甲硫氨酸亚砜还原酶A高通量活性筛选体系的建立

论文摘要

目的建立一种高通量的甲硫氨酸亚砜还原酶A（MsrA）活性筛选体系,为后续的定向进化改造等研究提供快速的活性检测方法。方法随机挑取含pmMsrA重组表达质粒的基因工程菌单克隆,在96孔培养板中培养并表达重组蛋白。利用溶菌酶破碎含MsrA重组蛋白的基因工程菌,利用DTNB-DTT显色法,测定样品反应液在412 nm处的光吸收减少值,来衡量MsrA酶蛋白的相对活性。结果 MsrA蛋白在96孔培养板中成功获得了具有生物学活性的重组表达,通过DTNB-DTT显色法活性测定,每个培养孔中表达的重组蛋白的生物学活性均几乎一致,差异系数仅为9.1%。结论成功建立了MsrA高通量活性检测体系,可用于MsrA活性的大量筛选。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 细菌培养与蛋白表达
•     1.2.2 重组菌细胞裂
•     1.2.3 MsrA活性测定
•     1.2.4 数据分析
• 2 结果
•   2.1 MsrA基因工程菌微量培养体系的建立
•   2.2 MsrA活性检测体系的优化
•   2.3 MsrA高通量活性筛选体系的确立
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨加伟,彭辽天,程小玲

关键词: 甲硫氨酸亚砜还原酶,活性,高通量筛选

来源: 遵义师范学院学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 社会科学Ⅱ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 遵义医科大学生物化学教研室,遵义医科大学细胞生物学教研室

基金: 遵义市科技局校联基金(遵市科合社字[2017]17号),国家自然科学基金项目(31460230)

分类号: Q55

页码: 115-118

总页数: 4

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