导读:本文包含了肝脏星状细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,树突,肝脏,星状,肿瘤,连翘,乙型肝炎。
肝脏星状细胞论文文献综述
杨胜乾,李佳行,罗明明,刘娟娟,唐渊[1]（2019）在《连翘苷通过调控NF-κκB信号途径抑制肝脏星状细胞的活化》一文中研究指出目的研究天然产物连翘苷对不同炎症刺激物活化肝脏星状细胞的干预作用及机制。方法体外培养大鼠肝脏星状细胞(HSC-T6)和人源肝脏星状细胞(LX-2);MTT法检测肝星状细胞的增殖;细胞划痕实验和Transwell法分析细胞的迁移;试剂盒检测细胞分泌的炎症因子;细胞免疫荧光、激光共聚焦和免疫印迹法分析细胞内α-SMA和NF-κB P65蛋白及其磷酸化水平。结果不同浓度梯度的连翘苷处理肝星状细胞24 h,对2种细胞的增殖均没有明显的影响;30μmol·L~(-1)和100μmol·L~(-1)的连翘苷处理HSC-T6细胞(P<0.05,P<0.01)和LX-2细胞(P<0.05,P<0.01)48 h,可明显抑制其增殖。10μmol·L~(-1)的连翘苷与细胞共孵育8或24 h,均能显着性的抑制10%FBS诱导HSC-T6和LX-2细胞的迁移。与对照细胞相比,LPS或TNF-α处理细胞24 h,显着性升高肝星状细胞内α-SMA的表达,而10μmol·L~(-1)的连翘苷能够明显降低细胞内α-SMA的蛋白水平,抑制肝星状细胞的活化。与正常对照相比,LPS或TNF-α明显升高细胞内NF-κB P65蛋白的磷酸化水平,诱导P65发生核转位现象,10μmol·L~(-1)的连翘苷也能够显着性降低细胞内P65的磷酸化,阻止其核转位的发生。结论连翘苷具有抑制不同炎症刺激物诱导肝星状细胞增殖、迁移和活化的生物学作用,可能是通过调控NF-κB信号途径来实现的。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2019年10期）
赵正涌[2]（2019）在《抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠肠道树突状细胞影响及其机制研究》一文中研究指出目的:通过抑制肝脏库普弗细胞功能,监测脓毒症大鼠机体炎症反应及肠道树突状细胞的变化,进一步探讨其发生机制,为探究脓毒症发生发展中肝-肠互作机制,及脓毒症的救治新策略的提出奠定理论基础。第一部分:不同剂量氯化钆抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠机体炎症反应及肠粘膜固有层树突状细胞的影响方法:60只SD大鼠随机分为4组:假手术组、氯化钆预处理假手术组、脓毒症组和氯化钆预处理脓毒症组,每组6只大鼠。氯化钆预处理组分别于术前48小时和24小时通过尾静脉注射5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的氯化钆(GdCl_3),假手术组大鼠注射等量生理盐水。采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制脓毒症模型。术后24小时处死大鼠,利用ELISA法检测各组大鼠外周血清及肠组织炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10表达。组织病理学评价大鼠肠组织损伤。采用四型胶原酶消化的方法得到各组大鼠肠粘膜固有层树突状细胞(LPDCs)。采用流式细胞技术单标法检测各组大鼠LPDCs的CD103抗体阳性率,计算LPDCs数量。流式细胞技术双标法检测各组大鼠LPDCs表面主要组织相容性复合体(MHC)II及共刺激分子CD86的表达。结果:(1)血清及肠组织中,5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg GdCl_3抑制组促炎因子TNF-α和IL-6的表达相比脓毒症组显着下调(P<0.05),而抑炎因子IL-10的表达显着上调,40 mg/kg GdCl_3组促炎因子TNF-α和IL-6的表达显着高于其他组。(2)肠组织病理学评价,脓毒症组相较于假手术组肠组织炎症损伤显着加重。而5 mg/kg、10 mg/kg、20mg/kg的GdCl_3能显着减轻肠组织的炎症损伤,40 mg/kg的GdCl_3组肠组织损伤较脓毒症组显着加重(P<0.05)。(3)LPDCs的数量在CLP术后24小时显着减少(P<0.05),5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg组均能显着增加LPDCs的数量(P<0.05),40 mg/kg组的LPDCs数量较CLP组无显着差异。(4)相比于假手术组,CLP组MHC-II和CD86的表达显着上调(P<0.05),而20 mg/kg GdCl_3预处理组MHC-II以及CD86的表达较脓毒症组显着下调(P<0.05)。第二部分:抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠机体炎症反应及肠道树突状细胞影响的时相性变化方法:72只SD大鼠随机分为4组,假手术组、GdCl_3预处理假手术组、脓毒症组和GdCl_3预处理脓毒症组,每组18只大鼠。GdCl_3预处理组,分别于术前48小时和24小时通过尾静脉注射20 mg/kg的GdCl_3,对照组大鼠注射同等剂量生理盐水。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症模型,各组分别于术后6 h、12 h及24 h处死6只大鼠。利用ELISA法检测各组大鼠外周血清及肠组织炎症因子TNF-α、IL-6及IL-10的表达。组织病理学评价大鼠肠组织炎症损伤。采用四型胶原酶消化的方法得到各组大鼠LPDCs,采用流式细胞技术单标法检测各组大鼠LPDCs的CD103抗体阳性率,计算LPDCs数量。流式细胞技术双标法检测各组大鼠LPDCs表面MHC-II及CD86的表达,检测LPDCs的凋亡率。Western Blot技术检测各组大鼠LPDCs自噬相关蛋白的LC3-II的表达。结果:(1)血清及肠组织中,CLP术后6 h开始TNF-α、IL-6及IL-10的表达较假手术组显着上调(P<0.05),24 h达到最高。GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能使促炎因子TNF-α和IL-6的表达在各时间点较脓毒症组显着下调(P<0.05),抑炎因子IL-10的表达显着上调(P<0.05)。(2)肠组织炎症损伤评价,在6 h、12 h、24 h脓毒症组相比于Sham组肠组织炎症损伤显着加重,GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能显着减轻了脓毒症大鼠各时间点的肠组织损伤。(3)CLP术后6 h LPDCs的数量显着增加,12 h达到最大(P<0.05),24 h显着减少,GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能在各时间点显着增加了脓毒症大鼠LPDCs的数量。(4)GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能明显抑制了各时间点脓毒症大鼠LPDCs表面MHC-II以及CD86的表达(P<0.05)。(5)GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能显着降低了脓毒症大鼠各时间点LPDCs的自噬相关蛋白表达并下调其凋亡率(P<0.05)。结论:(1)GdCl_3可抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,其抑制程度呈剂量依赖。20mg/kg的GdCl_3可抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,且不会加重脓毒症大鼠机体过度炎症反应和肠组织损伤。(2)GdCl_3抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,可减轻脓毒症大鼠机体炎症反应及肠组织损伤。其机制可能与抑制脓毒症大鼠机体促炎因子TNF-α和IL-6的表达有关。(3)GdCl_3抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,可降低LPDCs抗原提呈以及激活T细胞的能力,并可通过促进脓毒症大鼠外周DCs向肠道迁移并下调其自噬和凋亡水平从而维持LPDCs数量的稳定。其机制可能与促进抑炎因子IL-10的表达有关。(本文来源于《石河子大学》期刊2019-06-01）
徐莹,张定棋,陈佳美,刘伟,刘平[3]（2019）在《肝脏微环境中各种细胞对肝星状细胞活化的影响》一文中研究指出肝纤维化是以肝脏细胞外基质过度沉积或疤痕组织过度增生为特点的动态病理过程。肝星状细胞(HSC)的活化被普遍认为是形成肝纤维化的中心环节。HSC的活化受到肝脏微环境中各种复杂因素的调控,包括理化刺激和细胞间交互作用等。肝脏内固有细胞及免疫细胞与HSC共同构建了一个复杂的调控系统,调控HSC的活化过程及其转归。主要介绍了肝脏微环境中各种细胞对HSC活化的调控作用,旨在为新型的抗纤维化诊疗手段的研究拓展思路。(本文来源于《临床肝胆病杂志》期刊2019年02期）
符茗铨,蒋梅[4]（2018）在《肝脏炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤1例临床分析》一文中研究指出炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤是滤泡树突状细胞肿瘤的一个亚型,在临床上非常罕见。其病变常见于肝、脾等腹腔脏器,并常伴随淋巴细胞等炎性细胞浸润,易出现误诊。本文报道肝脏炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤1例。57岁女性患者,以无痛性腹部包块为首发症状,并伴消瘦、纳差等症状。3个月后在当地医院行上腹部MR提示:肝左叶占位性病变,考虑恶性肿瘤可能。2016年9月行左半肝切除手术。术后1年余复查CT提示肝右叶占位性病变,考虑肝内转移可能。2018年3月在广州中医药大学第一附属医院住院,血分析、肝功能、相关肿瘤抗原检测等检查均未发现明显异常。乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝核心抗体(anti-HBc)等检测均为阴性。2018年3月23日排除相关手术禁忌症后在广州中医药大学第一附属医院行肝右叶肿物切除手术,术后病理显示肿瘤由增生的类圆形或梭型细胞构成,间质见淋巴细胞、浆细胞等浸润,瘤细胞胞浆红,核淡染,见小核仁。免疫组织化学:CD21(±)、CD138(-)、CD3(-)、CD20(-)、SMA(-)、CD34(-)、CK(-)、Ki-67(±);EBV-encoded RNA(EBER)原位杂交:EBER(+)。病理确诊(肝)炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤。术后予预防感染、增强免疫力、护肝等治疗后出院,观察1月余未出现二次复发或转移。(本文来源于《中国热带医学》期刊2018年08期）
李智,郑磊,凌威,朱德明,孔连宝[5]（2018）在《成熟树突状细胞在肝脏缺血再灌注中的作用》一文中研究指出目的:探讨成熟树突状细胞(dendritic cells,DCs)在小鼠肝脏缺血再灌注中的作用。方法:收集骨髓源性树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs),经过不同处理(正常肝细胞培养上清或缺氧再氧合原代肝细胞培养上清培养24 h)后,在细胞流式仪上检测细胞成熟相关指标(CD40、CD80、CD86、MHCⅡ);然后将20只健康雄性C57BL/6小鼠随机分成缺血再灌注组(IR)、未经刺激的骨髓源性树突状细胞处理组(IR+NEG-BMDCs)、正常肝细胞上清刺激的骨髓源性树突状细胞处理组(IR+CON-BMDCs)、经缺氧再氧合的原代肝细胞上清刺激成熟骨髓源性树突状细胞处理组(IR+H/R-BMDCs),各组5只。采用70%肝脏缺血再灌注模型(缺血1 h,再灌注6 h)。各组分别于术前1 h给予PBS、NEG-BMDCs、CON-BMDCs、H/R-BMDCs尾静脉注射。酶联免疫吸附实验(ELISA法)分别测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白介素-10(IL-10)、白介素-17(IL-17)水平。通过光镜观察组织HE染色改变。反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝组织转化生长因子β(TGF-β)、叉头框蛋白P3(FOXP3)、IL-10、IL-17水平。结果:H/R-BMDCs处理组肝酶水平明显低于其他3组(P<0.05),形态学分析及Suzuki评分明显优于其他3组。H/R-BMDCs处理组血清及肝组织中IL-10、肝组织中TGF-β、FOXP3表达水平明显高于其他组,IL-17低于其他组(P<0.05)。结论:H/R-BMDCs预处理可以通过调节调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)的平衡来减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2018年04期）
汤泊,丁重阳[6]（2018）在《肝脏及纵隔炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤一例》一文中研究指出病例资料患者,男,38岁,2周前体检B超发现肝右叶占位,遂至我院行胸腹部CT,CT示肝右叶巨大类圆形混杂密度影,增强扫描示不均匀强化,动脉期可见粗大供血血管;下段食管前方及胸11-12椎体右旁另见多发软组织肿块影(图1a~c),CT诊断为原发性肝癌伴多发淋巴结转移。胃镜示慢性胃炎,肠镜未见异常。血常规、尿常规、肝肾功能、乙肝两对半及肿瘤标志物正常。手术病理:纵隔肿块大小约6.5cm×4.5cm×2.5cm,肝脏肿块约13.5cm×8.5cm×(本文来源于《放射学实践》期刊2018年01期）
洪赟[7]（2017）在《肝脏实质细胞和星状细胞脂滴蛋白与脂质组分研究》一文中研究指出研究背景与目的:肝脏疾病是一个全球性的重大问题,中国约有叁亿人罹患肝脏相关疾病。虽然自1992年以来疫苗接种降低了感染病毒性肝炎的人数,但是非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发病率却迅速升高。NAFLD从单纯性脂肪性肝病可以进展为肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至是肝癌。肝癌是全球最致命的癌症之一,在中国发病率排第二,5年病死率更是超过90%,在NAFLD早期对肝脏疾病进行干预和治疗显得尤为重要。NAFLD在单纯性脂肪性肝病阶段的病理特征是肝实质细胞的脂滴(lipid droplets,LDs)中性脂特异性增多,目前已有关于NAFLD患者肝组织和正常肝组织的脂滴比较蛋白质组学研究,并发现了可能引起NAFLD的脂滴蛋白。事实上,正常的肝脏实质细胞内就存在大小不一的脂滴,NAFLD的发生是肝实质细胞内原有大脂滴数量增多还是脂滴的病理性改变尚不明确。为了回答这个问题,我们首先应该了解生理状态下肝实质细胞内大小脂滴各自的特征。肝纤维化发生过程中,肝星状细胞(hepaticstellate cells,HSCs)激活转化为肌成纤维细胞,产生大量的细胞外基质,是肝纤维化形成的中心环节。肝星状细胞活化的主要特征是含有特殊中性脂——视黄醇酯(retinolesters,REs)的脂滴大量减少。目前对于肝星状细胞的脂滴和活化之间的因果关系尚不清楚。肝星状细胞的脂滴脂质组学和蛋白组学研究也不完善。虽然现今已发现某些脂滴蛋白与肝星状细胞活化的调控相关。但脂滴的动态变化与调控肝星状细胞活化的关系,以及相关机制仍不清楚。本学位论文运用我们实验室建立的脂滴纯化及大小脂滴分离技术,辅以高通量手段,分离纯化了 C57/BL6小鼠肝实质细胞的大小脂滴,并对它们的脂质和脂滴蛋白组成进行比较组学分析。对认识理解生理状态下不同尺寸脂滴各自的特点,更好地分析NAFLD大脂滴的产生原因,揭示NAFLD的发病机制提供了研究基础和线索。另外,我们还分离纯化了小鼠原代肝星状细胞,探索了其活化的调控及脂滴蛋白的变化。同时,我们纯化了肝星状细胞人源细胞株LX-2的脂滴,并对其脂滴蛋白进行组学分析。我们进一步比较逆转活化前后肝星状细胞脂滴的脂滴蛋白组变化,发现了一些可能参与肝星状细胞活化的脂滴蛋白。研究方法:第一部分研究中,为了分析小鼠肝脏实质细胞中不同脂滴的脂质组成,选取24周龄雄性C57/BL6小鼠,原位逆行灌注和体外消化方法从小鼠肝脏中分离出肝实质细胞,匀浆器研磨破碎,然后通过差速离心的方法分离出尺寸不同的脂滴。脂滴经LipidTOX染色,共聚焦荧光显微镜观察脂滴形态,并用动态光散射仪测量脂滴的尺寸。采用薄层层析色谱(TLC)检测不同大小脂滴的中性脂组成。利用银染和Western blot初步分析不同大小脂滴的蛋白质组成。最后用高通量方法对脂滴脂质成分差异较大的两个组分进行半定量蛋白质组学分析。第二部分研究中,为了分析小鼠肝脏肝星状细胞脂滴与活化的关系,原位逆行灌注和体外消化方法分离出C57/BL6小鼠肝实质细胞后,剩下的为肝脏间质细胞,然后通过密度梯度离心分选出原代肝肝星状细胞。原代肝星状细胞的脂滴蛋白Perilipin-2(PLIN2)和Perilipin-3(PLIN3)用免疫荧光法观测在脂滴上的定位。提取后的肝星状细胞体外培养可以模拟肝脏受到病理刺激时肝星状细胞激活、增值、转化为肌成纤维细胞的过程。分别用retinol 10 μM和OA 100μ M处理原代肝星状细胞和LX-2细胞株,观察脂滴尺寸、数量和中性脂(甘油叁酯/视黄醇酯)成分的改变,检测肝星状细胞活化指标如α-SMA、fibronectin等的改变。因为原代肝星状细胞数量有限,不足以提取足够量的脂滴做蛋白质组分析,我们从20个150*20 mm细胞培养皿中成功地分离纯化出LX-2细胞的脂滴,用共聚焦荧光显微镜和动态光散射仪观测脂滴,用银染和Western blot对脂滴蛋白进行初步分析,确定脂滴提取的纯度和其它细胞器之间的关系。脂滴蛋白在SDS-PAGE的主要条带进行胶内酶解和质谱分析,分析LX-2的脂滴主要蛋白。脂滴全蛋白用鸟枪法质谱鉴定,并进行功能分类。Retinol和OA处理LX-2细胞,提取的脂滴和Control比较,做质谱半定量分析,分析LX-2细胞活化逆转前后脂滴蛋白的变化。研究结果:第一部分研究发现,肝实质细胞的脂滴尺寸在200nm～3000nm范围,不同大小的脂滴含有不同的中性脂成分,其中尺寸大的脂滴胆固醇酯含量更高,而尺寸小的脂滴甘油叁酯含量更高。银染和Westernblot结果显示,不同大小脂滴的蛋白组成也有差异,小脂滴和内质网、线粒体的关系更为密切。最后用质谱半定量方法将中性脂成分差异较大的两种脂滴进行比较蛋白质组学分析,发现在肝实质细胞中,富含胆固醇酯的脂滴比富含甘油叁酯的脂滴具有更多代谢相关的酶。第二部分研究发现,retinol和OA处理可以使原代肝星状细胞和LX-2细胞的脂滴增多增大,retinol主要增加视黄醇酯(retinol esters,REs)的含量,OA主要增加甘油叁酯(TAG)的含量;retinol和OA都可以抑制原代肝星状细胞的活化进程,也可以逆转完全活化的 LX-2 细胞。PLIN3、3 beta-hydroxy steroid dehydrogenase type 7(3-β-HSD7)、7 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 17(7-β-HSD17)和retinol dehydrogenase 14(RDH14)是新发现的肝星状细胞的脂滴主要蛋白。经OA处理后,LX-2的脂滴蛋白数量显着减少。根据脂滴蛋白对retinol和OA的反应,我们把 465 个蛋白分在 11 个组中,其中 PLIN3 和 autophagy-related protein 2 homolog A(Atg2A)可能参与调控肝星状细胞的活化。由此,我们建立了一个完整的肝星状细胞脂滴蛋白资料库,发现多个可能参与星状细胞活化的脂滴蛋白,为研究脂滴和肝星状细胞活化相关性提供依据。研究结论:正常肝实质细胞内脂滴尺寸在200 nm～3000 nm范围,尺寸大的脂滴胆固醇酯含量更高,而尺寸小的脂滴主要含甘油叁酯。并且尺寸小的脂滴和内质网、线粒体的关系更为密切。富含胆固醇酯的脂滴行使更多的胆固醇代谢功能,而富含甘油叁酯的脂滴可能更多的作为甘油叁酯储存的细胞器。肝星状细胞的脂滴和其活化具有相关性,维持肝星状细胞脂滴的中性脂含量,无论是增加视黄醇酯还是甘油叁酯的量,都可以抑制肝星状细胞的活化。我们建立了一个完整的和肝星状细胞活化相关的脂滴蛋白资料库,其中PLIN3和Atg2A蛋白有可能参与调控肝星状细胞的活化。(本文来源于《浙江大学》期刊2017-05-01）
艾伟伦[8]（2017）在《肝刺激因子通过抑制肝脏星状细胞活化减轻肝脏纤维化的研究》一文中研究指出背景和目的肝脏受到损伤后,肝实质细胞发生坏死或凋亡,诱发炎症反应,分泌多种细胞因子,进而刺激静息状态的肝星状细胞(hepatic Stellate Cell,HSC)发生活化,进一步转分化为肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)。肌成纤维细胞可以分泌大量包含胶原在内的细胞外基质,导致肝脏纤维化。由此可见,HSC活化是肝纤维化发生与发展中的核心事件。鉴于HSC在肝脏纤维化发生发展过程中的重要作用,研究其活化的分子机制将有助于逆转或治疗肝脏纤维化。肝刺激因子(hepatic Stimulator Substance,HSS)是一种能刺激肝细胞增殖的生物活性物质。近期报道显示,HSS可通过保护线粒体膜孔道,维持细胞内钙离子稳态抑制细胞凋亡,发挥肝细胞保护作用,因而被认为是肝细胞内重要的存活因子(survival factor)。HSS与肝纤维化的发生发展也有一定关系。在小鼠肝纤维化模型中,过表达HSS可显着地减轻纤维化症状,而敲减HSS可明显加重小鼠CCl4和胆总管结扎诱导的肝纤维化(本实验室未发表资料),但HSS在肝脏纤维化发病与演化过程中的机制依然没有清楚地阐明。鉴于有报道称,HSS在肝实质细胞和HSC内均存在表达,我们不禁要问,HSS能否通过抑制肝星状细胞活化来达到减轻抑制肝脏纤维化的目的?为此,本实验培养HSC,通过调节其细胞内HSS表达水平,研究HSS对HSC活化的影响,并探讨其对肝纤维化产生的影响。本实验旨在从全新视角揭示HSS与HSC活化的关系,为预防及治疗肝纤维化提供理论基础。方法1、细胞模型的建立:选择并培养具有活化表型的肝星状细胞(LX-2)细胞系,并通过稳定转染的方法构建HSS高表达(HSS-Tx)和HSS敲减(HSS-sh RNA)的LX-2细胞系。2、HSC活化分子标记物的鉴定:通过western blot的方法检测HSS-Tx和HSSsh RNA细胞中HSC活化分子标记物a-SMA和Ⅲ型胶原的表达,以研究HSS与HSC活化之间的关系。3、活化型HSC细胞特征的检测:HSC活化特征包括增殖加快、迁移增强和凋亡减少。通过流式细胞仪分析细胞周期、MTS实验测定细胞活力和免疫荧光检测Ki67的阳性细胞数,研究HSS-Tx和HSS-sh RNA细胞增殖能力的变化;通过Transwell和Xcelligence实验检测两组细胞迁移能力的改变;并检测caspase-3/7活性以分析两组细胞的凋亡情况。4、HSS影响HSC活化的分子通路的探究:分别利用磷酸化MAPK抗体芯片和磷酸化酪氨酸激酶抗体芯片检测两组细胞差异活化的关键蛋白质,以研究HSS影响HSC活化的分子通路。5、HSS影响HSC细胞迁移的机制研究:分别利用高内涵细胞成像分析技术和激光共聚焦扫描显微镜检测细胞微丝的分布,纤维状-肌动蛋白(F-actin)和球状-肌动蛋白(G-actin)的含量,以分析两组细胞微丝的变化及其与迁移的关系。胞浆钙离子与微丝装配及细胞迁移关系密切,利用钙离子示踪剂显示胞浆内钙离子含量,反映钙离子变化和细胞运动的关系。6、HSS影响HSC线粒体动态性及线粒体钙离子的研究:HSS定位于HSC的线粒体,为探讨HSS是否通过影响线粒体功能进而改变HSC细胞迁移能力,首先利用活细胞染料标记两组细胞内的线粒体,并用激光共聚焦扫描显微镜和配套软件分析细胞的线粒体形态,通过ATP含量测定及Seahorse实验检测线粒体功能的变化,并使用线粒体钙离子示踪剂测定两组细胞线粒体钙离子的分布情况。7、回复实验:为进一步确定上述实验获得的实验结果,利用RNAi的方法抑制HSS-Tx细胞内HSS的表达,重复5和6的实验,即测定细胞内微丝的含量及分布,线粒体形态的变化等。结果1、Western blot结果显示,HSS转染的LX-2细胞(HSS-Tx)中HSS表达明显高于vector细胞,而且HSS-sh RNA转染的LX-2细胞(HSS-sh RNA)中HSS表达显着低于vector细胞,且在传代过程中能维持HSS高表达或低表达状态,说明细胞模型构建成功,可用于后续实验。2、Western blot结果显示,HSS-Tx细胞中a-SMA(P<0.05)和III型胶原(P<0.01)的表达明显低于HSS-sh RNA细胞,说明HSS可抑制HSC的活化。3、MTS法测定细胞活力结果显示,HSS-Tx组细胞活力在传代后36 h开始弱于HSS-sh RNA细胞(P<0.01),而且这种状况一直持续至72 h(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,HSS-Tx组G0/G1期细胞比例明显多于HSS-sh RNA细胞。与此类似,其Ki67阳性细胞数也明显少于HSS-sh RNA(P<0.05)。Transwell实验结果显示,在相同时间内穿过小孔的HSS-Tx细胞数目明显少于HSS-sh RNA细胞,同样Xcelligence实验结果显示在接种后1 h至25 h,HSS-Tx细胞的迁移能力均明显弱于sh RNA细胞(P<0.0001),以上结果提示转染HSS基因可以抑制LX-2细胞的增殖及迁移。4、磷酸化MAPK通路抗体芯片结果显示,高表达HSS与敲减HSS两组细胞中,包括ERK,P38和AKT等在内的18种信号分子的磷酸化水平未见明显差异,而71个磷酸化酪氨酸激酶抗体芯片结果显示HSS-sh RNA细胞中Blk,Fyn,TNK1,FAK和TXK等与微丝装配相关激酶的磷酸化水平明显高于HSS-Tx组,提示HSS可能通过抑制上述激酶的活性,从而限制微丝装配。5、利用荧光标记的鬼笔环肽来标记HSS-Tx和HSS-sh RNA细胞内F-actin,通过高内涵细胞成像系统和激光共聚焦扫描显微镜显示F-actin含量和分布。结果显示,HSS-Tx组细胞内微丝数目明显少于HSS-sh RNA组(P<0.01),而且分布更为不规则。利用同样的方法标记细胞内G-actin,结果显示HSS-Tx组细胞内G-actin的含量显着高于HSS-sh RNA组,提示HSS抑制HSC细胞微丝的装配,减少应力纤维的生成。细胞免疫荧光实验显示HSS-Tx组细胞内胞浆内钙离子的含量明显少于HSS-sh RNA组(P<0.001)。6、利用Mito-tracker特异性标记活细胞线粒体,通过激光共聚焦扫描显微镜成像和相关软件分析显示,与HSS-sh RNA细胞相比,HSS-Tx细胞内线粒体形态变得更短而且更圆(P<0.0001),而且Western blot结果显示,与线粒体融合相关的MFN-2表达降低(P<0.01),说明HSS抑制了HSC细胞线粒体融合。测定细胞内线粒体氧代谢(采用Seahorse仪器),结果显示,HSS-Tx细胞的基础代谢能力下降,ATP含量明显低于HSS-sh RNA细胞(P<0.0001)。线粒体融合受到抑制,不仅使线粒体功能受到破坏,而且也影响到线粒体钙离子稳态,进而影响整个胞浆钙离子稳态。利用线粒体钙离子示踪剂显示HSS高/低表达细胞内线粒体内钙离子的变化,结果显示,HSS-Tx细胞线粒体内的钙离子浓度明显低于HSS-sh RNA细胞(P<0.0001)。7、Western blot结果显示,HSS-Tx细胞转染HSS si RNA pool后,HSS表达明显下调。转染HSS si RNA pool 3 d后,激光共聚焦扫描显微镜成像结果显示微丝分布开始变得规则,微丝含量明显增加,这些改变持续至转染7 d,而且更为明显。同样转染3 d后,线粒体开始变长,转染7 d时,线粒体形态改变最为明显;与之对应,细胞内ATP含量增加。结论1.HSS可以抑制HSCs活化。2.HSS破坏HSCs的线粒体动态性,使ATP合成减少,线粒体内钙离子含量下降,进而降低胞浆内钙离子浓度,抑制微丝装配,使HSCs活化与迁移能力下降。(本文来源于《首都医科大学》期刊2017-05-01）
Brandon-Warner,E,邵爽,王中峰[9]（2016）在《肝星状细胞中的miR17-92基因簇可促进酒精性肝损伤的肝脏纤维化进程》一文中研究指出酒精及酒精的代谢产物可导致肝损伤及纤维化,纤维化的调节是通过肝星状细胞(HSC)活化引起mRNA、miRNA(miR)表达的改变。miR存在于细胞或穿梭于外泌体中,可在组织培养基和生物流体中检测到。目前对肝损伤时miR的加工和差异性表达及其下游效应的机制仍知之甚少。来自北卡罗来纳的Brandon-Warner E等进行了相关研究,初级miR17-92(pri-miR17-92)以及基因簇中单个成员(如miR17a、18a、19a、20a、19b和92),都可在原代HSC和肝组织的人类LX2细胞进行表达,这些细胞来自(本文来源于《临床肝胆病杂志》期刊2016年09期）
李学冬[10]（2016）在《扶正化瘀胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎对患者肝功能、树突状细胞、门脉系统的影响及肝脏炎症和纤维化程度评价》一文中研究指出目的探讨扶正化瘀胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎对患者肝功能、树突状细胞、门脉系统的影响,并对肝脏炎症和纤维化程度进行评价。方法 134例慢性乙型肝炎患者随机分为恩替卡韦组和联合治疗组,每组67例。恩替卡韦组应用恩替卡韦片治疗,1次/d,0.5 mg/次,患者出现病毒血症或耐药突变,治疗剂量调整为1次/d,1.0 mg/次。联合治疗组在恩替卡韦组治疗基础上加用扶正化瘀胶囊,5粒/次,口服,3次/d。2组均连续治疗48周。观察2组治疗前后肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)和白蛋白(ALB)]、树突状细胞(MHC-DR、CD1a,CD83、CD86)水平和治疗前后门脉系统情况,对治疗后患者肝脏炎症和纤维化程度评价。结果 2组治疗后ALT、AST、TBIL水平明显低于治疗前,ALB水平高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。联合治疗组ALT、AST、TBIL水平明显低于恩替卡恩组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后MHCDR、CD1a,CD83、CD86水平显着高于治疗前,且联合治疗组高于恩替卡韦组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后门静脉直径、脾脏长度、厚度均低于治疗前,血流速度高于治疗前,联合治疗组脾静脉直径低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。联合治疗组治疗后门静脉、脾静脉直径,血流速度,脾脏长度与恩替卡恩组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后肝脏炎症和纤维化程度比较,差异有统计学意义(u值分别为4.7537、4.1778,P<0.05),其中联合治疗组肝脏炎症0级和纤维化程度1级发生率明显高于恩替卡恩组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论扶正化瘀胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎能够延缓患者肝功能损伤和纤维化程度、调节患者体内免疫应答,改善门脉系统血流和组织损伤,较单一应用恩替卡韦临床效果显着。(本文来源于《河北医药》期刊2016年13期）
肝脏星状细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:通过抑制肝脏库普弗细胞功能,监测脓毒症大鼠机体炎症反应及肠道树突状细胞的变化,进一步探讨其发生机制,为探究脓毒症发生发展中肝-肠互作机制,及脓毒症的救治新策略的提出奠定理论基础。第一部分:不同剂量氯化钆抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠机体炎症反应及肠粘膜固有层树突状细胞的影响方法:60只SD大鼠随机分为4组:假手术组、氯化钆预处理假手术组、脓毒症组和氯化钆预处理脓毒症组,每组6只大鼠。氯化钆预处理组分别于术前48小时和24小时通过尾静脉注射5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的氯化钆(GdCl_3),假手术组大鼠注射等量生理盐水。采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制脓毒症模型。术后24小时处死大鼠,利用ELISA法检测各组大鼠外周血清及肠组织炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10表达。组织病理学评价大鼠肠组织损伤。采用四型胶原酶消化的方法得到各组大鼠肠粘膜固有层树突状细胞(LPDCs)。采用流式细胞技术单标法检测各组大鼠LPDCs的CD103抗体阳性率,计算LPDCs数量。流式细胞技术双标法检测各组大鼠LPDCs表面主要组织相容性复合体(MHC)II及共刺激分子CD86的表达。结果:(1)血清及肠组织中,5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg GdCl_3抑制组促炎因子TNF-α和IL-6的表达相比脓毒症组显着下调(P<0.05),而抑炎因子IL-10的表达显着上调,40 mg/kg GdCl_3组促炎因子TNF-α和IL-6的表达显着高于其他组。(2)肠组织病理学评价,脓毒症组相较于假手术组肠组织炎症损伤显着加重。而5 mg/kg、10 mg/kg、20mg/kg的GdCl_3能显着减轻肠组织的炎症损伤,40 mg/kg的GdCl_3组肠组织损伤较脓毒症组显着加重(P<0.05)。(3)LPDCs的数量在CLP术后24小时显着减少(P<0.05),5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg组均能显着增加LPDCs的数量(P<0.05),40 mg/kg组的LPDCs数量较CLP组无显着差异。(4)相比于假手术组,CLP组MHC-II和CD86的表达显着上调(P<0.05),而20 mg/kg GdCl_3预处理组MHC-II以及CD86的表达较脓毒症组显着下调(P<0.05)。第二部分:抑制肝脏库普弗细胞功能对脓毒症大鼠机体炎症反应及肠道树突状细胞影响的时相性变化方法:72只SD大鼠随机分为4组,假手术组、GdCl_3预处理假手术组、脓毒症组和GdCl_3预处理脓毒症组,每组18只大鼠。GdCl_3预处理组,分别于术前48小时和24小时通过尾静脉注射20 mg/kg的GdCl_3,对照组大鼠注射同等剂量生理盐水。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症模型,各组分别于术后6 h、12 h及24 h处死6只大鼠。利用ELISA法检测各组大鼠外周血清及肠组织炎症因子TNF-α、IL-6及IL-10的表达。组织病理学评价大鼠肠组织炎症损伤。采用四型胶原酶消化的方法得到各组大鼠LPDCs,采用流式细胞技术单标法检测各组大鼠LPDCs的CD103抗体阳性率,计算LPDCs数量。流式细胞技术双标法检测各组大鼠LPDCs表面MHC-II及CD86的表达,检测LPDCs的凋亡率。Western Blot技术检测各组大鼠LPDCs自噬相关蛋白的LC3-II的表达。结果:(1)血清及肠组织中,CLP术后6 h开始TNF-α、IL-6及IL-10的表达较假手术组显着上调(P<0.05),24 h达到最高。GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能使促炎因子TNF-α和IL-6的表达在各时间点较脓毒症组显着下调(P<0.05),抑炎因子IL-10的表达显着上调(P<0.05)。(2)肠组织炎症损伤评价,在6 h、12 h、24 h脓毒症组相比于Sham组肠组织炎症损伤显着加重,GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能显着减轻了脓毒症大鼠各时间点的肠组织损伤。(3)CLP术后6 h LPDCs的数量显着增加,12 h达到最大(P<0.05),24 h显着减少,GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能在各时间点显着增加了脓毒症大鼠LPDCs的数量。(4)GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能明显抑制了各时间点脓毒症大鼠LPDCs表面MHC-II以及CD86的表达(P<0.05)。(5)GdCl_3抑制肝脏库普弗细胞功能显着降低了脓毒症大鼠各时间点LPDCs的自噬相关蛋白表达并下调其凋亡率(P<0.05)。结论:(1)GdCl_3可抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,其抑制程度呈剂量依赖。20mg/kg的GdCl_3可抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,且不会加重脓毒症大鼠机体过度炎症反应和肠组织损伤。(2)GdCl_3抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,可减轻脓毒症大鼠机体炎症反应及肠组织损伤。其机制可能与抑制脓毒症大鼠机体促炎因子TNF-α和IL-6的表达有关。(3)GdCl_3抑制脓毒症大鼠肝脏库普弗细胞功能,可降低LPDCs抗原提呈以及激活T细胞的能力,并可通过促进脓毒症大鼠外周DCs向肠道迁移并下调其自噬和凋亡水平从而维持LPDCs数量的稳定。其机制可能与促进抑炎因子IL-10的表达有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝脏星状细胞论文参考文献
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