安徽地区鸡源沙门氏菌分离鉴定及其耐药性及基因分型研究

论文摘要

禽沙门氏菌病（Avian Salmonellosis）是指由沙门氏菌属（Salmonella）中多个成员引起的禽类急性或慢性疾病的总称。该病不仅能通过直接接触进行水平传播,而且可以通过种蛋进行垂直传播,给养禽业造成了巨大的经济损失。长期以来,由于抗菌药物在养禽业的不合理使用,导致禽源沙门氏菌耐药性增强,给禽沙门氏菌病的治疗带来困难。鸡作为沙门氏菌主要宿主之一,在沙门氏菌的散播及食品污染方面扮演着重要的角色。本文对安徽地区鸡源沙门氏菌进行分离鉴定,确定其流行血清型;通过微生物学和分子生物学方法对安徽地区鸡源沙门氏菌的耐药性和基因型进行研究。具体的研究方法及结果如下:1)鸡源沙门氏菌的分离鉴定与血清型检测。本文采用PBW-MM-XLD4分级培养方式对临床样品进行沙门氏菌选择性分离培养,并通过对可疑菌株的表型鉴定与细菌16S rRNA基因分析,获得70株鸡源沙门氏菌。对70株鸡源沙门氏菌血清型进行检测,结果显示所有分离菌株分布于5种血清型内,其中鼠伤寒型38株,肠炎型27株,科特布斯型3株,汤卜逊型1株,婴儿型1株。结果表明鼠伤寒型和肠炎型为安徽地区鸡源沙门氏菌的优势血清型。2)鸡源沙门氏菌的耐药性研究。采用K-B纸片法对70株鸡源沙门氏菌进行14种常见抗菌药物的敏感性检测,结果显示测试菌株对亚胺培南、丁胺卡那、环丙沙星和恩诺沙星的敏感性高,而对β-内酰胺类、四环素类氯霉素类及磺胺类药物表现不同程度的耐药。测试菌株中有23株对三种及以上的抗菌药物耐药,多重耐药率达32.9%,最常见的多重耐药谱为AMX-CRO-TET-CHL-TMP。同时,70株鸡源沙门氏菌携带7种耐药基因情况进行检测,结果发现β-内酰胺类耐药基因blaTEM的检出率为48.6%,四环素类耐药基因tetA和tetB基因的检出率分别为48.6%和15.7%,磺胺类sul2基因检出率28.6%,parC基因检出率100%,strA基因检出率45.7%。结果表明安徽地区鸡源沙门氏菌具有较强的耐药性。3)鸡源沙门氏菌的毒力基因检测。采用PCR方法对70株鸡源沙门氏菌携带的毒力岛SPI-1-5上的毒力基因（invA、sseL、mgtC、siiE、sopB）、毒力质粒基因spvB以及肠毒素基因stn进行检测。结果显示invA、mgtC和stn基因的检出率均为100%,seeL、siiE sopB和spvB基因的检出率分别为64.3%、98.6%、97.1%、68.6%,表明鸡源沙门氏菌分离株的毒力基因携带率较高。4)鸡源沙门氏菌基因分型研究。分别采用ERIC-PCR和CRISPR方法对70株沙门氏菌进行基因分型研究。结果显示ERIC-PCR无法区分相同血清型的鸡源沙门氏菌,而CRISPR方法可区分相同血清型的沙门氏菌。其中,27株肠炎沙门氏菌分成3种基因型,36株鼠伤寒沙门氏菌分为9种基因型。结果表明CRISPR方法在沙门氏菌基因分型中具有良好的分型效果。综上所述,本研究从安徽地区病鸡样品中共分离鉴定到70株鸡源沙门氏菌,鼠伤寒型和肠炎型为其优势血清型,且鼠伤寒型和肠炎型沙门氏菌又分别分成3种和9种基因型。鸡源沙门氏菌安徽分离株耐药严重、携带多种毒力基因。这些结果可为临床合理使用抗菌药物提供指导,也为鸡源沙门氏菌的流行病学研究奠定了基础。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语索引
• 文献综述
• 引言
• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 样品来源
•     1.1.2 参考菌株
•     1.1.3 主要试剂（盒）及配制
•     1.1.4 药敏纸片
•     1.1.5 所用引物序列与合成
•     1.1.6 主要仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 沙门氏菌的分离培养
•     1.2.2 分离菌株的形态学检查
•     1.2.3 分离株16S rRNA基因的PCR扩增与序列分析
•     1.2.4 沙门氏菌血清型鉴定
•     1.2.5 抗菌药物敏感性试验
•     1.2.6 沙门氏菌耐药基因的检测
•     1.2.7 沙门氏菌毒力基因的检测
•     1.2.8 沙门氏菌分离株的基因分型检测
• 2 结果与分析
•   2.1 沙门氏菌的分离培养
•   2.2 分离菌株的鉴定
•     2.2.1 分离菌株的形态、大小与染色特性
•     2.2.2 分离株16S rRNA基因的PCR扩增与序列分析
•     2.2.3 沙门氏菌分离株的血清型鉴定
•   2.3 沙门氏菌分离株的耐药表型及其携带的耐药基因
•     2.3.1 沙门氏菌分离株的耐药表型
•     2.3.2 分离菌株携带的耐药基因
•     2.3.3 沙门氏菌分离株携带的毒力基因
•   2.4 沙门氏菌分离株的基因分型
•     2.4.1 ERIC-PCR分子分型结果
•     2.4.2 CRISPR分子分型结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张庆贺

导师: 李槿年,张丹俊

关键词: 鸡源沙门氏菌,优势血清型,耐药性,毒力基因,基因型

来源: 安徽农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 安徽农业大学

分类号: S852.61

DOI: 10.26919/d.cnki.gannu.2019.000661

总页数: 64

文件大小: 6750K

下载量: 90