导读:本文包含了异种核移植论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:异种,细胞,线粒体,体细胞,纤维,胚胎,山羊。
异种核移植论文文献综述
吴珊珊[1]（2019）在《异种核移植早期胚胎线粒体发生异常机制研究》一文中研究指出异种体细胞核移植(inter-specific somatic cell nuclear transfer,iSCNT)胚胎易出现发育阻滞现象,线粒体功能异常可能是导致iSCNT合子基因组激活(Zygotic genome activation,ZGA)失败的重要原因。本研究对8-cell期牛-牛同种与羊-牛异种克隆胚胎RNA-Seq测序分析发现,在异种克隆胚胎中,与线粒体功能相关基因表达出现异常,如线粒体融合基因Mfn1和Mfn2、线粒体核糖体大亚基基因Mrpl48、线粒体外膜基因Tomm40、线粒体内膜基因Timm22和Timm23,以及线粒体促凋亡基因Caspase-2等。RT-qPCR结果显示,Mfn1、Mfn2、Timm22、Timm23、Tomm40和Mrpl48在异种克隆胚胎的表达量显着低于同种克隆胚胎,Caspase-2表达量显着高于同种克隆胚胎。同种克隆胚胎中的Tomm40、Timm22、Timm23和Mrpl48的表达量分别是异种克隆胚胎的15.38、11.01、9.38和2.61倍。蛋白免疫荧光分析发现,钠/钾离子转运蛋白ATP1B3、线粒体融合蛋白MFN1和MFN2在异种克隆胚胎的表达量显着低于同种克隆胚胎,线粒体核糖体大亚基蛋白MRPL48和线粒体外膜蛋白TOMM40没有显着差异。上述结果表明,线粒体功能异常可能是导致iSCNT胚胎在ZGA过程中发生发育阻滞的重要原因之一,线粒体融合基因Mfn1和Mfn2的异常表达,可能导致异种克隆胚胎发育阻滞。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-01）
霍莉慧[2]（2017）在《小分子化合物处理对川金丝猴—山羊异种核移植胚胎体外发育的影响》一文中研究指出川金丝猴被列为国家一级濒危野生保护动物,面临现存数目的极剧下滑,如何优化其在生长、发育及生殖繁育方面的问题引起了研究学者广泛关注。由于物种珍贵且数量稀少,同种核移植受到一定限制,采用异种核移植的方法成功避免了这一问题。异种核移植的成功受核移植操作过程、受体细胞和供体细胞类型的影响,尤其是供体细胞重编程的能力,所以供体细胞的处理对异种核移植的成功起关键作用。随着体细胞多潜能性研究的发展,运用小分子化合物诱导处理对供体细胞进行表观遗传学修饰,提高重编程效率获得了广泛应用。本研究对川金丝猴来源的供体细胞用小分子化合物处理,以山羊卵母细胞为受体进行异种核移植,探究处理前后对异种核移植胚胎体外发育的影响。本研究结果如下:(1)研究材料为川金丝猴耳缘皮肤组织,采用组织块贴壁法分离获得耳缘皮肤成纤维细胞。用合适浓度的小分子化合物对获得的细胞进行诱导处理,从细胞形态、增殖能力、标志性基因的表达水平进行检测。结果发现:分离得到川金丝猴耳缘皮肤成纤维细胞,经过数次传代培养仍能保持较高的活力;PCR显示有胚外内胚层标志基因Sall4和Gata6的表达;Q-PCR定量发现Gata6和Sall4的表达量升高。Gata6在2d、4d、12d的表达量升高显着(p<0.05),尤其第6d和14d表达量升高极显着(p<0.01);Sall4表达量的升高更为明显,在第2 d、4 d、10 d表达量升高显着(p<0.05),尤其第6d、8d、12d和14d表达量升高极显着(p<0.01)。(2)两者融合形成重组异构胚,激活后培养观察胚胎的发育情况并统计各时期数量,Q-PCR和免疫荧光化学染色检测早期发育相关基因的表达,实验发现:形成的川金丝猴-山羊重组异构胚在发育各个阶段处理组和对照组重构胚数量无显着差异(P>0.05);相关标志性基因检测发现:在处理组中Oct4、Prrxl的表达量显着增加(p<0.05),且Sox2、Telemeras的表达量极显着增加(p<0.01),相反Nanog的表达量降低但差异不显着(p>0.05);免疫荧光染色检测重构胚胎OCT-4、SOX-2和NANOG蛋白的表达,处理组中SOX-2的表达水平较高,OCT-4和NANOG表达水平相差不大,在两组间均没有显着性差异(p>0.05)。本研究证明小分子化合物处理能提高胚胎早期发育相关性基因的表达,为之后研究奠定了基础。(本文来源于《西北大学》期刊2017-06-01）
徐纯柱,郭自荣,朱祥春,谢桂林,吴比[3]（2014）在《黑线姬鼠成纤维细胞异种核移植研究》一文中研究指出为探讨优化黑线姬鼠-小鼠异种核移植技术体系,采用Piezo辅助胞质内体细胞核注射的方法进行克隆胚胎的重构,比较了不同供体细胞来源.不同浓度TSA以及不同供体细胞传代次数对重构胚的卵裂率和囊胚率产生的影响.结果表明,同种核移植试验中获得重构胚的卵裂率、囊胚率均显着高于异种核移植试验(P<0.05);传15代次的细胞作为供体细胞进行核移植,所得异种重构胚的囊胚率显着低于其他组别(P<0.05);50nmol/L和80nmol/LTSA处理组的囊胚率分别为6.06%和6.31%,显着高于其他各处理组及对照组的囊胚率3.13%(P<0.05).(本文来源于《徐州工程学院学报(自然科学版)》期刊2014年02期）
许常龙,秦祖兴,梁明明,胡林林,罗茜[4]（2013）在《Roscovitine同期化供核细胞对猴—猪异种核移植胚胎发育的影响》一文中研究指出【目的】探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础。【方法】活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后用流式细胞仪分析细胞周期分布。以不同同期化方法处理的食蟹猴耳纤维细胞为供体细胞,以体外成熟、去核的猪卵母细胞为受体细胞,利用电融合法构建食蟹猴—猪异种核移植胚胎,观察异种核移植重构胚胎的体外发育情况。【结果】以15μmol/L Roscovitine处理食蟹猴耳成纤维细胞24、48、72 h获得的G0/G1期细胞比率分别为76.51%、89.69%和90.49%,其中处理48和72 h的G0/G1期细胞比率显着高于对照组(P<0.05)。血清饥饿、接触抑制72 h同期化获得的G0/G1期细胞比率分别为91.12%和90.46%。Roscovitine同期化处理食蟹猴耳成纤维细胞48 h可有效提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率(15.05%),显着高于血清饥饿同期化处理和接触抑制同期化处理的效果(P<0.05)。【结论】Roscovitine可有效同期化食蟹猴耳成纤维细胞在G0/G1期,最终提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率。(本文来源于《南方农业学报》期刊2013年10期）
姚雅馨[5]（2012）在《Reversine对梅花鹿成纤维细胞及其异种核移植胚胎重编程能力的影响》一文中研究指出我国的野生梅花鹿数量十分稀少,早在1978年就被列为我国的国家Ⅰ级重点保护野生动物,中国濒危动物红皮书也将其列为濒危(Endangered)等级。当人类对于这样的珍稀物种,如果在其濒危灭绝甚至灭绝之前,未曾利用任何方式将其种质资源保存下来的话,那么当它一旦遭遇灭绝,就意味着野生梅花鹿的整个细胞生物学和分子生物学以及对其可能展开研究的基本材料就会永远丧失。因此,如果能够将濒危动物的遗传资源以体细胞库的形式保存下来,并找到适合的技术手段将体细胞的多潜能性挖掘出来,那么使之再现的愿望将逐步得以实现。由于从克隆青蛙到诱导多能干(iPS)细胞,科研工作者一直在为解决细胞重编程中的安全问题和效率问题进行不屑的努力,希望通过添加小分子化合物这一安全而直接的方式使体细胞完成重编程过程,Reversine是一种小分子化合物,利用它处理成体细胞后能够明显将其转变为一种与干细胞类似的“原始状态”,这种经过处理的细胞具备了分化的潜能性,并且能够提高核移植胚胎的发育水平。因此,本研究以梅花鹿的耳缘组织为研究材料,利用组织块贴壁法培养原代梅花鹿细胞并成功建立起该组织的成纤维细胞系,利用胰酶消化法对其进行传代,并根据细胞的生长状态绘制细胞生长曲线；当细胞生长至100%接触抑制时,对其进行冻存,并统计冻存细胞的样本含量；后进行复苏,检测复苏前后的细胞活力；利用吉姆萨染色法对梅花鹿成纤维细胞的核型进行分析。结果显示,利用组织块贴壁法能够培养出梅花鹿的原代细胞并成功建立起该组织的成纤维细胞系,细胞样本含量为137,其中每份细胞数量为(1-3)×106个/ml；核型分析后确定该样本来源于东北梅花鹿,染色体数目为2n=66。在梅花鹿成纤维细胞库构建成功后,本研究开始着眼于挖掘体细胞的多潜能性上首先利用5μM的reversine处理复苏后48小时的梅花鹿成纤维细胞4d,观察处理前后的细胞形态变化,并利用流式细胞仪检测细胞周期的分布情况和凋亡现象,之后利用间接免疫荧光法检测reversine处理前后细胞的增殖情况和细胞骨架的变化趋势；为了体现reversine具有使成体细胞去分化的能力,本研究将处理后的成纤维细胞分别向成骨、成脂和成肝样细胞进行定向诱导分化；后利用共聚焦显微技术定性,流式细胞检测技术定量分析了诱发细胞去分化潜能的组蛋白修饰情况。结果显示,经reversine处理的细胞的BrdU的表达量明显降低,细胞处于分裂期的数量明显降低。说明经过reversine处理的细胞增殖能力降低并获得了多核细胞；经过定向诱导分化,成功将经过reversine处理后的细胞诱导分化成为成骨、成脂和成肝样细胞,通过了免疫组织化学和RT-PCR的检测,证明了诱导的成功；共聚焦的定性和流式细胞仪的定量检测后发现,经过reversine处理后的成纤维细胞乙酰化水平明显升高,而甲基化和磷酸化水平均有一定程度的降低,这在表观遗传修饰水平上证明了reversine能够通过重编程使梅花鹿的成纤维细胞获得去分化的能力。能够使濒危灭绝动物复原的有效手段当属构建异种核移植胚胎,本研究以梅花鹿的成纤维细胞作为供体细胞,以成熟的牛MⅡ期卵母细胞作为核受体进行异种核移植,比较异种核移植、同种核移植与体外受精胚胎的发育水平,并利用reversine处理核移植胚胎,以期能够达到提高重构胚发育水平的目的,并利用间接免疫荧光法检测连接组蛋白H1的表达特点。结果显示,在本研究中成功构建了牛-鹿异种核移植胚胎,并经过培养获得了异种核移植胚胎的囊胚,对其发育水平进行比较后发现牛-鹿异种核移植胚胎的发育时间并没有滞后于牛-牛同种核移植胚胎,但是发育到囊胚期的效率却明显低于同种核移植胚胎(16±8.8%vs7士3.9%,P<0.05),而经过reversine处理的牛-牛同种核移植胚胎与牛-鹿异种核移植胚胎的发育水平都有明显的提高(16±8.8%vs28.2±5.9%,P<0.05；3.7±3.9%vs16.1±5.3,P<0.05)；并且通过间接免疫荧光法检测到在卵母细胞中特异表达的连接性组蛋白H1foo与体细胞类型H1组蛋白之间存在着一种此消彼长的变化趋势,正常受精胚胎的卵母细胞特异性的连接组蛋白H1Foo与体细胞类型连接组蛋白H1的角色转换发生在16-细胞期甚至更晚,而同种核移植胚胎在2-细胞期的时候就要进行这样的转换,这从连接组蛋白的角度上解释了核移植胚胎的重编程过程不完整的原因。而经过Reversine的处理后,核移植胚胎的连接组蛋白的表达模式得到了一定程度的纠正,其表达模式与体外受精胚胎的表达模式较为接近,这种组蛋白表达模式的纠正解释了经过reversine处理的异种核移植胚胎发育水平明显升高的原因。(本文来源于《东北林业大学》期刊2012-05-01）
梁明明,崔静辉,罗军,卢晟盛,卢克焕[6]（2011）在《哺乳动物体细胞异种核移植胚胎早期发育的研究进展》一文中研究指出体细胞异种核移植是指将一个物种的体细胞移植到另一物种的去核卵母细胞中,移入的体细胞核在受体胞质中重编程并发育成新个体的实验方法。该方法为拯救濒危物种和获取灵长类胚胎干细胞提供了可能的途径。但这方面的研究目前还只获得初步的进展,核重编程不完全以及异种胚胎的囊胚率低仍是其面临的主要难点。本文从基因表达、表观重编程、线粒体异质性、核重塑和核移植体系优化等方面入手,介绍近年来哺乳动物体细胞异种核移植的研究进展,并探讨异种重构胚重编程所面临的关键问题和可能获得成功的方法。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2011年06期）
曹俊伟,马利兵,华松,张涌[7]（2010）在《线粒体损伤对山羊-绵羊异种核移植胚早期发育的影响》一文中研究指出【目的】研究线粒体损伤对核移植胚早期发育的影响。【方法】用经光敏化染料罗丹明-123损伤的山羊胎儿成纤维细胞和绵羊卵母细胞,构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,于38.5℃、相对湿度100%、体积分数5%CO2条件下培养,统计其2-细胞期、8-细胞期和囊胚期的发育率。【结果】山羊核供体线粒体损伤并不影响囊胚期前核移植胚的发育率(P>0.05);绵羊卵母细胞线粒体损伤,使核移植胚2-细胞期的发育率下降(P<0.05),但不影响8-细胞期和囊胚期的发育率(P>0.05);核供体和卵母细胞线粒体都损伤的核移植胚发育率的变化规律与卵胞质受体线粒体损伤的核移植胚一致。【结论】在异种核移植胚的早期发育中,核供体线粒体损伤不影响核移植胚的发育,但卵母细胞受体线粒体损伤明显影响核移植胚的发育率。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2010年04期）
王中乾,李键,毕琳,田甜,罗添添[8]（2010）在《牦牛异种核移植显微操作针的制备》一文中研究指出结合制备用于牦牛异种核移植显微操作针的经验,介绍了制备显微操作用针的具体方法,并对一些在显微操作针制作过程中可能出现的影响因素及其注意事项加以总结。(本文来源于《畜牧与饲料科学》期刊2010年02期）
李向臣,跃华,姚雅馨,刘丹,关伟军[9]（2009）在《孟家拉虎异种核移植胚胎乙酰化分析》一文中研究指出引言孟加拉虎是我国珍稀濒危野生动物的一种,因此,本实验室以构建的成纤维细胞库为试验材料,借鉴克隆技术,对濒于灭绝的孟加拉虎体细胞异质核移植进行探讨。为了提高克隆的效率,人们把目光转移到体细(本文来源于《中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集》期刊2009-10-10）
谭晓颖[10]（2009）在《绵羊同种及绵羊—山羊异种核移植研究》一文中研究指出在绵羊同种及绵羊-山羊异种克隆胚构建过程中,为了完善克隆胚构建及培养体系,就离子霉素和乙醇分别联合6-D的激活、不同的融合和化学激活前培养时间和不同阶段添加饲养层对克隆胚发育的影响叁个方面进行了研究。对绵羊同种核移植所得流产胎儿进行了分子生物学检测,结果表明:1. 5mmol/L离子霉素联合6-D激活同种克隆胚胎和异种克隆胚胎5min,其卵裂率、桑椹胚和囊胚发育率虽均高于7%乙醇联合6-D激活胚胎5min(同种依次为79.67%Vs73.39%、44.79% Vs 35.08 %以及11.97% Vs 8.18%,异种依次为76.00% Vs 72.13%、36.84% Vs 35.60%以及9.77% Vs 6.82%),但差异不显着(P>0.05),同种克隆和异种克隆胚胎比较,差异不显着(P>0.05)。表明易得到的乙醇可以替代离子霉素。2.融合前平衡1h的同种和异种胚胎卵裂率,桑椹胚率均比不平衡直接融合明显高(同种76.88% ,76.70% Vs 64.49%,63.16%;52.85%,43.04% Vs33.33%,28.33%;异种为76.09%,77.53%Vs70.09%,63.33%;46.07%,44.93% Vs 30.67%,28.07%)(P<0.05),但平衡1h与直接融合囊胚发育率差异不显着。激活前平衡2h与否直接影响激活胚胎的完整率。融合后平衡2h再激活,可以获得明显高于直接激活的胚胎完整率(同种95.81%,97.27% Vs 74.64%,69.85%;异种97.50%,96.40% Vs 78.76%,67.16%)。总的看来,融合和激活前分别平衡1h,2h的同种及异种克隆胚胎均获得效果较好的胚胎激活完整率,分裂率,桑椹胚发育率和囊发育率(同种95.81%,76.88%,52.85%,9.76%;异种为:97.50%,76.09%,46.07%,10.11%)。但无论平衡与否,胚胎的融合率都没有显着差异。3.在克隆胚培养前72小时添加饲养层有助于提高卵裂率(同种差异显着,84.08% vs72.96% vs75.76%(P<0.05);异种差异不显着,76.86% vs 69.38% vs 67.11%(P>0.05)),同种克隆和异种克隆胚比较,异种克隆胚的卵裂率和囊胚率明显低于同种克隆胚胎。而在72h之后添加饲养层共培养,桑椹胚和囊胚发育率与未添加的差异均不显着(P>0.05)(桑椹胚率同种31.47% vs 40.0 % vs 51.48%;异种,37.84% vs 39.22% vs 51.48%,囊胚率同种,7.69% vs 10.67 % vs 14.79%;异种,3.60% vs 5.88% vs 7.32%)。结果表明对同种和异种克隆胚胎而言,在前72h进行共培养,有利于胚胎的发育,而72h之后不需要饲养层共培养即可,同种克隆和异种克隆胚胎比较,差异不显着(P>0.05)。4.筛选5对微卫星引物对体细胞克隆绵羊流产胎儿DNA进行PCR扩增,12%聚丙烯凝胶电泳,硝酸银染色克隆胎儿的微卫星DNA指纹与供体细胞完全相同,而不同于其受体母亲和对照绵羊。证明该流产羔羊基因来源于供体细胞,为体细胞克隆绵羊。用Sry基因特异性引物扩增发现流产胎儿和供核细胞一样均为雄性,进一步证实了该流产胎儿为体细胞克隆绵羊。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2009-05-01）
异种核移植论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
川金丝猴被列为国家一级濒危野生保护动物,面临现存数目的极剧下滑,如何优化其在生长、发育及生殖繁育方面的问题引起了研究学者广泛关注。由于物种珍贵且数量稀少,同种核移植受到一定限制,采用异种核移植的方法成功避免了这一问题。异种核移植的成功受核移植操作过程、受体细胞和供体细胞类型的影响,尤其是供体细胞重编程的能力,所以供体细胞的处理对异种核移植的成功起关键作用。随着体细胞多潜能性研究的发展,运用小分子化合物诱导处理对供体细胞进行表观遗传学修饰,提高重编程效率获得了广泛应用。本研究对川金丝猴来源的供体细胞用小分子化合物处理,以山羊卵母细胞为受体进行异种核移植,探究处理前后对异种核移植胚胎体外发育的影响。本研究结果如下:(1)研究材料为川金丝猴耳缘皮肤组织,采用组织块贴壁法分离获得耳缘皮肤成纤维细胞。用合适浓度的小分子化合物对获得的细胞进行诱导处理,从细胞形态、增殖能力、标志性基因的表达水平进行检测。结果发现:分离得到川金丝猴耳缘皮肤成纤维细胞,经过数次传代培养仍能保持较高的活力;PCR显示有胚外内胚层标志基因Sall4和Gata6的表达;Q-PCR定量发现Gata6和Sall4的表达量升高。Gata6在2d、4d、12d的表达量升高显着(p<0.05),尤其第6d和14d表达量升高极显着(p<0.01);Sall4表达量的升高更为明显,在第2 d、4 d、10 d表达量升高显着(p<0.05),尤其第6d、8d、12d和14d表达量升高极显着(p<0.01)。(2)两者融合形成重组异构胚,激活后培养观察胚胎的发育情况并统计各时期数量,Q-PCR和免疫荧光化学染色检测早期发育相关基因的表达,实验发现:形成的川金丝猴-山羊重组异构胚在发育各个阶段处理组和对照组重构胚数量无显着差异(P>0.05);相关标志性基因检测发现:在处理组中Oct4、Prrxl的表达量显着增加(p<0.05),且Sox2、Telemeras的表达量极显着增加(p<0.01),相反Nanog的表达量降低但差异不显着(p>0.05);免疫荧光染色检测重构胚胎OCT-4、SOX-2和NANOG蛋白的表达,处理组中SOX-2的表达水平较高,OCT-4和NANOG表达水平相差不大,在两组间均没有显着性差异(p>0.05)。本研究证明小分子化合物处理能提高胚胎早期发育相关性基因的表达,为之后研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
异种核移植论文参考文献
[1].吴珊珊.异种核移植早期胚胎线粒体发生异常机制研究[D].内蒙古大学.2019
[2].霍莉慧.小分子化合物处理对川金丝猴—山羊异种核移植胚胎体外发育的影响[D].西北大学.2017
[3].徐纯柱,郭自荣,朱祥春,谢桂林,吴比.黑线姬鼠成纤维细胞异种核移植研究[J].徐州工程学院学报(自然科学版).2014
[4].许常龙,秦祖兴,梁明明,胡林林,罗茜.Roscovitine同期化供核细胞对猴—猪异种核移植胚胎发育的影响[J].南方农业学报.2013
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[7].曹俊伟,马利兵,华松,张涌.线粒体损伤对山羊-绵羊异种核移植胚早期发育的影响[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2010
[8].王中乾,李键,毕琳,田甜,罗添添.牦牛异种核移植显微操作针的制备[J].畜牧与饲料科学.2010
[9].李向臣,跃华,姚雅馨,刘丹,关伟军.孟家拉虎异种核移植胚胎乙酰化分析[C].中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集.2009
[10].谭晓颖.绵羊同种及绵羊—山羊异种核移植研究[D].西北农林科技大学.2009
论文知识图
