小麦条锈菌效应蛋白Pst-1374的表达纯化及初步结构特征

论文摘要

由条形柄锈菌小麦专化型（Puccinia striiformis f.sp.tritici,Pst）引起的条锈病是小麦上最具破坏性的病害之一。在条锈菌侵染小麦过程中,条锈菌向小麦细胞分泌效应蛋白,改变宿主的防御反应。效应蛋白Pst-1374来源于条锈菌小种PST-78,将Pst-1374基因插入pET-32a载体并在大肠杆菌中表达,使用镍柱亲和层析和高效液相色谱（HPLC）纯化重组效应蛋白Pst-1374,然后通过液质联用质谱（LC-MS）、动态光散射（DLS）、凝胶过滤层析（GFC）和圆二色谱（CD）研究了Pst-1374的结构特征。结果表明,溶液中的Pst-1374大部分为无规则卷曲结构,只有小部分为规则的二级结构;三氟乙醇（TFE）可以稳定Pst-1374的结构,增加α-螺旋的比例。这些结构特点的发现为其他效应蛋白的结构研究提供了思路。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 表达载体的构建与鉴定
•     1.2.2 目的蛋白的表达、纯化与鉴定
•     1.2.3 Pst-1374的结构预测和分析
•     1.2.4 圆二色谱分析Pst-1374的二级结构
•     1.2.5 动态光散射分析Pst-1374的均一性[24]
•     1.2.6凝胶过滤层析分析Pst-1374聚集状态
• 2 结果与分析
•   2.1 Pst-1374的结构预测和分析
•   2.2 构建pET-32a-Pst-1374载体
•   2.3 Pst-1374的表达与纯化
•   2.4 Pst-1374的分子量
•   2.5 Pst-1374圆二色谱分析
•   2.6 Pst-1374动态光散射分析
•   2.7 Pst-1374的凝胶过滤层析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 方涵,智东明,赵海斌,王晓杰,康振生,陶虎,邓汉卿,王媛媛

关键词: 条锈菌,效应蛋白,表达与纯化,本质上非结构蛋白

来源: 安徽农业大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 植物保护

单位: 西北农林科技大学生命科学学院,西北农林科技大学植物保护学院,西北农林科技大学化学与药学院

基金: 国家自然科学基金(21403168)资助

分类号: S435.121.42

DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20200113.007

页码: 1010-1015

总页数: 6

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