王春玲张圣颖
（黑龙江省哈尔滨市阿城区疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨150000）
【摘要】链球菌是临床常见的致病菌，对链球菌属的检查方法试验方法进行分析。采用标本的直接涂片和分离培养方法进行检查。掌握正确的检验方法，科学地分离鉴定，为临床出作合理的诊断。
【关键词】链球菌属；微生物检验；试验方法
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）16-0391-02
链球菌属，亦属化脓性球菌中的一大类常见菌。为链状、单个或成双排列的革兰阳性球菌。分布广泛，存在于人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多不致病。少数可引起人类的化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏性疾病。
1.一般资料
对微生物实验室接收实验样本70例，其中咽拭子样本6例，痰液样本24例，分泌物16例，穿刺液4例，尿液14例、脑脊液1例，血液培养15例。其中门诊患者样本4例，住院患者样本64例。细菌培养结果：阳性24例，阳性率34.2%，其中链球菌属阳性为2例。
2.检查方法
标本的直接涂片，革兰染色后镜检，如符合链球菌形态且无正常菌群污染的标本可初报。分离培养，血液标本须先增菌培养；其他标本多采用羊血平板，有利于识别溶血性。初代分离需用5％的CO2、35～37℃环境中孵育24h观察菌落性状[1]。
3.试验方法
3.1溶血性检查
溶血性是鉴定球菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。1919年Brown对溶血性进行了描述。
3.1.1菌种
α溶血或称甲型溶血，在血平板上，菌落周围部分红细胞被破坏，呈现一个草绿色环。β溶血或称乙型溶血，在血平板上，菌落周围红细胞完全溶解，呈现一个清楚透明溶血环。γ溶血或称丙型溶血，血平板上，菌落周围无红细胞溶解，因而无溶血环。溶血性的识别可在血平板表面菌落周围和穿刺处通过肉眼观察，也可用显微镜观察。除在分离血平板上观察菌落周围的溶血性外，还可用以下方法确认。
3.1.2材料
羊血平板。
3.1.3方法
将标本接种于羊血平板上，用接种针在已接种过的血平板上扎2～3处，使细菌被接种到琼脂层深处，35℃环境中孵育过夜。
3.1.4观察结果
在接种针穿刺过处，羊红细胞完全溶解，形成无色透明区，为β溶血。羊红细胞部分溶解呈草绿色的环，为α溶血。羊红细胞不溶解、无溶血环，为γ溶血。
3.2Optochin敏感试验
3.2.1材料
Optochin(ethylhydrocupreineHCL)纸片(直径6mm)，每片含5μg。血平板。
3.2.2方法
挑取被检菌落，涂在血平板上，贴Optochin纸片于接种处，35℃、5％～10％的CO2环境中孵育18h。
3.2.3观察结果
抑菌环直径≥14mm为敏感，推断肺炎链球菌。抑菌环直径<14mm时参照胆汁溶菌，或为其他草绿色链球菌。
3.3杆菌肽敏感试验
3.3.1材料
含0.04U／片的杆菌肽纸片，血平板。
3.3.2方法
挑取被检菌落，密涂于血平板上，接种量应大，以免出假阳性。贴上杆菌肽纸片，35℃环境中过夜[2]。
3.3.3观察结果
形成抑菌环为敏感，则被检菌推断为A群链球菌。
3.4CAMP试验
3.4.1材料
血平板，金黄色葡萄球菌ATCC25923。
3.4.2方法
在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌3mm处垂直接种一短线。用同样方法接种阴性和阳性对照菌。35℃环境中孵育过夜。
3.4.3观察结果
在被检菌接种线与金葡菌接种线之间有一个矢形(半月形)加强溶血区，此即CAMP试验阳性。阴性无加强溶血区。
3.5胆汁-七叶苷试验(平皿法或斜面法)
3.5.1方法
接种被检菌1～3个菌落于胆汁-七叶苷试验平板或试管中，置35℃环境中，孵育24～48h。
3.5.2观察结果
培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性[3]。
3.5.3注意事项
接种细菌量不能过大。本试验是测定细菌在胆盐中生长情况及同时分解七叶苷的能力，如接种菌量过大，细菌不需要生长而本身固有的酶足以造成七叶苷分解，出现假阳性结果。
3.6七叶苷试验
3.6.1方法
同胆汁-七叶苷试验：接种被检菌于培养基中，35℃过夜。
3.6.2观察结果
培养基变黑为阳性，不变为阴性。
3.76.5％NaCl生长试验
本试验是测定细菌在高盐中的生长能力，葡萄糖作为是否生长的指示剂。
3.7.1方法
接种被检菌，35℃环境中孵育过夜。
3.7.2观察结果
培养基上生长出菌落并变黄色为阳性，不变色为阴性。
3.7.3注意事项
本试验细菌接种量不能过大；否则，细菌并不需要繁殖即可使葡萄糖产酸，培养基变色，导致假阳性结果。
3.8色素试验
色素试验在鉴定B群链球菌的几个方法中，特异性最好。这是Noble改良的Islam法。
3.8.1方法
接种被检菌，35℃环境中过夜培养。
3.8.2观察结果
B群链球菌形成橙色菌落及其周围的培养基呈黄色为阳性，该法阳性率可达93％～97.7％。
4.讨论
革兰阳性球菌，直径0.5～1.0μm，链状排列(链的长短和细菌的种类及生长环境有关)无芽胞、无鞭毛，多数菌株早期有荚膜。营养要求较高，须在培养基中加入血液、血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质；多为兼性厌氧；最适温度35℃，最适pH值为7.4～7.6，液体培基中多为絮状或沉淀生长，易形成长链状；血平板上可形成灰白色、表面光滑圆形、凸起，边缘整齐较小的菌落，有的似针尖状大小；菌落周围出现不同溶血环。触酶阴性，有较强的生化活性，能分解多种糖类、蛋白质和氨基酸。
链球菌溶素可溶解红细胞、破坏白细胞和血小饭的作用。又分为溶血素O(SLO)和溶血素S(SLS)。前者对氧敏感，对心肌有毒性作用，可引起急性肾小球肾炎和风湿热，测其抗体可作为链球菌感染的指标之一。后者是一种小分子多肽，无抗原性，但对白细胞及多种组织有毒性[4]。
致热外毒素又称红疹毒素或猩红热毒素，是猩红热的主要毒性物质。其特点为：致热作用；细胞毒作用；增加动物对内毒素的敏感性；产生皮肤红疹；有较强的抗原性。M蛋白具有抗吞噬作用；于心肌、肾小球基底膜有共同抗原，故与某些超敏反应有关。A群溶血性链球菌是致病性最强的一种链球菌，可经飞沫、伤口和污染食物引起各种化脓性感染。如急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病软组织感染、扁桃体炎、脑膜炎及产褥热等。无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌：早发型新生儿感染多以肺炎为主，晚发型以脑膜炎和败血症为主；对成人多为引起肾盂肾炎、子宫内膜炎、糖尿病和免疫功能低下者。其他酶类还可产生透明质酸酶、链激酶、链道酶等有利于细菌扩散等物质。
【参考文献】
[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解[M].第2版.上海：上海科学技术出版社：2007.230.
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社.2006.190.
[3]喻刚董太明全家妩.A群链球菌疫苗的研究进展[J].中国生物制品学杂志.2009,22(8).830-831.
[4]曹阳佩.颗粒链球菌属的研究进展[J].华西口腔医学杂志.2011,29(6):665-669.