果聚糖蔗糖酶基因的克隆表达及酶学性质分析

论文摘要

将来源于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）的果聚糖蔗糖酶（levansucrase）基因进行克隆,并将其在Escherichia coli BL21（DE3）中表达。对发酵产酶后的菌体进行破壁和离心,粗酶液经镍柱纯化后,进行酶学性质研究。结果表明,重组酶的水解酶活和转移酶活最适温度分别为45℃和40℃,最适pH分别为6.5和6.0。此外,果聚糖蔗糖酶的Km和Vmax分别为150.74mmol/L和21.23μmol/（mL·min）。最后,在pH 6.0、40℃条件下,果聚糖蔗糖酶催化反应12 h后,体系中果聚糖质量分数可达34.05%。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 主要试剂
•     1.1.4 主要仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 Levansucrase基因克隆及重组载体构建
•     1.2.2 Levansucrase的表达
•     1.2.3 Levansucrase的纯化
•     1.2.4 Levansucrase酶活测定
•     1.2.5 高效液相色谱
•     1.2.6 温度和p H对重组LSase酶活的影响
•     1.2.7 酶动力学参数测定
•     1.2.8 LSase催化底物反应
• 2 结果与讨论
•   2.1 Levansucrase基因的克隆及重组载体的构建
•   2.2 重组质粒的诱导表达
•   2.3 重组蛋白质的分离纯化
•   2.4 温度对重组酶活性的影响
•     2.4.1 最适反应温度
•     2.4.2 温度稳定性
•   2.5 pH对重组酶活性的影响
•     2.5.1 最适反应pH
•     2.5.2 pH稳定性
•   2.6 果聚糖蔗糖酶动力学参数的测定
•   2.7 LSase催化反应
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐君,张言周,黎循航,管政兵,蔡宇杰,廖祥儒

关键词: 果聚糖蔗糖酶,解淀粉芽孢杆菌,重组表达,性质

来源: 食品与生物技术学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江西农业大学生物科学与工程学院

基金: 江苏省产学研前瞻项目(BY2014023-28),无锡市科技发展农业支撑项目(CLE01N1310)

分类号: Q78;Q55

页码: 124-129

总页数: 6

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