兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用

论文摘要

为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a（+）载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21（DE3）,筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材 料
•   1.2 PCR扩增和载体构建
•   1.3 原核表达与纯化鉴定
•     1.3.1 原核表达
•     1.3.2 纯化鉴定
•   1.4 动物试验
•   1.5 多克隆抗体的特异性分析及初步应用
•     1.5.1 多克隆抗体的特异性分析
•     1.5.2 多克隆抗体的初步应用
• 2 结 果
•   2.1 PCR扩增Bcl-2基因和重组质粒的双酶切鉴定
•   2.2 重组蛋白Bcl-2的表达纯化
•   2.3 重组蛋白Bcl-2的纯化鉴定
•   2.4 抗Bcl-2多克隆抗体的特异性
•   2.5 抗Bcl-2多克隆抗体的应用
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈萌萌,潘渊婷,范志宇,胡波,宋艳华,魏后军,仇汝龙,朱伟峰,徐为中,王芳

关键词: 兔源抗凋亡蛋白,原核表达,亲和层析,多抗制备

来源: 江苏农业学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金项目(31702274),现代农业产业技术体系建设专项基金项目(CARS-43-C-1)

分类号: S858.291

页码: 1397-1401

总页数: 5

文件大小: 1039K

下载量: 121