鸭瘟病毒和番鸭细小病毒双重PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

为建立一种能同时鉴别鸭瘟病毒（DPV）和番鸭细小病毒（MDPV）的双重PCR方法,根据DPV UL6基因和MDPV NS-VP1基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度优化,建立了能快速检测DPV和MDPV的双重PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果表明:设计的两对特异性引物均能扩增出目的条带,其大小分别约为376 bp和624 bp;优化引物浓度组合为:DPV引物1.0μmol/L,MDPV引物2.5μmol/L,最佳退火温度为52.4℃。DPV和MDPV的核酸最低检出量分别为4 pg和173 pg,建立的双重PCR分别对鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭疫里默氏杆菌、沙门菌、大肠杆菌、葡萄球菌、鸭源巴氏杆菌核酸扩增结果均呈阴性;对实验室保存的9份临床病料检测结果DPV检出率33.3%（3/9）,MDPV检出率55.6%（5/9）。综上所述,建立的双重PCR方法特异性强、敏感性和稳定性较好,为DPV和MDPV的临床病料检测提供了技术支撑。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 毒株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 主要设备
•   1.4 核酸提取
•   1.5 引物合成
•   1.6 单一PCR扩增及产物鉴定
•   1.7 双重PCR的建立及反应条件的优化
•   1.8 特异性试验
•   1.9 敏感性试验
•   1.1 0 双重PCR方法的重复性
•   1.1 1 双重PCR方法的应用
• 2 结果
•   2.1 单一PCR扩增
•   2.2 多重PCR方法的建立及条件优化
•   2.3 特异性试验
•   2.4 敏感性试验
•   2.5 双重PCR方法的重复性
•   2.6双重PCR方法的初步应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴专伟,饶体宇,鲜思美,彭庆波,张友,包细明,李婷,张益,吴伯梅

关键词: 鸭瘟病毒,番鸭细小病毒,双重

来源: 中国家禽 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 贵州大学动物科学学院,贵州省动物疫病研究所

基金: 贵州大学大学生创新创业训练计划项目[贵大国创字(2018)014号],贵州省农业攻关项目[黔科合支撑(2016)2506号]

分类号: S852.65

DOI: 10.16372/j.issn.1004-6364.2019.12.004

页码: 17-21

总页数: 5

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