湖南省妇幼保健院湖南长沙410008
【摘要】目的：研究研究环化酶相关蛋白1（Cyclase-associatedProtein1，CAP1）在卵巢癌中的表达及其意义。方法：收集卵巢癌的病理标本，对其进行CAP1免疫组化染色，在此基础上分析CAP1的表达变化及其与患者临床因素及预后的相关性。结果：CAP1主要表达卵巢癌的细胞膜中，其平均表达比例为43.2%。CAP1的表达与卵巢癌患者肿瘤FIGO临床分期、组织分级、淋巴结转移及是否出现腹水间差异有统计学意义。CAP1高表达患者的5年生存率低于CAP1低表达患者。结论：CAP1在卵巢癌表达增加，其可与卵巢癌患者的不良预后相关。
【关键词】卵巢癌；环化酶相关蛋白1；预后；人
[Abstract]Objective：Tostudythecyclaseassociatedprotein1（Cyclase-associatedProtein1，CAP1）expressionanditssignificanceinovariancancer.Methods：thepathologicalspecimencollectionofovariancancer，stainingfortheCAP1immunegroup，anditscorrelationwithclinicalfactorsandprognosisanalysisofpatientswiththeexpressionofCAP1onthebasisof.Results：CAP1mainlyexpressedinthecellmembraneofovariancancer，themeanexpressionratioof43.2%.TheexpressionofCAP1inpatientswithtumorandwhetherthereislymphnodemetastasis，andthepatient'sage，genderandcaselevel，tumorsizeandthedepthoftumorinvasionrelated.HighexpressionofCAP1inpatientswith5yearsurvivalrateislowerthanthepatientswithlowCAP1expression.Conclusion：TheexpressionofCAP1inovariancancerwereincreased，whichmaybeassociatedwithtumormetastasisandpoorprognosisinpatients.
【Keyword】Ovariancancer；Cyclase-associatedProtein1；Prognosis；Human
卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，对妇女生命造成严重威胁。卵巢上皮癌患者手术中发现肿瘤局限于卵巢的仅占30%，大多数已扩散到子宫，双侧附件，大网膜及盆腔各器官。因此研究卵巢癌的分子机制有着重要的意义[1]。CAP1是能和环氧酶结合蛋白，其可促进环氧酶的活性，促进其催化的磷酸能量代谢[2]。研究发现CAP1在机体恶性肿瘤发生发展过程中发挥重要作用[3]，但是其在卵巢癌中发挥何种作用尚未见报道。本文主要利用免疫组化分析卵巢癌病例标本中CAP1的表达，并探讨其与卵巢癌发生、发展的关系。
一、材料与方法
1、试剂及设备
本实验所用的CAP1抗体购自SantaCruz公司，免疫组化用两步法试剂盒购自北京中山金桥生物试剂有限公司。切片机、摊片机及正置显微镜均为德国Leica公司产品、
2、组织样本收集
本组研究所用的60例卵巢癌标本为由@@@医院妇产科1997-2006年间手术切除标本，所有组织病理诊断明确，并且有完整的临床病理资料及随访资料。
3、石蜡切片制备
卵巢癌组织固定后，经梯度乙醇脱水、二甲苯透明后进行包埋；包埋后的组织在修正后进行5μm连续切片，摊片机中摊平切片，贴于载玻片上，恒温干燥箱烤片。
4、切片免疫组化
石蜡切片经二甲苯脱蜡后，进行抗原修复。抗原修复后的切片在除去内源性过氧化物酶后，分别滴加稀释好的一抗过夜，次日分别滴加试剂1（聚合物辅助剂）及试剂2（HRP标记的羊抗兔IgG）室温孵育，洗涤后DAB试剂盒显色，苏木素染液复染细胞核，梯度脱水，二甲苯透明及中性树胶封片。
5、免疫组化结果判断
用装有目镜网格测微尺的倒置显微镜，在每张切片具有代表性的肿瘤区域，随机选取10个高倍镜视野（400×），向同一个方向移动切片，不重复计数500-1000个细胞中的阳性细胞百分率。染色结果以标记指数（labelindex，LI）表示，LI＝阳性细胞数/细胞计数的总数×100%。以CAP1的LI值为界限，将其分为高表达组和低表达组，以便进行统计学分析。
6、患者随访
随访资料的收集采用随访信，电话查访以及户籍资料查访三种形式同时进行，三种方式总计随访成功60例，随访时间均≥60个月。
7、统计学处理
运用SPSS13.0统计软件进行分析。对CAP1在卵巢癌中的表达与相应的临床病理学特征之间的关系采用x2检验及Fisher精确概率法分析。P<0.05认为差异有统计学意义。
二、结果
1、卵巢癌中CAP1的表达
分别对60例卵巢癌中CAP1的表达进行免疫组化检测，结果显示CAP1主要表达在细胞膜上，在细胞核及细胞浆内少见表达（图1）。分别对卵巢癌中核的表达进行计数，结果显示CAP1在卵巢癌癌的表达在23.5%-64.3%之间，计算其平均LI值，其为43.2%，以此为界，对CAP1在卵巢癌中的表达进行分界，显示CAP1表达阳性患者31例，CAP1表达阴性患者29例。
2、卵巢癌中CAP1的表达与患者临床因素的相关性
分别对收集的卵巢癌患者的临床资料，包括患者的年龄、性别、病例级别、肿瘤大小、肿瘤浸润深度及是否出现淋巴结转移进行统计学分析，结果显示CAP1的表达与卵巢癌患者FIGO临床分期、组织分级、淋巴结转移及是否出现腹水间间差异有统计学意义，与患者的年龄、组织类型、腹水中有无癌细胞间差异无统计学意义（表1）。
3、卵巢癌中CAP1的表达与患者预后的关系
以CAP1在卵巢癌中表达率LI的平均值43.2%为界限，经Kaplan-Meier法分析，CAP1高表达（＞43.2%%）的患者，其5年生存率低于CAP1低表达（≤43.2%%）的患者（P＜0.05；图2）。
三、讨论
卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，死亡率占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂，早期症状不典型，术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及良恶性相当困难。卵巢恶性肿瘤中以上皮癌最多见，其次是恶性生殖细胞肿瘤。卵巢上皮癌患者发现时已扩散到子宫，双侧附件，大网膜及盆腔各器官，所以在早期诊断上是一大难题，因此研究食管癌的分子机制有着重要的意义。
肿瘤的迁移与细胞骨架的重排关系密切[4]。有研究发现CAP1的表达可通过调节信号的转导影响微管和微丝的结构，从而影响细胞的形态[5]。也有研究发现CAP1的表达与肿瘤的发生相关。我们的研究发现在卵巢癌中CAP1表达上调，并发现其表达与淋巴结转移相关。这提示我们在卵巢癌中，CAP1可能通过调节骨架重构，从而促进细胞的迁移及侵袭，从而导致肿瘤转移的发生。
参考文献：
[1]EnzingerPC，MayerRJ.Esophagealcancer.NEnglJMed.2003；349：2241–2252.
[2]GerstJE，FergusonK，VojtekA，etal.CAPisabifunctionalcomponentoftheSaccharomycescerevisiaeadenylylcyclasecomplex.MolCellBiol1991；11：1248–1257.
[3]BaumB，LiW，PerrimonN.Acyclase-associatedproteinregulatesactinandcellpolarityduringDrosophilaoogenesisandinyeast.CurrBiol2000；10：964–73.
[4]BaumB，PerrimonN.SpatialcontroloftheactincytoskeletoninDrosophilaepithelialcells.NatCellBiol2001；3：883–90.
[5]HubbersteyAV，MottilloEP.Cyclase-associatedproteins：CAPacityforlinkingsignaltransductionandactinpolymerization.FASEBJ2002；16：487–99.
图1.卵巢癌中CAP1的表达
*，P<0.05。Pearsonχ2分析显示有统计学意义。