基中培养,重组菌L1和L2的生长情况明显优于含空载体的植物乳杆菌L0,且L2的生长优于L1。而在p H 3.4培养基中培养,L0没有生长迹象,只有重组菌L1和L2正常生长,cfa基因的导入突破了植物乳杆菌宿主菌的生长极限。结论:酒酒球菌cfa基因及基因间存在的稳定差异与菌株耐酸表型具有一定相关性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与质粒
•   1.2 试验材料与设备
•   1.3 试验方法
•     1.3.1 酒酒球菌的筛选
•     1.3.2 目的基因序列的PCR扩增及序列比对
•     1.3.3 酒酒球菌cfa基因的外源表达
•     1.3.4 植物乳杆菌的耐酸性测定
• 2 结果与分析
•   2.1 酒酒球菌的筛选生长曲线
•     2.1.1 酒酒球菌菌株初筛
•     2.1.2 酒酒球菌菌株的复筛
•   2.2 环丙烷脂肪酸合酶基因的PCR和序列分析
•   2.3 重组植物乳杆菌表达载体的构建
•   2.4 重组植物乳杆菌的耐酸性变化
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田雨,陈其玲,刘树文,何玲

关键词: 酒酒球菌,耐酸性,环丙烷脂肪酸基因,外源表达

来源: 中国食品学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心,西北农林科技大学合阳葡萄试验示范站,西北农林科技大学园艺学院

基金: 宁夏回族自治区科技重大专项(2016BZ0603),“十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0400504-01),国家现代农业(葡萄)产业技术体系建设专项(CARS-29-jg-03)

分类号: TS262.6

DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.07.009

页码: 64-71

总页数: 8

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