广西省玉林市博白县皮肤病防治院广西玉林537600
摘要:淋病是由淋球菌所致的性传播疾病,流行范围广,发病率高,是危害人类健康的重要细菌性传染病之一。近年来,随着免疫学技术和基因工程技术在微生物学领域的广泛应用,有关淋病的实验诊断技术也有了很大发展,本文进行简要综述。
关键词：淋病：实验室：诊断
1前言
淋病是一种常见的性传播疾病(STD)，我国各性病监测点去年上报的新发病例中，淋病占所有STD之首。因此,快速而准确的诊断对及时治疗、避免并发症和控制淋病传播十分重要。临床上通常根据革兰染色及培养诊断淋病。革兰染色快速、简便,但在女性患者中敏感性较低,淋球菌分离培养受到菌株的营养要求、标本的运送及培养时间等因素的限制。人们一直在努力寻找更敏感、特异、简便、快速和价廉的常规诊断方法。90年代国外对琳病实验室诊断的研究有很大进展，多种试剂盒相继问世，如多形核白细胞测定、免夜学分析、核酸杂交、核酸扩增等，使检测灵敏性不断提高。
2直接涂片染色法
淋球菌感染人后,主要侵入泌尿、生殖道粘膜,孕妇患有淋病时,婴儿出生时可患淋病性结膜炎。急性淋病时,淋球菌大多存在干嗜中性粒细胞内,因此取脓性分泌物涂片革兰氏染色镜检,在嗜中性粒细胞内发现革兰氏阴性双球菌即有诊断意义。但阳性检出率受主观经验因素影响,高者可达95%,低者少至50%。慢性淋病患者,分泌物中的细菌数较少,而且多存在细胞外,阳性检出率更低。女性生殖道正常菌丛中的不动杆菌的形态与淋球菌相似,易造成假阳性结果。因此,直接涂片染色法虽简单、快速,但有一定的局限性。
3培养法
从分泌物中分离培养淋球菌是淋病实验室诊断的传统方法。淋球菌为需氧菌,初次培养需要5%－10%CO2条件,对外界寒冷、干燥以及消毒剂、防腐剂和润滑剂等因素敏感,易造成假阴性结果。淋球菌营养要求高,在巧克力培养基上能生长,但标本中的杂菌对淋球菌的检出有干扰。应用选择性培养基分离淋球菌可抑制杂菌生长,但淋球菌的生长有时也会受到影响而生长缓慢。有些菌株对万古霉素敏感。目前,国外常用的几种选择性培养基所需的添加剂,如血红蛋白、万古霉素、粘菌素、制霉菌素等价格昂贵,国内不易得到。现在国内有关淋球菌选择性培养基的研究也有报告,可用于淋球菌分离培养。分离培养检查除选择性培养外,还需要对分离的菌株进行：
(l)初步鉴定试验:菌落形态、菌体形态及染色特性,以及氧化酶试验。
(2)确证试验:糖利用试验。
应用培养检查法,样品采集及其保存方法,以及培养物的纯度都会影响结果的正确性。常规的培养检查全过程一般需要3－5天。
4免疫学方法
4.1抗淋球菌抗体的检测：
淋球菌不产生永久的免疫力,但淋病患者局部的免疫反应较活跃。用间接免疫荧光法和ELISA方法可检测分泌物中抗淋球抗体。
4.2淋球菌抗原的检测：
（1）酶免疫法:酶免疫法是一种快速诊断淋病的方法。通过酶联的抗淋球菌抗体与淋球菌抗原相结合,间接地检测淋球菌的抗原。Hosasin等用此法对男性和女性患者的分泌物进行检测,与培养法比较,敏感性均为10%;特异性分别为96.8%和9%。本文认为应用酶免疫法可克服革兰氏染色法不敏感,培养法费时、费事的缺点,但试验成本费高。
（2）免疫荧光法:免疫荧光法是鉴定淋球菌的方法之一。Ison等用直接免疫荧光试剂直接检测患者分泌物标本,试验敏感性为84.4%，特异性为100%。叶顺章等报告用淋球菌标准参考菌株免疫家兔获得高效价抗淋球菌多克隆抗体,用荧光素标记后,用于淋球菌检测,含有不同外膜蛋白的淋球菌菌株均呈阳性结果。免疫荧光法敏感性和特异性较好,但需要荧光显微镜,一般单位不易开展。
（3）单克隆抗体法:Janda等应用抗淋球菌单克隆抗体检测淋球菌,特异性高,与其他奈瑟氏菌无明显交叉反应,30分钟后判断结果。Lawotn等应用淋球菌单克隆抗体协同凝集试验鉴定淋球菌,特异性可达10%,敏感性为9.7%,数分钟得结果,是一种既敏感又特异,可快速鉴定淋球菌的方法。
5核酸杂交技术
核酸杂交技术已广泛用于确定感染性疾病的病原体。80年代初期Totten等率先应用同位素标记的淋球菌隐蔽性质粒探针检测临床标本中的淋球菌，随后人们研制出多种检测淋球菌的基因探针，如耐药质粒DNA探针、染色体DNA探针及:RNA探针。目前检测临床标本中淋球菌最常用的商品化探针试剂盒是PACE2系统(Gen-Probe,SanDiego,CA)，该系统采用与淋球菌rRNA互补、叮咤酷标记的单链DNA探针，与靶rRNA在液相杂交，以化学发光仪检测。根据标本相对光单位(RLU)与阴性对照平均光单位的差值计算结果。检测时间为2-4小时。Panke等，用此探针试剂盒检测了469份有症状与无症状女性患者的宫颈标本，结果表明DNA探针试验的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值基本上与培养相同，二者符合率为98.9%。研究表明PACE2系统稳定可靠，可检测经邮寄运送到实验室的标本。标本在运送缓冲液中稳定达一尽之久，检测限度大约为lml运送缓冲液中4000个病原体。另外，应用淋球菌及衣原体特异的PACE2系统可检测一份标本中的任一种病原体，确定合并感染，这对患者及实验室无疑均有利。虽然目前尚不主张用基因探针险测非生殖器部位的淋球菌感染，但Vlaspold-er及Lewis的研究表明，PACE2系统检测咽部和(或)直肠标本淋球菌具有良好的敏感性（87.5%－100%）与特异性(99.4%－99.7%)，为筛查非生殖器部位的淋球菌感染提供了可选择的方法。核酸杂交技术亦为淋球菌初代分离株的鉴定提供了快速、准确、客观的工具。
6核酸扩增技术
核酸扩增技术的问世使临床实验室检测感染性病原体的敏感性显著提高，每例患者样本中可检测到一个基因拷贝。聚合酶链反应（PCR)和连接酶链反应(LCR)是核酸扩增中最常用的方法。Ho等根据淋球菌隐蔽性质粒cppB基因序列，设计了一对20寡核昔酸引物，用PCR方法检测52份临床标本。34份标本培养与PCR均阳性，2份标本仅PCR阳性，经ELISA方法(Gonozyme)检测这2份标本淋球菌抗原阳性。与培养相比，PCR敏感性100%，特异性88.9%，阳性预测值94%，阴性预测值100%。应用淋球菌与衣原体特异的二种引物，单管同步PCR扩增系统可同时检测这二种病原体，且敏感性高，能比培养法检出更多的淋球菌及衣原体感染。Liebling等的研究表明，应用PCR可检测培养阴性滑膜液中的淋球菌，有助于证实淋菌性关节炎的临床诊断，以与急性Reiter综合征鉴别。
LCR是继PCR之后建立起来的快速DNA扩增方法。与PCR不同的是，LCR采用两对寡核昔酸探针，每对寡核昔酸探针与变性正负靶链杂交时处理相邻的位置，两者间形成一个缺口，只有当它们与靶DNA碱基配对且位置均正确时，DNA连接酶才将其连接起来。Birkenmeye:等最早将LCR技术应用于检测淋球菌。他们根据淋球菌多拷贝不透明蛋白基因和菌毛基因设计出三套LCR探针，在3ngDNA浓度下，这些探针对淋球菌显示高度特异性。用LCR对10份临床标本的检测结果表明，与培养相比，LCR敏感性为100%(8/8)，特异性为97.8%(90/92)，检测时间约4小时。Ching和Lee等应用LCR对不同类型临床标本(男女性尿液、男性尿拭子及女性宫颈拭子)进行了广泛临床研究，结果表明LCR敏感性高于培养，特异性为99.4%-100%,Jacobs等用LCR、基因探针PACE2系统和培养三种方法检测了581份低危人群宫颈标本。研究表明，LCR特异性强、敏感性高、操作简便、可检测尿液标本，这些优点使其有希望成为检测临床标本淋球菌的准确而快速的方法。能检测男女性尿液标本的优点非常有利于大规模STD普查，使筛查女性无症状感染者的机会大大增加。
参考文献
[1]TyndallMW，etal.GenitourinMed,2004（11）.
[2]叶顺章.直接免疫荧光检测淋球菌方法的建立.中华皮肤科杂志1991;24.
[3]叶顺章等.淋球菌产青霉素酶菌株的测定.中华皮肤科杂志1990;23.