小龙虾主要过敏原精氨酸激酶的表达、纯化及免疫原性鉴定

小龙虾主要过敏原精氨酸激酶的表达、纯化及免疫原性鉴定

论文摘要

目的对纯化后的原核表达小龙虾主要过敏原蛋白精氨酸激酶进行免疫学鉴定。方法将化学合成的精氨酸激酶基因克隆至pET-28a(+)表达质粒上,转化进入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,使用异丙基硫代半乳糖苷进行目的蛋白的诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组过敏原蛋白进行纯化,使用小龙虾过敏病人混合血清对纯化后的蛋白进行免疫印迹鉴定。结果纯化得到了分子量大小约为40 kDa的重组小龙虾精氨酸激酶,并且重组蛋白与过敏病人血清IgE有明显的特异性结合。结论本实验建立了小龙虾精氨酸激酶的原核表达方法,并鉴定了其免疫原性,为小龙虾过敏的基础研究、临床诊断与治疗奠定了基础。

论文目录

  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  •   2.1 材料与试剂
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 基因合成及重组质粒的构建
  •     2.2.2 6His-PC-AK重组蛋白的诱导表达
  •     2.2.3 6His-PC-AK重组蛋白的纯化
  •     2.2.4 Western Blot鉴定6His-PC-AK重组蛋白的免疫原性
  • 3 结果与分析
  •   3.1 pET-28a (+) -PC-AK重组质粒的鉴定
  •   3.2 6His-PC-AK重组蛋白的诱导表达及纯化
  •   3.3 6His-PC-AK重组蛋白的免疫学鉴定
  • 4 结论与讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 曹会,龚祥,肖小军,刘志刚,陈同强

    关键词: 小龙虾,精氨酸激酶,重组蛋白,过敏原

    来源: 食品安全质量检测学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

    专业: 轻工业手工业,临床医学,内分泌腺及全身性疾病

    单位: 赣南医学院基础医学院组胚教研室,深圳大学过敏反应与免疫学研究所

    基金: 国家自然科学基金项目(81460252)~~

    分类号: TS201.6;R593.1;R446.6

    页码: 421-425

    总页数: 5

    文件大小: 3993K

    下载量: 180

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