植物干旱感受器OSCA1互作因子的筛选和鉴定

论文摘要

干旱是影响全球农林牧业发展及植物生态环境的主要因素。阐明植物抗旱分子机理,提高植物抗旱能力已成为我国发展农林牧业及保护植物生态亟需解决的重大科学问题。OSCA1作为第一个被发现的植物中的阳离子通道蛋白,探索植物抵御干旱胁迫的分子机理,具有非常重要的意义。然而到目前为止,OSCA1的生理机制仍然不清楚。鉴定已知蛋白的相互作用蛋白为探究其蛋白功能和分子机制提供重要依据。本实验主要利用多种国际先进和认可度高的筛选方法,筛选出OCSA1的互作因子之一:Calmodulin（CaM）,并进行更深层的生理机制分析。目前取得的成果如下:1.通过酵母双杂交（Y2H）、免疫沉淀-质谱联用（IP-MS）以及双分子荧光互补（BiFC）三种方法共同筛选出CaM是OSCA1的互作因子之一;2.通过钙成像系统分析处理以及动物细胞HEK293T异源体系后发现,CaM会促进OSCA1通道的闭合,从而使其介导的OICI（Osmotic Induced Calcium Increase）所引起的钙信号下降;3.通过Y2H,筛选出OSCA1与CaM的结合区域OSCA1（459-475）,并且之后发现CaM的结合区域不仅仅只有OSCA1（459-475）这么1处,OSCA1上还存在着4个CaM的结合区域。

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 1.引言
•   1.1 植物抵御干旱胁迫的机制
•     1.1.1 植物遭受日益严重的干旱胁迫
•     1.1.2 植物抵御干旱的分子机理
• 2+是植物响应环境变化最重要的信号分子'>    1.1.3 Ca²⁺是植物响应环境变化最重要的信号分子
•     1.1.4 钙通道可能是植物感受干旱缺水信号的关键因子
•   1.2 钙离子通道的研究进展
•     1.2.1 植物中钙离子通道调节机制的研究进展
•     1.2.2 动物中钙离子通道调节机制的研究进展
•     1.2.3 植物水感受器－OSCA1 的发现
•   1.3 Calmodulin（CaM）调节钙信号的研究进展
•   1.4 蛋白质相互作用实验技术的最新进展
•     1.4.1 酵母双杂交系统
•     1.4.2 免疫沉淀-质谱联用技术
•     1.4.3 双分子荧光互补系统
•   1.5 本研究的立题依据和意义
• 2.潜在的OSCA1 互作因子的筛选
•   2.1 膜系统酵母双杂交系统筛选潜在的OSCA1 的互作因子
•     2.1.1 实验材料
•     2.1.2 实验方法
•   2.2 利用IP-MS筛选潜在的OSCA1 互作因子
•     2.2.1 实验材料
•     2.2.2 实验方法
•   2.3 结果与分析
•     2.3.1 利用Y2H筛选到多个OSCA1 的潜在互作因子
•     2.3.2 利用IP-MS方法获得多个OSCA1 潜在的调节因子
•   2.4 讨论
• 3.验证CaM与 OSCA1 的相互作用
•   3.1 Y2H验证CaM与 OSCA1 的相互作用
•     3.1.1 实验材料
•     3.1.2 实验方法
•   3.2 BiFC验证CaM与 OSCA1 的相互作用
•     3.2.1 实验材料
•     3.2.2 实验方法
•   3.3 结果与分析
•     3.3.1 Y2H验证结果
•     3.3.2 BiFC验证结果
•   3.4 讨论
• 4.CaM对 OSCA1 介导的OICI的调节作用
•   4.1 CaM的特异性拮抗剂W7对OICI的影响
•     4.1.1 实验材料
•     4.1.2 实验方法
•   4.2 外源系统中CaM对 OSCA1 的调节作用
•     4.2.1 实验材料
•     4.2.2 实验方法
•   4.3 结果与分析
•     4.3.1 CaM对 OSCA1 介导的OICI起调节作用
•     4.3.2 外源系统中CaM仍对OSCA1 有调节作用
•   4.4 讨论
• 5.探寻OSCA1与CaM的结合区域CaMBD
•   5.1 实验材料
•   5.2 实验方法
•   5.3 结果与分析
• 6.总结
• 参考文献
• 附录
• 作者简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王柏荣

导师: 远方,裴真明

关键词: 酵母双杂

来源: 杭州师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 杭州师范大学

分类号: Q943

总页数: 56

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