DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

论文摘要

构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体（Lip-pOprF-VP22）,探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22对pVAX1-OprF-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体（Apt-Lip-pOprF-VP22）,检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）成熟的影响。结果表明,Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-pOprF-VP22粒径为（171.67±1.27）nm,Zeta电位为（11.30±0.57）mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。

论文目录

• 1 材 料
•   1.1 药品与试剂
•   1.2 仪 器
• 2 方 法
•   2.1 脂质体的制备
•   2.2 Lip-pOprF-VP22、Lip-pEGFP、Apt-Lip-pOprF-VP22的制备
•   2.3 琼脂糖凝胶阻滞分析
•   2.4 CCK-8法检测不同DOTAP/pDNA质量比Lip-pOprF-VP22的细胞毒性
•   2.5 不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pEGFP体外转染效果
•   2.6 Lip-pOprF-VP22的粒径、电位及多分散性检测
•   2.7 适配体的靶向性验证
•   2.8 免疫荧光法检测OprF-VP22抗原蛋白的表达
•   2.9 Western blot检测OprF-VP22抗原蛋白的表达
•   2.10 体外Apt-Lip-pOprF-VP22对小鼠BMDCs成熟的影响
•     2.10.1 BMDCs的诱导培养及鉴定
•     2.10.2 Apt-Lip-pOprF-VP22对BMDCs成熟的影响
•   2.11 统计学处理
• 3 结 果
•   3.1 琼脂糖凝胶阻滞分析
•   3.2 不同DOTAP/pDNA质量比Lip-pOprF-VP22的细胞毒性
•   3.3 不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pEGFP体外转染效果
•   3.4 Lip-pOprF-VP22的粒径、电位及多分散性检测
•   3.5 适配体的靶向性验证
•   3.6 OprF-VP22抗原蛋白的表达
•   3.7体外Apt-Lip-pOprF-VP22对小鼠BMDCs成熟的影响
•     3.7.1 BMDCs的诱导培养及鉴定
•     3.7.2 Apt-Lip-pOprF-VP22对BMDCs成熟的影响
• 4 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄仕琴,石敏,何颖娜,岳瀚勋,余娴

关键词: 铜绿假单胞菌,疫苗,靶向,适配体

来源: 中国药科大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 重庆医科大学附属第二医院Ⅰ期临床试验研究室,河北中医学院药学院,重庆医科大学药学院生物化学与分子药理学重点实验室

基金: 重庆市卫生计生委重点项目资助(No.2016ZDXM010)~~

分类号: R392

页码: 743-752

总页数: 10

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