基于甲基化核酸内切酶的甲基转移酶活性的电化学检测研究

论文摘要

由DNA甲基转移酶（DNMT1）催化的DNA甲基化在许多生物过程中起重要作用,包括基因转录,基因组印记和细胞分化[1]。本文利用特异性酶切法成功开发了一种有效的测定DNMT1的电化学方法。首先,将硫醇修饰的双链DNA（dsDNA）自组装固定在金电极上,随后DNMT1识别dsDNA半甲基化序列并实现完全甲基化,最后通过甲基化特异性限制酶（BSSHⅡ）剪切,未发生完全甲基化的碱基序列将被剪切并移除电极表面。利用差分脉冲伏安法（DPV）分别测定剪切前后的亚甲基蓝（MB）还原电流。在最佳优化条件下,该方法线性范围为0.5 nM～50 nM,检测限为0.5 nM。这种方法可以简单有效地检测DNA甲基化和DNMT1活性,在DNA甲基化快速检测和基因毒理分析方面具有一定的实际意义。

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 化学试剂
•   1.2 实验仪器
•   1.3 工作电极预处理
•   1.4 DNA自组装
•   1.5 甲基化方法和限制性内切酶处理
•   1.6 电化学测量方法
• 2 结果与讨论
•   2.1 实验原理及可行性研究
•   2.2 修饰电极的自组装检测
•   2.3 条件优化
•     2.3.1 优化BSSHⅡ反应时间
•     2.3.2 优化BSSHⅡ反应浓度
•     2.3.3 DNMT1反应时间的优化
•   2.4 DNMT1线性检测
•   2.5 稳定性与重复性
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 白雪娇,鲁理平,康天放

关键词: 甲基化,甲基转移酶活性,特异性酶切法,亚甲基蓝

来源: 化学研究与应用 2019年06期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,化学

单位: 北京工业大学环境与能源工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(21876005)资助

分类号: O657.1;Q75

页码: 1079-1085

总页数: 7

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